梅毒血清固定患者中NOD样受体蛋白3和Toll样受体4表达与Th1/Th2相关细胞因子的相关性研究

目的探究梅毒血清固定患者中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、Toll样受体4(TLR4)表达与辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)相关细胞因子的相关性。方法选取2021年2月至2022年4月川北医学院附属三台医院收治的197例梅毒患者作为研究对象。将进行驱梅治疗后血清转阴者纳入转阴组(n=88),未进行驱梅治疗者纳入梅毒组(n=45),接受驱梅治疗后血清固定者纳入固定组(n=64)。另选取同期进行体检的健康人作为对照组(n=53)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测外周血单个核细胞(PBMCs)中NLRP3、TLR4 mRNA相对表达水平;采用酶联免疫吸附试验法检测Th1/Th2相关细胞因子的表达水平;采用Pearson法分析TLR4、NLRP3 mRNA与Th1/Th2相关细胞因子的相关性。结果各组PBMCs中TLR4、NLRP3 mRNA表达水平比较,梅毒组>转阴组>对照组>固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);各组白介素(IL)-2、γ干扰素(IFN-γ)水平比较,对照组>转阴组>梅毒组>固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);各组IL-1β、IL-4、IL-10及IL-18水平比较,对照组<转阴组<梅毒组<固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);梅毒血清固定患者TLR4、NLRP3 mRNA表达与IFN-γ、IL-2呈正相关,与IL-1β、IL-4、IL-10、IL-18呈负相关(P<0.05)。结论梅毒血清固定患者NLRP3、TLR4 mRNA表达水平显著降低,且与Th1/Th2相关细胞因子密切相关。

2型糖尿病患者血清SFRP-4和CHI3L1水平对糖尿病视网膜病变的评估价值

目的:探讨2型糖尿病(DM)患者血清分泌型卷曲蛋白-4(SFRP-4)、壳多糖3样蛋白1(CHI3L1)水平与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。方法:前瞻性研究。选取2018-10/2023-10本院收治的DR患者103例为DR组,其中DR早期39例,DR中期42例,DR晚期22例;选取单纯2型糖尿病患者98例为DM组,同期选取健康体检者101例为对照组。收集各组受试者基线资料及临床指标。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清SFRP-4、CHI3L1水平。结果:DR组患者血清SFRP-4、CHI3L1水平及TG、LDL-C、HbA1C、FPG、HOMA-IR均高于DM组和对照组(均P<0.05);DM组患者血清SFRP-4、CHI3L1水平及TG、LDL-C、HbA1C、FPG、HOMA-IR均高于对照组(均P<0.05)。DR晚期患者病程、TG、LDL-C、HbA1C、FPG、HOMA-IR、SFRP-4、CHI3L1均高于DR中期、DR早期(均P<0.05)。DR患者血清SFRP-4、CHI3L1水平与病程、TG、LDL-C、HbA1C、FPG、HOMA-IR、DR分期均呈正相关(均P<0.05)。血清SFRP-4、CHI3L1及联合诊断DR的曲线下面积(AUC)分别为0.809、0.801、0.898。血清SFRP-4、CHI3L1水平是影响DR发生的危险因素(P<0.05)。结论:血清SFRP-4、CHI3L1水平与2型糖尿病患者DR关系密切,二者水平升高提示患者发生DR的风险较高。

MSCT特征及血清GPX3、TIMP-2、FGFR-4与甲状腺癌TNM分级的相关性

目的研究多层螺旋CT(MSCT)特征及血清谷胱甘肽过氧化物酶3(GPX3)、金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)、成纤维生长因子受体4(FGFR-4)与甲状腺癌TNM分级的相关性。方法回顾性选择2018年1月至2020年12月于马鞍山十七冶医院诊治的甲状腺癌患者46例纳入实验组,其中Ⅰ+Ⅱ期27例,Ⅲ+Ⅳ期19例,同期于本院就诊的良性甲状腺良性结节患者46例纳入对照组。两组均行MSCT及血清GPX3、TIMP-2、FGFR-4诊断。观察两组MSCT特征,血清GPX3、TIMP-2、FGFR-4水平。观察实验组不同TNM分级患者MSCT特征,血清GPX3、TIMP-2、FGFR-4水平。分析甲状腺癌患者MSCT特征及血清GPX3、TIMP-2、FGFR-4水平与不同TNM分级的相关性。结果实验组病灶形态不规则比例、边缘不清晰比例、实性及囊实性比例、不均匀强化比例、砂砾样钙化比例及病灶数目多发比例分别为73.91%、82.61%、39.13%、76.09%、56.52%、84.78%,均大于对照组(8.70%、15.22%、4.35%、36.96%、6.52%、17.39%),差异均有统计学意义(P<0.05);两组病灶直径≥5 mm比例比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实验组血清GPX3、FGFR-4水平分别为(226.96±26.17)μg/L、(31.28±3.45)ng/mL,均高于对照组[(82.85±8.53)μg/L、(22.64±2.55)ng/mL],TIMP-2水平为0.43±0.06,低于对照组(0.75±0.08),差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ+Ⅱ期患者病灶形态不规则比例、边缘不清晰比例、实性及囊实性比例、不均匀强化比例、砂砾样钙化比例及病灶数目多发比例均大于Ⅰ+Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ+Ⅳ期患者病灶直径≥5 mm比例比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅲ+Ⅳ期患者血清GPX3、FGFR-4水平均高于Ⅰ+Ⅱ期患者,TIMP-2水平低于Ⅰ+Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关分析,病灶形态不规则、边缘不清晰、实性及囊实性、不均匀强化、砂砾样钙化、病灶数目及血清GPX3、FGFR-4水平与甲状腺癌患者TNM分级均呈正相关(P<0.05),血清TIMP-2水平与甲状腺癌患者TNM分级呈负相关(P<0.05);病灶直径≥5 mm与甲状腺癌患者TNM分级不相关(P>0.05)。结论甲状腺癌存在多种典型的MSCT特征及血清GPX3、TIMP-2、FGFR-4水平异常改变,且甲状腺癌病灶多种MSCT特征及血清GPX3、FGFR-4、TIMP-2水平与TNM分级显著相关。

GQDs/WS_(2)/Fe_(3)O_(4)磁分离适配体荧光传感器构建及其在甲胎蛋白中的应用

以聚乙二醇化石墨烯量子点标记的适配体(GQDs-PEG-Apt)作为甲胎蛋白(AFP)的特异性识别分子和能量供体,以WS_(2)/Fe_(3)O_(4)纳米复合物为单一能量受体,构建磁分离适配体荧光传感器并用血清AFP定量检测。样本中没有AFP时,能量供体与受体间π-π堆积作用和非辐射共振能力转移(FRET)令GQDs-PEG-Apt荧光猝灭;存在AFP时,GQDs-PEG-Apt与靶标结合并从WS_(2)/Fe_(3)O_(4)纳米复合物表面脱离,体系荧光强度得以恢复;经过磁性分离后,传感体系上清液487 nm处荧光强度随AFP浓度增大而增强;浓度在5~1000 ng/mL范围内,传感体系荧光相对恢复值与AFP浓度呈现良好的线性关系,线性相关系数为0.989。构建的传感器具有良好的特异性,可实现血清AFP定量检测,其检测限(LOD)为0.5 pg/mL,相对标准偏差(RSD)为3.32%~6.41%,回收率为91.92%~99.28%。

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基4、环氧合酶2在结直肠癌组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系

目的 探讨肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基4(ARPC4)、环氧合酶2(COX2)在结直肠癌组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法 收集96例结直肠癌患者的病历资料,所有患者均采用免疫组织化学染色法检测ARPC4、COX2表达情况,比较不同临床特征结直肠癌患者结直肠癌组织中ARPC4、COX2阳性表达率,采用回归分析法分析结直肠癌组织中ARPC4与COX2表达的相关性,比较不同ARPC4、COX2表达情况结直肠癌患者的3年生存率。结果 结直肠癌患者中ARPC4阳性表达率为61.46%(59/96),COX2阳性表达率为59.38%(57/96)。有淋巴结转移、低分化、Ⅲ~Ⅳ期结直肠癌患者结直肠癌组织中ARPC4、COX2阳性表达率均高于无淋巴结转移、中高分化、Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结直肠癌组织中ARPC4与COX2的表达呈正相关(r=0.618,P﹤0.05)。ARPC4阳性表达结直肠癌患者的3年生存率低于ARPC4阴性表达患者,COX2阳性表达结直肠癌患者的3年生存率低于COX2阴性表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论结直肠癌组织中ARPC4与COX2的表达呈正相关,其表达与结直肠癌患者的临床特征及预后有关。

穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠肾组织M型PLA2R和IgG4表达的影响及其机制

目的 分析穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠肾组织M型磷脂酶A2受体(Phospholipase A2 receptor, PLA2R)和免疫球蛋白G亚型4(Immunoglobulin G4,IgG4)表达影响及可能机制。方法 将40只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、贝那普利组(10 mg/kg)、低和高剂量穿山龙总皂苷组(80 mg/kg、160 mg/kg),每组各8只。除对照组,其余4组采用Border法制备膜性肾病模型,造模成功后,贝那普利组灌胃给予贝那普利10 mg/(kg·d),低和高剂量穿山龙总皂苷组分别灌胃给予穿山龙总皂苷80 mg/(kg·d)、160 mg/(kg·d),对照组、模型组灌胃给予10 ml/(kg·d)生理盐水。连续给药4周后,检测24 h尿蛋白、白蛋白、血肌酐、血尿素氮、尿酸水平,HE染色观察肾脏病理改变,蛋白免疫印迹法检测肾脏中M型PLA2R、IgG4、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphorylated phosphoinositide 3-kinase, p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylated protein kinase B,p-AKT)、核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶(Heme oxygenase-1,HO-1)表达水平。结果 与模型组比较,贝那普利组、高剂量穿山龙总皂苷组白蛋白水平明显升高,血肌酐、血尿素氮、尿酸水平明显降低,差异均有统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,贝那普利组、低剂量和高剂量穿山龙总皂苷组肾脏病理改变明显改善,24 h尿蛋白水平及肾脏中M型PLA2R、IgG4、p-PI3K、p-AKT表达水平明显降低,肾脏中Nrf2、HO-1表达水平明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠的肾脏具有保护作用,其机制可能与降低PLA2R、IgG4表达,抑制PI3K/AKT通路,激活Nrf2/HO-1通路相关。

轻度肾积水儿童肾脏水通道蛋白2、3和4的表达

目的探讨水通道蛋白2、3、4（AQP2～4）在儿童轻度积水肾脏（HnK）的表达。方法收集6例来自肾母细胞瘤周围的正常肾脏组织标本为对照组（男2例,女4例;平均60.33个月）,12例轻度肾积水患儿（男5例,女7例;平均14.58个月）的HnK标本为积水组（B超示集合系统分离均〈3.5cm,肾实质轻度变薄）。采用免疫组织化学法检测AQP2～4在正常肾脏和HnK中的定位及其表达情况。结果正常肾脏AQP2阳性着色主要分布于肾脏集合管上皮细胞胞膜和胞质,AQP3阳性着色主要分布于肾脏集合管主细胞的基底侧,AQP4阳性着色主要分布于肾内髓集合管上皮细胞基底侧。HnK中AQP2～4的表达阳性率均明显低于对照组（Pa〈0.05）。结论AQP2～4在儿童HnK组织中表达明显降低,提示AQP2～4的表达降低可能是引起HnK形态功能改变的早期因素之一。

C3、C4和β_2微球蛋白水平联合检测在脓毒症患者诊断和预后评估中的应用

目的探讨补体C3、C4和β_2微球蛋白(β_2-MG)水平联合检测在脓毒症患者诊断和预后评估中的应用价值。方法对357例脓毒症患者的临床资料进行回顾性分析,根据患者的病情分为轻度脓毒症组和重度脓毒症组,根据28d后患者的生存状况分为生存组和死亡组,分别检测各组患者血清中补体C3、C4和β_2-MG的水平并与180例健康对照者(健康对照组)进行对比,分析血清中补体C3、C4和β_2-MG联合检测在脓毒症诊断和预后评估中的应用价值。结果与健康对照组相比,脓毒症组患者补体C3和C4水平显著降低,且重度脓毒症患者C3和C4显著低于轻度脓毒症患者,而β_2-MG水平与C3和C4呈相反趋势(P<0.05);C3、C4和β_2-MG联合检测诊断脓毒症的曲线下面积(AUC)为0.96,优于各项指标单独检测的AUC(0.76、0.75和0.87)。死亡组脓毒症患者C3和C4水平低于生存组,β_2-MG水平高于生存组(P<0.05);C3、C4和β_2-MG联合评估脓毒症预后的AUC值为0.91,优于各项指标单独评估的AUC(0.67、0.71、0.85)。结论 C3、C4和β_2-MG联合检测在脓毒症诊断和预后评估中有重要价值,可在临床中广泛应用。

肌红蛋白在Nafion/Fe_3O_4-CdTe/CdS量子点复合膜内的直接电化学及其应用于H_2O_2的生物传感

利用磁性纳米Fe3O4和CdTe/CdS量子点结合Nafion的良好成膜性,将肌红蛋白(Mb)固定在玻碳电极表面制备成Nafion/Fe3O4-CdTe/CdS-Mb/GCE修饰电极。在pH 7.0的0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,固定在膜内的Mb表现出良好的直接电化学性质,在-0.351 V处有1对近乎可逆的氧化还原峰,为Mb中血红素辅基Fe(Ⅲ)/Fe(Ⅱ)电对的特征氧化还原峰,并显示了很好的稳定性。表明Nafion/Fe3O4-CdTe/CdS复合膜的微环境有利于Mb中Fe(Ⅲ)/Fe(Ⅱ)与电极之间的直接电子传递和Mb的固定。同时,探讨了该修饰电极表面固定的Mb对H2O2的催化还原,结果显示,该修饰电极可作为H2O2生物传感器,实现对H2O2的快速(响应时间小于5 s)、准确检测,灵敏度可达30.6 mA.L/mol,检出限(S/N=3)为0.89μmol/L。

不同阶段糖尿病肾病患者血清25-OH-D3、BMP2、RBP4及超声骨密度测定与分析

目的分析不同阶段糖尿病肾病(DN)患者血清25-羟维生素D3(25-OH-D3)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)、超声骨密度的变化。方法回顾性选取2020年1月至2022年1月保定市第一中心医院收治的40例单纯糖尿病患者为A组,40例DN微量尿蛋白患者为B组,40例DN大量尿蛋白患者为C组,40例正常体检者为对照组,比较4组骨代谢指标[总I型胶原氨基端延长肽(PINP)、β-I型胶原羧基端肽(β-CTX)]、骨密度指标(股骨近端骨密度)、血清25-OH-D3、BMP2、RBP4水平,并分析血清25-OH-D3、BMP2、RBP4与骨代谢指标、骨密度指标相关性。结果C组PINP水平为(24.53±6.02)μg/L,低于B组、A组、对照组[(28.97±5.11)、(32.59±5.81)、(33.54±5.46)μg/L],β-CTX水平为(420.15±42.86)μg/L,高于B组、A组、对照组[(387.65±49.87)、(326.87±42.07)、(336.58±36.15)μg/L],差异均有统计学意义(P<0.05);C组股骨近端骨密度为(0.71±0.11)g/cm2,低于B组、A组、对照组[(0.86±0.17)、(0.88±0.21)、(0.90±0.18)g/cm2],差异有统计学意义(P<0.05)。C组25-OH-D3、RBP4水平分别为(7.26±2.09)、(4.92±1.33)μg/L,低于B组[(12.38±2.84)、(7.42±2.21)μg/L]、A组[(12.99±3.01)、(7.67±2.06)μg/L]、对照组[(10.36±2.47)、(5.97±1.59)μg/L],BMP2水平为(40.07±5.81)μg/L、高于B组、A组、对照组[(37.11±5.29)、(34.05±6.27)、(33.25±6.14)μg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析,25-OH-D3、RBP4与PINP、股骨近端骨密度呈正相关(P<0.05),与β-CTX呈负相关(P<0.05);BMP2与PINP、股骨近端骨密度呈负相关(P<0.05),与β-CTX呈正相关(P<0.05)。结论DN患者随病情进展,骨量丢失增加,骨密度下降,血清25-OH-D3、BMP2、RBP4水平与骨密度、骨代谢有关,早期通过测定以上因子水平可敏感反映DN患者骨质变化,以便对骨质疏松尽早预防和诊疗。

化浊颗粒对2型糖尿病大鼠磷脂酰肌醇3激酶和葡萄糖转运蛋白4基因表达的影响

目的观察化浊颗粒对2型糖尿病(T2DM)大鼠磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)在骨骼肌组织中表达的影响,探讨其对PI-3K及GLUT4信号通路激活的作用。方法采用高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射建立T2DM大鼠模型,随机分为化浊颗粒组、罗格列酮组、模型组。各给药组给予相应药物灌胃,模型组与空白组予生理盐水灌胃,观察大鼠一般状态、体质量及摄食量。干预10周后,予10%水合氯醛麻醉大鼠,检测大鼠空腹血糖(FBG)、葡萄糖耐量试验餐后2 h血糖(2 h PG)、空腹胰岛素(FINS)水平;RT-PCR检测各组大鼠骨骼肌组织PI-3K和GLUT4 m RNA表达的水平。结果与模型组比较,化浊颗粒组与罗格列酮组大鼠FBG、2 h PG及FINS水平降低(P<0.05),PI-3K及GLUT4 m RNA表达水平升高(P<0.05)。结论化浊颗粒具有提高胰岛素敏感性的作用,与激活骨骼肌组织胰岛素信号传导通路中PI-3K和GLUT4 m RNA的表达有关。

传染性法氏囊病病毒上海超强毒株VP2-4-3基因真核表达质粒的构建与表达

应用Long and Accurate—PCR(LA-PCR)技术,扩增克隆了鸡传染性法氏囊病病毒上海超强毒(wIB-DV)的VP2—4—3基因。应用粘性末端连接策略,将VP2-4-3基因克隆人真核表达载体pALTER-MAX。经酶切鉴定,表明VP2-4-3基因为正向插入,位于CMV启动子下游。该真核表达质粒在脂质体的介导下转染Vero细胞,经特异性抗IBDV抗体的免疫荧光检测,发现在细胞内有特异蛋白表达。

磷脂酰肌醇3激酶及葡萄糖转运蛋白4在巴马小型猪2型糖尿病模型中的表达

目的观察高脂高糖饮食联合链脲佐菌素（STZ）多次注射诱导巴马小型猪2型糖尿病（T2DM）模型糖脂代谢情况以及骨骼肌、肝脏、胰腺组织磷脂酰肌醇3激酶（P13-K）及葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）的表达变化，探讨该模型的特征。方法10只健康雄性巴马小型猪，按随机数字表法分为对照组和糖尿病模型组，每组5只。T2DM模型组用高脂高糖饲料（蔗糖37％、猪油10％、胆固醇2％、普通饲料51％）喂养，11个月初腹腔注射STZ100mg／kg，1周后重复1次；对照组喂养普通饲料，同时腹腔注射等量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。两组实验期为12个月。检测两组动物空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）及血脂水平，采用胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）评价胰岛素抵抗（IR）情况，并检测骨骼肌、肝脏及胰腺组织P13-K及GLUT4的表达水平。结果给予高脂高糖饲料后模型组小型猪FPG、FINS、HOMA-IR、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平较对照组明显升高，注射STZ后，模型组动物FPG较对照组明显升高（mmol／L：11．46±1．64比4．64±0．47），FINS水平较对照组明显降低（μU／mL：6．57±0．33比8．11±0．28），差异均有统计学意义（均P〈0．01）。模型组骨骼肌、肝脏及胰腺组织P13-K、GLUT4蛋白表达水平较对照组明显降低[骨骼肌：P13-K为（6．55±1．81）％比（13．16±3．66）％，GLUT4为（42．34±10．62）％比（116．10±15．57）％，肝脏：P13-K为（6．79±1．73）％比（14．17±3．73）％，GLUT4为（40．35±16．81）％比（126．17±13．73）％，胰腺：P13-K为（5．71±1．51）％比（10．39±2．57）％，GLUT4为（38．90±16．69）％比（73．41±16．39）％，P〈0．05或P〈0．01]。结论采用高脂高糖饲料联合STZ多次注射可以成功诱导巴马小型猪T2DM模型，模型组小型猪存在明显IR及糖脂代谢紊乱，且模型组骨骼肌、肝脏及胰腺组织P13-K、GLUT4蛋白表达水平降低。

猪细小病毒3型VP2蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立

为建立检测猪细小病毒3型(PPV3)的间接ELISA方法,本研究选取PPV3 VP2多表位亲水区序列设计引物,扩增并原核表达该基因片段,以表达的重组蛋白作为包被抗原建立了PPV3间接ELISA抗体检测方法。结果显示,该检测方法仅对PPV3血清检测为阳性,与PPV1、PPV2、猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒等的标准阳性血清均无交叉反应,具有较强的特异性;批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,具有良好的重复性。本研究为临床上PPV3的检测提供了血清学检测手段。

鹅细小病毒VP2和VP3蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及验证

为筛选与鹅细小病毒VP2和VP3蛋白相互作用的鹅胚成纤维细胞蛋白,构建VP2和VP3蛋白的诱饵载体pGBKT7-VP2和pGBKT7-VP3。从pGEX-4T-VP1质粒中PCR扩增VP2和VP3基因,克隆至pMD-18T载体中,经测序验证鉴定后定向克隆到酵母双杂交载体pGBKT7中。将2个重组诱饵载体经PCR、酶切和测序验证后分别转化酵母菌H2YGold中,检测其在酵母细胞中有无自激活和毒性作用。结果表明:成功构建了pGBKT7-VP2和pGBKT7-VP3诱饵载体,且其对报告基因无自激活作用,对酵母细胞无毒性。由此说明,诱饵载体pGBKT7-VP2和pGBKT7-VP3可用于酵母双杂交系统筛选与VP2和VP3蛋白相互作用的细胞结合蛋白。

鹅细小病毒长春分离株主要结构蛋白(VP2-VP3)基因的原核表达

根据国外已发表的鹅细小病毒(GPV)A株基因组核苷酸序列,设计并合成了一对用于GPV主要结构蛋白(VP2-VP3)基因表达的引物。利用合成的引物,扩增并鉴定了GPV中国长春株(GPVCC株)的VP2-VP3基因。将扩增的目的基因插入到原核表达载体pET28(a)的多克隆位点,构建了表达GPVVP2-VP3基因的原核载体pEGVP1。重组表达载体质粒转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测到大小分别为75000和58000的表达蛋白带。Westernblot分析表明,表达产物具有很好的特异性。

CTLA-4增强鸭肝炎病毒VP3重组蛋白的免疫效应分析

为了评价载体pET-mLTA-CTLA-4对鸭肝炎病毒VP3重组蛋白的免疫增强作用,试验在载体pET-mLTA-CTLA-4上插入鸭甲肝病毒(DHAV)VP3基因,构建重组质粒pET-mLTA-VP3-CTLA-4并表达重组蛋白mLTA-VP3-CTLA-4,用不同剂量的mLTA-CTLA-4蛋白+DHAV-1活疫苗、重组蛋白mLTA-VP3-CTLA-4、DHAV-1活疫苗分别免疫1日龄非免健康雏鸭,用ELISA法定期检测不同免疫处理时鸭的血清抗体IgG及小肠黏膜抗体IgA并进行比较分析;将免疫后的血清与病毒中和后接种鸡胚,判断其免疫保护力。结果表明:重组蛋白mLTA-VP3-CTLA-4可诱导免疫鸭产生特异性IgG和IgA,但其产生的抗体水平稍低于mLTA-CTLA-4蛋白+DHAV-1活疫苗组,血清与病毒混合后能完全中和病毒,在保护试验中鸡胚未见死亡。说明表达的重组蛋白mLTA-VP3-CTLA-4能产生较好的免疫保护力。

As_2O_3对NB4细胞蛋白酶体β_1亚基的影响

本研究探讨As2O3对于NB4细胞蛋白酶体β1亚基的影响,以阐明As2O3在治疗急性早幼粒细胞白血病中的作用。以0.5μmol/LAs2O3干预NB4细胞,分别提取干预24小时及48小时后的总蛋白;以Western blot检测蛋白酶体β1亚基及PML-RARα融合蛋白表达变化,并进行灰度分析。结果表明:经As2O3干预的NB4细胞中蛋白酶体β1亚基表达在As2O3干预24小时后明显升高,48小时后回落至基线水平。PML-RARα融合蛋白表达在干预24小时后明显降低,48小时后维持在明显低水平。结论:As2O3对于NB4细胞中蛋白酶体β1亚基有诱导上调作用,且与As2O3诱导NB4细胞PML-RARα融合蛋白降解及NB4细胞分化凋亡有一定的关系。

中枢神经系统感染患儿脑脊液补体C_3,C_4和β-2微球蛋白联合检测的诊断意义

目的:研究小儿脑脊液(CSF)中补体C_3、C_4和β-2微球蛋白(β-2-MG)的含量与中枢神经系统(CNS)感染的关系,探讨联合检测该3项指标鉴别诊断脑膜炎类型的意义。方法:应用速率散射比浊法和化学免疫发光法分别检测37例病毒性脑炎(VE)、12例化脓性脑膜炎(PM)、11例结核性脑膜炎(TM)患儿和20例对照组健康儿童CSF的上述3项指标。结果:①VE组补体C_3、C_4含量大部分低于仪器最低检出值,其阳性率显著低于PM、TM组。对照组全部低于最低检出值。TM组C_3、C_4的监测值明显高于PM组,差异具有显著性(P<0.01)。②β-2-MG方差分析F=77.7,两两比较差异均有显著性(P<0.05),TM组>PM组>VE组>对照组。结论:CSF补体C_3、C_4和β-2-MG能够鉴别不同类型的脑膜炎,而联合检测可以提高诊断的准确性。

一步法扩增克隆IBDV上海超强毒VP2-4-3基因

分离、纯化了鸡传染性法氏囊病病毒超强毒 (vvIBDV)上海株SH95的病毒核酸dsRNA ,应用随机引物将RNA反转录成cDNA ,以此为模板一步扩增出A片段前体融合蛋白基因即VP2 4 3基因 ,将其克隆入 pGEM T载体 ,并进行序列分析 ,其与超强毒株HK4 6的核苷酸序列的同源性达 98% ,整个基因有 5个氨基酸差异 ,同源性达99.5 1% (10 0 7/ 10 12 )。