胸腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶mRNA检测及其意义

目的:通过检测良、恶性胸腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达情况,探讨其在良、恶性胸腔积液中的诊断价值。方法:采用逆转录-多聚酶链反应法检测39例恶性胸腔积液、16例良性胸腔积液中hTERT基因的表达情况。结果:恶性胸腔积液中hTERT基因的表达率明显高于良性胸腔积液(P<0.05)。检测hTERT基因表达对恶性胸腔积液的敏感性、特异性和诊断符合率分别为87.18%,81.25%和85.45%。结论:hTERT基因参与了恶性胸腔积液的发生、发展过程。采用RT-PCR法检测胸腔积液中hTERT基因表达有助于临床上良、恶性胸腔积液的鉴别诊断。

三种检测乙型肝炎病毒方法相关性探讨

目的:通过对乙型肝炎病毒检测酶免法、放免法、多聚酶链反应法三者的相互比较,提示三者的相关性。方法:血清标本分别采用酶免法、放免法、多聚酶链反应法进行检测。结果:酶免法两对半大三阳的模式中,HBV-DNA定量阳性率为91.67%,放免法乙肝八项检查相符率88.89%;两对半小三阳的模式中,HBV-DNA定性阳性率为40.00%,放免法乙肝八项检查相符率86.96%;两对半1.5阳性的模式中,HBV-DNA定性阳性率为83.33%,放免法乙肝八项检查相符率11.11%。结论:乙型肝炎病毒检测法酶免法、多聚酶链反应法、放免法三者密切相关,后两者更能完善和补充酶免法的不足。

流式磁珠PCR-SSOP方法HLA基因分型可疑结果的确认分析

目的对PCR-SSOP方法未明确HLA分型结果的可疑样本进一步分型,并分析原因。方法对采用PCRSSOP方法进行HLA分型出现的131例可疑样本采用LABScan3D分型方法进行检测。对于3D分型仍不能确定的样本采用PCR-SBT分型方法进行检测。结果 131例可疑样本分析,其中87例LABScan3D分型方法可确定分型结果,余下的44例采用PCR-SBT获得分型结果,3种分型方法检测结果在低分水平上是完全一致的。结论 LABScan3D分型方法在PCR-SSOP的基础上进一步发展,可代替其进行大量样本的HLA分型,但是仍有引物探针的局限,不能代替SBT的地位。

检测鸟疫衣原体的新方法

鸟疫是一种人类和禽类共患的传染病,近年来,由于抗生素的广泛应用给本病的诊断带来一定的难度,特别是隐性感染。为此,研制了一种诊断本病的新方法:即应用多聚酶链反应法,该法能直接发现衣原体,即使潜伏期也同样有很高的灵敏度,该法简便。

诊断李氏杆菌病的新方法

分离李氏杆菌的培养基是肉琼脂培养基,内含1％酵母渗出物。多粘菌素M25U/ml,亚碲酸钾占量1％,头孢唑啉钠25U/ml,新霉素60U/ml。为防止真菌生长而加入制霉菌素15U/ml。从市场上采集的奶、乳制品、

马鼻肺炎病毒的鉴定方法

齐巴诺夫等进行了运用多聚酶链反应法检测马鼻肺炎病毒DNA的研究。采集不同的病毒株,器官样品取自迫杀有轻瘫和全瘫症状的马匹,流产胎儿和病死幼驹。采用山羊、高鼻羚羊、仔猪、牛犊、猴、兔胚等肾脏的传代细胞作再接种细胞培养物。用核酸内切酶来裂解DNA。在0.6—1.10％琼脂凝胶中电泳分解病毒DNA及其碎片。

猿猴结核病的诊断方法

猿猴结核病常呈慢性经过,对其诊断通常采用下列方法:1,结核菌素在眼结膜或上眼睑以及皮内试验法,分24-48-72小时计算结果,充血、水肿为阳性;2.X线检查:可见特征性病变;3,取外周淋巴结穿刺液、洗胃液、痰和病灶脓性分泌物作细菌放大法检查,取病料先用酸或碱处理后。

肺癌患者外周血CK19mRNA、CEA、NSE、TPA联合检测的意义

背景及目的:细胞角蛋白作为检测循环癌细胞的指标,越来越得到人们的重视。CK19mRNA作为微转移检测的基因标记有较高的应用价值,但其特异性及敏感度都不够理想。本实验旨在评价外周血CK19mRNA与肿瘤标记物癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇酶(NSE)和组织多肽抗原(TPA)水平的联合测定对肺癌临床诊断的价值。方法:用逆转录多聚酶链反应法(RT-PCR)检测外周血有核细胞CK19mRNA的表达水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)和时间分辨荧光法(TRF)测定91例肺癌、33例良性肺病患者和50例健康人的血清CEA、NSE和TPA水平,数据统计用t检验和χ2检验分析。结果:肺癌组外周血CK19mRNA和血清CEA、NSE、TPA的阳性检出率(分别为49.5%、65.9%、67.0%、83.5%)明显高于良性肺病组(分别为24.2%、9.0%、15.2%、9.0%)和健康对照组(分别为10.0%、4.0%、8.0%、6.0%)(P<0.01)。在不同的组织类型中CK19mRNA阳性检出率无统计学差异。随着临床分期逐步升高,Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期CK19mRNA的阳性检出率分别为44.4%、48.4%、54.2%呈上升趋势,但无显著性差异(P>0.05)。在Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期血清CEA水平犤(μg/L)/阳性率(%)犦分别为3.5/27.8、5.1/35.5、8.5/58.3,血清NSE水平犤(μg/L)/阳性率(%)犦分别为12.5/33.3、15.3/41.9、24.7/58.3,血清TPA?

3株肺癌细胞中9个肿瘤相关基因的启动子甲基化状态和部分基因表达的相关性

目的 对 3株肺癌细胞中 9个肿瘤相关基因的启动子甲基化状态和部分基因表达的相关性进行评估。方法 通过甲基化特异性多聚酶链反应法 (MSP)结合DNA测序来确定 3株肺腺癌细胞株 (A5 4 9,SH77和SPE A 1)中 9个基因的启动子CpG岛的甲基化状态 :APC ,CDH13,DAPK1,MGMT ,MYOD1,p16 INK4a,p73,RAR β和WT1基因。同时采用半定量RT PCR的方法来量度下列 5个基因的表达 :CDH13,MGMT ,MYOD1,RAR β和WT1基因。结果 在 9个受检基因之中 ,下列 4个基因在三株细胞中均呈同样的甲基化谱式 :仅有去甲基化 :APC和DAPK1,以及兼有甲基化和去甲基化 :p73和p16 INK4a。而其余 5个基因则表现为不同的甲基化模式。尽管 ,这 5个基因的表达谱式大体上符合其启动子CpG岛甲基化的表达静息的原则 ,个别的例外亦是有的。这提示着与DNA甲基化状态无关的机制可能也会参与该基因的表达调控。

初发及复发转移大肠癌患者外周血MDR-1基因表达的研究

目的 :检测初发及复发转移大肠癌患者外周血中多药耐药基因 (MDR 1)的表达 ,探讨其与病理类型及化疗疗效的关系。方法 :应用逆转录多聚酶链反应 (RT -PCR)法对 5 6例初发大肠癌及 4 0例经术后辅助化疗后复发、转移大肠癌患者的外周血进行检测 ,并与其病理类型及化疗疗效作对比研究。结果 :5 6例初发大肠癌患者外周血中MDR 1阳性表达率为2 7 2 % ,与病理类型无显著相关 (P >0 0 5 ) ;但与肠系膜淋巴结转移密切相关 ,有淋巴结转移者阳性表达率显著高于无淋巴结转移者 (P <0 0 5 ) ;4 0例化疗后复发、转移患者外周血MDR 1阳性表达率为 72 5 % ,与初发大肠癌患者的MDR 1阳性表达率相比差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,且MDR 1的表达与化疗疗效呈负相关 ,MDR 1阳性表达者化疗疗效明显低于阴性表达者(P <0 0 5 )。结论 :大肠癌存在先天性和获得性多药耐药性 ;检测外周血MDR 1表达情况可以帮助预测化疗疗效 ,对制定临床化疗方案有指导意义。

脑C型利钠利尿肽的mRNA转录及其血浆表达水平在大鼠创伤性脑水肿中的改变

目的:观察创伤性脑水肿对脑组织中C型利钠利尿肽(CNP)mRNA转录水平的影响及与其血浆中CNP水平的相关性。方法:35只S-D大鼠随机分入对照组、创伤组。采用冲击加速机制复制重度脑创伤。创伤后1天组的脑CNP mRNA转录水平采用逆转录-多聚酶链反应法(RT-PCR)行半定量测定。并同时采用酶免疫分析法(EIA),观测伤后多时点的体内血浆CNP水平。结果:创伤后1天脑水肿期内,挫伤皮质,同侧丘脑,对侧皮质,对侧丘脑和延髓等部位,与对照组相比,其CNP mRNA转录水平无显著改变(P>0.05)。然而,创伤后1天与3天组血浆的CNP水平均较对照组有明显升高(P<0.05)。结论:尽管CNP一直被认为是一种神经肽,但可能并未参与创伤性脑水肿的病理过程。而全身循环中升高的血浆CNP水平可能为机体对重度脑创伤的反应之一,其作用主要通过循环系统发挥。

肺癌患者外周血CK19mRNA和CyFRA21-1水平的相关性研究

目的 研究肺癌患者外周血细胞角蛋白 1 9(CyFRA2 1 1 )水平和CK1 9mRNA表达水平的相关性 ,并评价其对肺癌临床诊断的价值。方法 用逆转录多聚酶链反应法 (RT PCR)和酶联免疫吸附法 (ELISA)分别测定 91例肺癌、33例良性肺病患者、50例健康人外周血CK1 9mRNA的表达水平和血清CyFRA2 1 1水平。结果 肺癌组患者CK1 9mRNA阳性率和CyFRA2 1 1水平明显高于良性肺病组 (P <0 .0 1 )和健康人组 (P <0 .0 1 )。而且临床分期越晚CK1 9mRNA阳性率和CyFRA2 1 1水平越高 ,CK1 9mRNA对肺癌早期较为敏感。各组织类型间CK1 9mRNA阳性率无显著差异 (P >0 .0 5) ,而CyFRA2 1 1对鳞癌敏感性高于其他类型。结论 肺癌患者外周血细胞角蛋白 1 9(CyFRA2 1 1 )水平和CK1 9mRNA表达水平呈正相关性 。

成牙本质细胞系MDPC-23的生物学特性

目的 :观察成牙本质细胞系MDPC - 2 3的生物学特性。方法 :细胞培养 ,细胞计数和逆转录多聚酶链反应。结果 :MDPC - 2 3为上皮样细胞形态 ,有多个细胞膜突起 ,易形成细胞结节 ,细胞倍增时间少于 2 4h。在mRNA水平证实MDPC - 2 3表达Ⅰ型原胶原a2、碱性磷酸酶和牙本质涎磷蛋白。结论 :MDPC - 2

LPS介导的人牙周膜成纤维细胞损伤过程中TRAF-6基因的表达

目的观察不同浓度LPS干预下,肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)在人牙周膜成纤维细胞中基因表达和定位情况。方法体外分离培养人牙周膜成纤维细胞并鉴定,采用逆转录多聚酶链反应法(RT-PCR)和计算机图像分析方法,动态观察TRAF-6在不同浓度LPS干预下的表达和定位特点。结果随LPS干预浓度由0.1μg/ml增加到100μg/ml,TRAF-6基因条带表达为先逐渐增高然后又降低的趋势。结论本实验说明TRAF-6在LPS引发的牙周膜成纤维细胞炎症损伤中可能发挥重要的作用,TRAF-6可能是一种影响牙周膜成纤维细胞分化的胞内信号转导分子。

下丘脑-垂体-肾上腺轴大鼠下丘脑 CRH mRNA 表达

目的探讨下丘脑垂体肾上腺轴（ＨＰＡ轴）受抑状态下下丘脑ＣＲＨｍＲＮＡ的表达。方法本研究采用较新颖的逆转录多聚酶链反应（ＲＴＰＣＲ）化学发光定量法，检测了ＨＰＡ轴受抑大鼠下丘脑室旁核ＣＲＨｍＲＮＡ的表达。结果ＨＰＡ轴受抑大鼠下丘脑室旁核ＣＲＨｍＲＮＡ的表达量明显比正常对照组减少，且ＲＴＰＣＲ化学发光定量法能较灵敏地检测出ＣＲＨｍＲＮＡ低水平表达含量。结论这种新的ＰＣＲ定量分析技术为在分子水平研究神经内分泌功能紊乱提供了灵敏、准确、可靠的方法。

猫衣原体病的诊断

诊断衣原体病最直接的方法是以细胞培养物分离衣原体,但对基层兽医实验室有许多困难。当今俄生产的试剂,广泛用于诊断动物衣原体病。取急性型或潜伏型家禽和哺乳动物的病料检测,其特异性可达100％,灵敏度为85—91％。

鉴别分枝杆菌属各菌种的PCR要点

目前,检测结核病的最准确和敏感的方法是多聚酶链反应法(PCR)采用了固体培养基的和低压冻干的16种分枝杆菌培养物;检测实验感染M.bovis的海猪肝脏和对结核菌素起反应的牛(n=50)淋巴结;阴性检验样品取健康海猪和牛的脾、肝与其它组织;阳性检验样品取M.bovis BCG菌苗株和M.tuberculosis菌株;取上述各菌培养物和10—20mg病理材料分别快速分离出DNA;PCR在0.

牛结核病的活体诊断

在实验室的条件下,俄学者等对牛结核病开展了研究,采用传统的和非传统的生前诊断法,取体重为90—100kg的健康小牛6头(1、2、3、4、5和6号),每头小牛以口服100mg的M.bovis培养物而受感染,4号和6号小牛在81天后再重复感染1次。经过5,9,13,16,20,23,27,30,34,37,44,51,58,65,72,79,86,