多聚链式反应(PCR)技术在骨髓移植中的应用

多聚酶链式反应(PCR)技术是近年来分子生物学领域中应用极广的一项由Mullis等设计的生物学技术。这项技术自1985年以来不仅在生物学领域,而且在医学领域都得到了广泛的应用,其中包括目前在国内外临床上广泛用于血液系统恶性疾患治疗的骨髓移植。 PCR技术是一种模拟天然DNA复制过程的核酸扩增法。即在体外一定的条件下,在待扩增的目的DNA片段两侧加一对寡核苷酸引物,通过变性使DNA成为单链。

16S rRNA/DNA荧光定量多聚酶链反应检测肺炎婴幼儿肠道菌群变化

目的了解肺炎婴幼儿肠道菌群的变化,探讨16S rRNA/DNA荧光定量多聚酶链反应(PCR)技术在临床细菌定量分析中的可行性和实用性。方法提取23例健康儿童(健康对照组)和23例肺炎患儿(观察组)治疗后粪便标本的细菌DNA,测量和比较二组标本细菌的吸光度(A)260值;采用16SrRNA/DNA荧光定量PCR技术对二组粪便标本中的乳酸杆菌和大肠杆菌进行定量分析和比较。采用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果健康对照组和观察组治疗第1、3、7天的粪便标本中细菌的A260值分别为(3381.2±817.2)mg/L、(1643.5±498.4)mg/L、(859.6±165.2)mg/L、(1263.8±337.3)mg/L;健康对照组和观察组治疗第1、3、7天比较,均有显著性差异(Pa<0.01);观察组患儿治疗第1、3、7天和健康对照组的肠道乳酸杆菌数量(拷贝数/g湿便)的对数值分别为(5.19±0.48)、(6.94±0.66)、(6.05±0.57)和(9.13±0.53);大肠杆菌数量的对数值分别是(6.99±1.17)、(7.38±1.08)、(6.76±1.17)、(7.52±0.44),健康对照组和观察组比较,均有显著性差异(Pa<0.01)。结论肺炎患儿随治疗时间长短菌群数量有差异;16S rRNA/DNA荧光定量PCR技术在临床细菌定量分析中是切实可行的。

肺炎支原体16SrRNA基因引物A(201)B(629)多聚酶链式反应特异性和敏感性的研究

用肺炎支原体16S rRNA基因序列A(201)B(629)做引物,以肺炎支原体、生殖支原体、口腔支原体、唾液支原体和人型支原体DNA为模板进行多聚酶链式反应(PCR),检测引物的特异性和敏感性。结果肺炎支原体呈阳性,但与生殖支原体有交叉;可检出标本中肺炎支原体最少菌量小于10~3/ml,敏感性高于核酸杂交。

逆转录多聚酶链反应方法研究乳腺癌的微小转移

目的 通过分子生物学与常规免疫组化法比较 ,以寻求更好地检测乳腺癌微小转移的方法。方法 采用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)方法检测 2 6例乳腺癌患者的外周血与骨髓中细胞角蛋白 19(KT19)mRNA的表达 ,并用链酶亲和素 生物素 过氧化物酶复合物 (SABC)免疫组化法检测乳腺癌患者骨髓涂片中上皮膜抗原 (EMA)。结果 2 6例外周血中KT19mRNA阳性 4例(15 4% ) ,骨髓阳性 10例 (38 4% )。免疫组化结果显示 2 6例骨髓中有 7例 (2 6 9% )EMA阳性 ,其KT19mRNA都阳性 ,有 3例 (11 5 % )免疫组化结果阴性而KT19mRNA阳性。结论 RT PCR方法检测KT19mRNA是一种比较敏感的方法 ,免疫组化也是一种比较可靠的检测方法 。

多聚酶链反应检测慢性宫颈炎病毒基因

民以多聚酶链反应检测慢性宫颈炎患者宫颈中HPV6、11、16、18型和HSV基因。结果显示：HPV感染率73．6％，HSV感染率34．7％，HPV、HSV混合感染率22．2％，均显著高于正常对照组（分别为20．0％、13．3％和3．3％）。HPV感染中77.4％为多型别混合感染，HSV感染中93．1％是HSV－2感染，此两种病毒的单独或混合感染与慢性宫颈炎颈糜烂程度无关。

一步法提取RNA反转录－多聚酶链反应检测汉坦病毒RNA

用反转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测汉坦病毒（Ｈａｎｔａｖｉｒｕｓ）的基因ＲＮＡ，同时与细胞分离病毒的敏感性进行比较。用异硫氰酸胍－载体吸附法，一步提取汉坦病毒ＲＮＡ。将脑腔接种汉坦病毒频临死亡的乳鼠脑制成１０％的悬液，并系列稀释，从１０（－１）到１０（－１２）的１２梯度。结果表明，该引物能够扩增出汉坦病毒Ｈ８２０５株的ＲＮＡ，说明汉坦病毒Ｈ８２０５株与７６－１１８株在Ｍ片段上具有共同的保守序列。ＲＴ－ＰＣＲ可以检测出４．６４×１０（－３）ＴＣＬＤ（５０）／ｍｌ的病毒，而用Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞只能分离检测出４．６４×１０（－２）ＴＣＬＤ（５０）／ｍｌ，所以ＲＴ－ＰＣＲ检测病毒比细胞分离检测病毒敏感。

甲基化特异多聚酶链反应的改进及应用

背景与目的:甲基化特异多聚酶链反应(methylation-specificPCR,MSP)已经成为筛查DNA甲基化异常的最常用方法之一,但其方法繁琐、耗时、非特异性产物多和不经济,有待改进。RUNX3基因是胃癌的抑癌基因,失活的主要机制之一为DNA高甲基化,本研究目的在于用改进的MSP检测肝细胞癌RUNX3基因的甲基化状态。方法:采用玻璃奶回收化学修饰后的DNA,应用专用于GC丰富序列扩增的GC-Melt试剂以改良MSP并对152例肝细胞癌RUNX3基因的甲基化状态进行检测,并与常规MSP方法进行比较。结果:常规MSP方法纯化和回收DNA需要昂贵的纯化柱和高速低温离心机以及16h以上的纯化和回收时间;而在改良方法中,玻璃奶回收化学修饰后的DNA不需昂贵的纯化柱和高速低温离心机,纯化和回收过程只需1h。专用于扩增GC丰富序列的GC-Melt溶液较常规方法明显减少PCR的非特异性产物。51.9%(79/152)的肝细胞癌RUNX3基因呈现高甲基化状态。结论:改良的甲基化特异的PCR技术是筛查DNA甲基化高效、简便的方法。甲基化机制可能是肝细胞癌RUNX3基因失活的重要机制之一。

基因表达连续分析标签数据库的实时定量多聚酶链反应验证

目的采用实时定量多聚酶链反应(PCR)技术验证不同丰度和匹配度的基因表达序列标签,尝试用该技术补充和完善高通量基因表达谱的结果。方法根据各基因序列全长设计引物,选择9个单匹配标签,6个多匹配标签,1个美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库更新后无匹配标签和2个无匹配基因进行实时定量PCR验证。结果挑选的所有基因均得到特异性扩增。基因表达量分析结果显示,基因表达连续分析(SAGE)文库中9个单匹配标签表达趋势和定量结果一致,且具有显著性差别;6个多匹配标签中有3个标签表达趋势和定量结果一致,且具有显著性差别;1个NCBI数据库更新后无匹配标签表达趋势和定量结果相反;2个无匹配基因表达量数据提示两组间没有显著性差别。结论实时定量PCR技术是验证SAGE等高通量数据的可靠工具之一。SAGE文库标签匹配度可影响数据的可信度。

HBV—DNA不同模板制备进行多聚酶链基因扩增

本文采用 4.2mol/L异硫氰酸胍、25mmol/L柠檬酸钠、0.1mol/L2一巯基乙醇,0.5%(W/V)十二烷基肌氨酸钠作为裂解液进行一步法程序式抽提血清标本HBV—DNA模板用于多聚酶链基因扩增.该法与常规DSD抽提法及微量直接法进行比较,具有方法简单、稳定、不易污染且敏感性高.抽提过程可在1个小时内完成,经酶切及a^(32)P标记探针放射自显影鉴定PCR产物具良好特异性,该法尤其适应于大量临床标本的检测,值得推广使用.

多聚酶链反应技术在麻风诊断中的应用研究

目的 了解用 16SrRNA作引物 ,用PCR方法 ,检测诊断麻风的可行性。方法 用麻风分枝杆菌 16SrRNA基因片段作引物 ,采用PCR技术 ,对 2 0余种非麻风分枝杆菌进行检测 ;同时也对麻风流行地区的 72名经传统方法诊断的麻风病人和 45名健康自愿受试者进行检测。结果 2者的检测结果进行比较 ;χ2 检验P >0 0 5 ,差异无显著性。进行了 2种方法检查结果的比较研究 ,结果也完全一致。结论 16srRNA作引物 ,用PCR检测诊断麻风病人与传统方法诊断结果基本一致。

16SrRNA在多聚酶链反应麻风诊断中的特异性研究

目的 了解用 16SrRNA作引物 ,多聚酶链反应 (PCR)技术检测麻风病的特异性。方法 用 16SrRNA分子片段作引物 ,用多聚酶链反应技术检测 2 0余株非麻风分枝杆菌 ,麻风分枝杆菌标准菌株及 4例传统方法确诊的麻风病患者。结果 麻风标准菌株和 4例中的 3例患者检测为阳性 ,其余 2 0余株非麻风分枝杆菌均为阴性。结论 16SrRNA作引物 。

多聚酶链反应区分血清Ⅰ型MDV强弱毒株

选用血清Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ＿１）基因组中位于１３２ｂｐ正向重复序列两侧的２段寡聚核苷酸为多聚酶链反应（ＰＣＲ）的引物，分别对Ⅰ型ＭＤＶ强毒株（京－１株）和弱毒株（Ｍｄ１１／７５Ｃ株）的核酸进行基因扩增。结果显示：该弱毒株核酸基因中含６个或更多个拷贝数的１３２ｂｐ正向重复序列，而强毒株核酸基因中仅含２个，相同引物对Ⅱ型、Ⅲ型ＭＤＶ（ＳＢ－１株，Ｆｃ１２６株）和禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）核酸作ＰＣＲ扩增，未检出任何核酸片段。

多聚酶链反应检测牙周病人及其家庭成员中的牙龈卟啉单胞菌

近年来随着分子生物学的发展 ,发现作为牙周主要致病菌的牙龈卟啉单胞菌与其它产黑菌之间无同源性、证实其有特异性。作者根据牙龈卟啉单胞菌特定的纤毛亚单位蛋白结构基因 ,设计一对寡核苷酸引物 ,采用多聚酶链反应简称 PCR扩增了 131b P特异片段 ,实验表明 ,PCR直接检测临床标本中的牙龈卟啉单胞菌 ,不仅特异、敏感 ,而且快速 ,从而显示了较好的优越性。同时 ,作者也证实该引物具有高度的特异性 ,可用此对引物检测口腔中的牙龈卟啉单胞菌。本文作者继续用该引物 ,分析牙龈卟啉单胞菌在牙周炎患者家庭成员中的传递。经 PCR检测 10名牙周炎患者 ,有 8名牙龈卟啉单胞菌为阳性 ;配偶有 6名为阳性 ;6对牙龈卟啉单胞菌均为阳性的夫妇中 ,有两个家庭的子女为阳性 ,年龄最大 11岁 ,最小 6岁 ,证明牙龈卟啉单胞菌可能在家庭中传播 ,其途径可能是口接触或唾液接触。并发现以上 6名患者的配偶 ,有不同程度的牙周损害。本实验认为

配方奶添加长链多聚不饱和脂肪酸对足月儿生长发育的影响

【目的】 拟探讨配方乳添加等量AA与DHA对中国部分地区足月婴儿生长发育的影响。 【方法】 2 71名足月健康新生儿 ,随机分配进入添加AA +DHA配方喂养组 (frisolacadvanced ,FA组 )、未添加AA +DHA配方喂养组 (frisolacH ,FH组 ) ,并选择 2 6名纯母乳喂养儿 (fullybreastfeding ,BF组 )为对照组。所有参与的婴儿在满 3和6个月时邀请入院检测体重、身长、头围、智能发育指数 (MDI) ,运动发育指数 (PDI) ,并采集外周静脉血检测血浆长链多聚不饱和脂肪酸 (LCPUFA)与血红蛋白。 【结果】 尽管两种配方喂养婴儿血清LCPUFA含量差异有显著性 ,但两组配方喂养婴儿在满 3和 6个月时体重、身长、头围、MDI、PDI差异无显著性。然而 ,本研究显示纯母乳喂养婴儿在 6个月时体重和身长低于混合喂养婴儿 (BF组 +FA组 ) ,且BF组婴儿在 6个月时血浆AA、DHA及与血红蛋白低于BF +FA组婴儿。 【结论】 尽管添加AA∶DHA =1∶1的配方可以显著地增加婴儿血浆AA和DHA水平 ,但并不表明对现有的标准婴儿配方乳添加AA +DHA可促进婴儿生长发育。

多聚酶链反应及其在实验动物微生物监测中的意义

多聚酶链反应(Polymerase ChainReaction,简称 PCR)是一种在体外以一对寡聚核苷酸引物(Primer)对靶基因序列直接进行特异性酶促扩增的方法,因此又称基因体外扩增技术。此项技术是美国 Cetus公司的 Kary,Mullis 于1985年首创,同年十月。

长链多聚磷酸盐的合成、降解、检测及临床意义

长链多聚磷酸盐是经多个高能磷酸键连接的线性无机磷酸盐,其磷酸基团从几十到上千不等。长链多聚磷酸盐普遍存在于包括人体在内的动植物及微生物中,但由于长期缺少转化医学切入点,很长时间被认为是"分子化石",无重要的生理功能。直到近期发现其可能通过激活凝血因子Ⅻ以及缓激肽系统等引起炎症和凝血异常。但目前对长链多聚磷酸盐的认识尚少,为了提高对长链多聚磷酸盐的了解和关注,本文从长链多聚磷酸盐的合成、降解、检测及临床意义等方面对其进行讨论,希望能起到抛砖引玉的作用。