多聚鸟氨酸介导外源基因的直接转化法

利用多聚鸟氨可以改变本来都带负电荷的原生质体或外源 DNA表面电性 ,使其中之一带正电荷 ,从而达到原生质体和外源 DNA正负相吸 ,并且促进外源DNA进入到原生质体中。本实验采用以多聚鸟氨酸改变外源 DNA表面负电荷为正电荷的方法。在大豆品种黑农 35和黑农 37的多聚鸟氨酸介导 BT基因的实验结果表明 ,这种方法是行之有效的 ,而且转化效率达到 0 .33%

基于多聚鸟氨酸海藻酸微囊化人正常肝细胞系的体外培养

目的观察海藻酸钠-多聚鸟氨酸-海藻酸(alginate-PLO-alginate,A-PLO-A)微囊和海藻酸钡-多聚鸟氨酸-海藻酸(Ba-alginate-PLO-alginate,B-PLO-A)两种微囊包裹人正常肝细胞系HL-7702细胞后,肝细胞形态和功能的变化,评价PLO对微囊化肝细胞的生物学行为的影响。方法采用优化的微囊制备条件,制备A-PLO-A微囊、B-PLO-A微囊,并包裹HL-7702细胞,观察肝细胞在基于多聚鸟氨酸的微囊中的生长增殖的情况及代谢产物浓度水平。结果A-PLO-A和B-PLO-A两种微囊包裹肝细胞后,体外培养1周,细胞均可在两种微囊内形成不同大小和形态的肝细胞聚集体,微囊光滑无破损现象,台盼兰染色计数的结果显示,包囊前细胞存活率为94%;A-PLO-A微囊包囊后细胞存活率为92%,B-PLO-A微囊包囊后细胞存活率为91%。两种微囊化HL-7702细胞各时间点ALB、BUN分泌量差异均无统计学意义。结论微囊囊膜的存在并未对具有贴壁生长和接触抑制性特征的HL-7702细胞的增殖和生理功能产生明显的不利影响。基于多聚鸟氨酸的新型海藻酸微囊在一定程度上可以满足微囊化肝细胞生存的需要,并可维持其正常的生理功能。

多聚鸟氨酸海藻酸钡微囊物理性能和生物相容性研究

目的验证多聚鸟氨酸(PLO)与海藻酸钡(BPA)微囊结合制备的多聚鸟氨酸BPA(B-PLO-A)微囊是否能够提高传统BPA微囊的物理性能和生物相容性。方法用静电微囊发生仪制备多聚鸟氨酸海藻酸钡(B-PLO-A)微囊和多聚赖氨酸海藻酸钡(B-PLL-A)微囊,通过对微囊在低渗环境中的形态变化和体外培养后直径变化的观察,以及对微囊在机械振荡后破损率的计算来评价微囊的物理性能;然后将两种微囊移植入大鼠腹腔,观察两者的完整性和生物相容性。结果 B-PLO-A微囊较B-PLL-A微囊在低渗环境下更稳定坚固;体外培养14d时B-PLO-A微囊较B-PLL-A微囊直径增加的程度更小;机械振荡96h后,B-PLO-A微囊的完整率为(99.3±1.0)%,B-PLL-A微囊为(96.2±1.5)%;腹腔移植2、4和8周后,从大鼠腹腔内取出的B-PLO-A微囊与B-PLL-A微囊结构均较为完整,呈圆形,表面光滑,光镜观察无明显结缔组织包裹,移植8周后B-PLO-A微囊完整率为(97.3±2.1)%,B-PLL-A微囊完整率为(95.4±2.4)%。结论 B-PLO-A微囊的物理性能比B-PLL-A微囊有所提高,同时保持良好的生物相容性。

基于多聚鸟氨酸的海藻酸微囊化肝细胞体内移植治疗肝衰竭大鼠的研究

本研究探讨海藻酸钠-多聚鸟氨酸-海藻酸(A-PLO-A)和海藻酸钡-多聚鸟氨酸-海藻酸(B-PLO-A)两种新型微囊作为细胞移植载体的效果。两种微囊包裹小鼠肝细胞后,植入D-氨基半乳糖腹腔注射法制备的急性肝衰竭模型大鼠体内,观察大鼠死亡率,检测微囊内肝细胞的生长、增殖、代谢的情况,以及能否有效改善肝衰大鼠的肝功能。实验分为A-PLO-A空微囊、B-PLO-A空微囊、移植游离的肝细胞、A-PLO-A微囊化肝细胞、B-PLO-A微囊化肝细胞五组。研究结果表明,单纯的空微囊对肝衰大鼠病情无缓解作用,移植后两个空囊移植组3d死亡率均达到了100%。游离肝细胞组、A-PLO-A微囊化肝细胞组和B-PLO-A微囊化肝细胞组大鼠的ALT、AST、ALB水平均有所恢复,4周时微囊移植组的上述指标均优于游离肝细胞组,说明微囊化肝细胞移植有效缓解了肝脏损伤的程度,治疗效果好于游离肝细胞组。微囊化肝细胞组大鼠的存活率明显高于空囊移植组和游离肝细胞移植组;4周后回收的微囊表面光滑,无细胞包裹,无纤维化。研究结果提示基于多聚鸟氨酸的海藻酸微囊物理稳定性和生物相容性良好,适合作为肝细胞体内移植的载体。

三种底物对体外培养的神经干细胞分化和迁移能力的影响

目的 :探讨不同底物对体外培养的神经干细胞分化和迁移能力的影响。 方法 :采用多聚鸟氨酸、层黏连蛋白、鼠尾胶原等作为底物 ,观察它们对大鼠神经干细胞分化的诱导和对细胞迁移能力的影响。 结果 :三种底物均能诱导神经干细胞的分化 ,诱导分化的能力为层黏连蛋白 >多聚鸟氨酸 >鼠尾胶原 ,多聚鸟氨酸与层黏连蛋白两者联用具有协同叠加效应 ,而且这些底物也具有介导分化后的神经细胞迁移的能力 ,各种底物对细胞迁移影响力的大小与其诱导分化的能力相似。 结论 :多聚鸟氨酸、层黏连蛋白和胶原不同程度上促进神经干细胞分化和迁移。

Corning^(■) CellBIND^(■) 表面培养皿促进脐带源间充质干细胞生长

背景:培养体系微环境影响干细胞体外扩增,寻找有效的促进细胞贴壁和增殖的培养方法尤为重要。目的:比较不同细胞培养材质对细胞体外扩增的影响。方法:将5.0×104培养的人脐带源间充质干细胞分别接种于包被/不包被鸟氨酸Corning聚苯乙烯培养皿或CorningCellBIND表面培养皿中培养,分别观察细胞的贴壁、增殖状态、与细胞黏附和细胞增殖有关的蛋白的表达及细胞标志物的表达。结果与结论:与其他类型的培养皿相比,包被多聚鸟氨酸的CorningCellBIND表面培养皿在24 h内能够促进人脐带源间充质干细胞贴壁,同时也能使培养的人脐带源间充质干细胞较早的进入对数生长期,细胞增殖数量相对较多,虽然对人脐带源间充质干细胞表面标志物CD73,CD90和CD105的表达没有影响,但能促进细胞中黏附蛋白的表达。且CorningCellBIND表面培养皿较Corning聚苯乙烯培养皿更能促进人脐带源间充质干细胞的贴壁和增殖,同时也对细胞表型的表达无影响。提示CorningCellBIND表面培养皿能够促进细胞吸附,增加细胞数量,且对细胞周期蛋白以及细胞表型的表达没有影响,且包被多聚鸟氨酸能够进一步促进细胞的贴壁和增殖,并稳定表达人脐带源间充质干细胞的细胞表型。