多聚鸟氨酸海藻酸钡微囊物理性能和生物相容性研究

目的验证多聚鸟氨酸(PLO)与海藻酸钡(BPA)微囊结合制备的多聚鸟氨酸BPA(B-PLO-A)微囊是否能够提高传统BPA微囊的物理性能和生物相容性。方法用静电微囊发生仪制备多聚鸟氨酸海藻酸钡(B-PLO-A)微囊和多聚赖氨酸海藻酸钡(B-PLL-A)微囊,通过对微囊在低渗环境中的形态变化和体外培养后直径变化的观察,以及对微囊在机械振荡后破损率的计算来评价微囊的物理性能;然后将两种微囊移植入大鼠腹腔,观察两者的完整性和生物相容性。结果 B-PLO-A微囊较B-PLL-A微囊在低渗环境下更稳定坚固;体外培养14d时B-PLO-A微囊较B-PLL-A微囊直径增加的程度更小;机械振荡96h后,B-PLO-A微囊的完整率为(99.3±1.0)%,B-PLL-A微囊为(96.2±1.5)%;腹腔移植2、4和8周后,从大鼠腹腔内取出的B-PLO-A微囊与B-PLL-A微囊结构均较为完整,呈圆形,表面光滑,光镜观察无明显结缔组织包裹,移植8周后B-PLO-A微囊完整率为(97.3±2.1)%,B-PLL-A微囊完整率为(95.4±2.4)%。结论 B-PLO-A微囊的物理性能比B-PLL-A微囊有所提高,同时保持良好的生物相容性。

海藻酸钡-多聚赖氨酸-海藻酸微囊植入大鼠体内的生物相容性的实验研究

研究海藻酸钡-多聚赖氨酸-海藻酸(BPA)微囊在大鼠体内的生物相容性。用静电微囊发生仪制备BPA微囊,将4mL空微囊分别注射于20只Sprague-Dawley大鼠腹腔内,于1、2、4、8周各取5只大鼠,处死后用生理盐水灌洗腹腔,收集灌洗液,待微囊全部沉淀后,计算其中空微囊数并观察微囊的形态改变。结果表明:移植后1、2、4、8周从大鼠腹腔内取出的微囊95%～98%为完整、圆形、表面光滑、无明显的结缔组织包绕。说明我们所制作的BPA微囊具有较好的生物相容性。

长期体外培养条件下海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞的变化

目的:了解在体外长期培养的条件下,海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞的形态及其细胞活率的变化。方法:实验于2003-09/2004-05在解放军总医院老年医学研究所细胞生物学室完成。①材料:细胞为牛肾上腺嗜铬细胞;海藻酸钠和多聚赖氨酸由SIGMA公司提供;DMEM-H培养液由GIBCO公司提供;加强型小牛血清由HYCLONE公司提供。②方法:用海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微胶囊包裹牛肾上腺嗜铬细胞,以含有体积分数为0.1的小牛血清的DMEM-H培养基培养于CO2孵箱中,定期换液。③观察指标:在光学显微镜下观察微囊及囊内细胞的形态;以锥虫蓝染色法计数囊内细胞的数量和存活率,观察时间为8个月以上。结果:①微囊包裹后1d时,光镜下见微囊呈圆形,囊膜完整,表面光滑;囊内为单个细胞,均匀散在分布。体外培养35d时,微囊仍呈圆形,囊膜完整,表面光滑;囊内细胞聚集成体积较小的团块。体外培养240d时,微囊形态无明显变化;囊内大部分细胞已聚集成多个体积较大的团块,少数微囊内的细胞聚集成一个大的细胞团。②随着培养时间的延长,囊内细胞数量逐渐减少,从最初的(54±10)个/囊减少到培养243d时的(35±7)个/囊,但差异无显著性意义(P>0.05);囊内细胞的活率无明显改变,开始为95%,到培养243d时仍有93%的细胞存活。结论:在体外培养条件下,海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞可较长时间地保持良好状态。

海藻酸盐-多聚赖氨酸-海藻酸盐微胶囊膜的强度和生物相容度测定

目的 :了解我们所制作的海藻酸盐 多聚赖氨酸 海藻酸盐 (APA)微囊的生物相容性、机械和化学强度。方法 :用静电微囊发生器制作海藻酸盐 多聚赖氨酸 海藻酸盐的APA微胶珠及枸橼酸钠液化微珠芯的APA微胶囊。用振摇法比较微囊与微珠的机械强度。用不同酸碱度溶液测定微囊的化学强度。用微囊小鼠腹腔移植法观察APA微囊的生物相容度。结果 :①机械振摇 48h的破损率 :微囊为 5 % ;微珠为 31% ;②Ph 7 4对APA微囊的化学损伤最小 ;③移植后 1周、2周、4周、8周和 10周从小鼠腹腔内取出的微囊 95 %～ 98%为完整、圆形、表面光滑、无明显的结缔组织包绕。结论 :我们所制作的APA微囊具有较好的生物相容度。

ACA、APA微囊的强度、通透性及生物相容性研究

目的观察海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠(alginate-chitosan-alginate,ACA)微囊、海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-polylysine-alginate,APA)微囊的强度、通透性及生物相容性,评价ACA、APA 2种微囊在细胞移植中作为运载工具的可行性。方法分别制备ACA微囊和APA微囊,采用37℃摇床振荡对这2种微囊机械强度进行比较研究。以胰蛋白酶、异硫氰酸荧光素标记的IgG、牛血清白蛋白BSA来观察囊膜的通透性。用ACA、APA微囊包封293细胞,植入新西兰大白兔眶周、大鼠腹腔,回收微囊,观察囊内细胞存活情况及微囊的生物相容性。结果ACA和APA微囊囊膜的机械强度良好,所制备的APA微囊允许相对分子质量为22×103的胰蛋白酶、相对分子质量为66×103的牛血清白蛋白通过,2种微囊均限制相对分子质量为150×103的大分子免疫球蛋白透过。回收移植10周的ACA、APA细胞微囊,其形态保持不变,回收微囊化的293细胞在体外进行再次培养,细胞形态正常,移植后大白兔眼组织未见明显炎症改变,大鼠的重要器官(心、肝、脾、肺、肾)无明显的病理改变。结论ACA、APA微囊是细胞移植过程中包裹、保护细胞的合适载体。

肝细胞海藻酸钡微囊生物性能的研究

目的 研究肝细胞海藻酸钡微囊的生物学性能。方法 大鼠肝细胞微囊化后移植于腹腔内 ,1个月后取出行组织学检查。结果 不含肝细胞的空囊移植组微囊大多保持良好的形状 ,囊壁光滑、完整 ,囊外无纤维化反应 ,回收率为 ( 89± 2 3) %。肝细胞微囊大部分呈游离状态 ,部分囊外有一薄层纤维层附着 ,回收率为 ( 78± 2 1) % ;囊内细胞存活率由移植前的 ( 91± 16 ) %降至 ( 79±13) %。结论 肝细胞海藻酸钡微囊的生物相容性及机械稳定性较好 ,但免疫源性有待进一步提高。

APA微囊低温保存中降温方法的建立

目的探讨海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙(APA)微囊低温保存的降温方法。方法用静电法制作APA微囊,分别以程控降温法、冰箱梯度法或直接液氮法降温,最终将APA微囊保存于液氮中。复温后,在显微镜下观察APA微囊的破损情况,并用荧光标记的葡聚糖检测APA微囊膜通透性的变化。结果程控降温组为微囊完好率(91.2±1.57)%、皱缩率(3.1±0.81)%、破损率(5.7±2.62)%;冰箱梯度组为微囊完好率(85.3±1.42)%、皱缩率(5.2±0.74)%、破损率(9.5±3.81)%;直接冻存组为微囊完好率(14.5±1.57)%、皱缩率(84.1±3.47)%、破损率(1.4±2.62)%。冻存复温后,各组完好的APA微囊膜通透性无改变。结论程控降温法可较好地低温保存APA微囊并维持其通透特性。

利用激光扫描共聚焦显微镜测定APA微囊通透性

目的：海藻酸钠多聚赖氨酸海藻酸钠（ＡＰＡ）微囊能够成功地延长同种或异种移植组织或细胞的存活时间，而微囊膜的通透性是决定囊内细胞存活和微囊免疫隔离效果的关键因素。本实验用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）以测定ＡＰＡ微囊膜的通透性。方法：采用ＦＩＴＣ标记的不同分子量的葡聚糖（ＦＤ）和ＩｇＧ与微囊共孵育，观察形成的激光共聚焦图像。结果：平均分子量为７１和１６７ｋＤａ的ＦＤ及分子量为１５０ｋＤａ的ＩｇＧ均不能扩散进入微囊内，而平均分子量为１２和２０ｋＤａ的ＦＤ则可自由扩散进微囊内，平均分子量为４０ｋＤａ的ＦＤ可部分扩散进微囊内。提示微囊膜的截割分子量在４０～７１ｋＤａ之间。利用ＬＳＣＭ的时间扫描功能可动态观察ＦＤ１２向单个微囊内的扩散情况，表明较小直径微囊内ＦＤ１２增加的速度明显快于直径较大的微囊。包囊细胞和含血清的培养液对微囊膜的分子截割范围和ＦＤ１２向微囊内的扩散速度无明显影响。结论：我们制备的ＡＰＡ微囊既可允许小分子的营养物通过，以满足微囊内细胞的生存需要，又能截割７１ｋＤａ以上的大分子物质，起到免疫隔离作用。

微囊化猪肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰的免疫隔离机制

目的:探讨微囊化猪肝细胞腹腔内移植对药物性肝衰大鼠的治疗作用,观察受体存活率、肝组织病理变化及大网膜的免疫隔离作用. 方法:以海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)包裹乳猪肝细胞,体外观察APA微囊对NK细胞介导的细胞毒作用的隔离效果.D-氨基半乳糖腹腔内注射诱导大鼠急性肝衰竭,48 h后将微囊化的猪肝细胞移植于大鼠腹腔内,观察移植大鼠存活率,免疫组化法检测大鼠大网膜内CD4、CD8、IgG和IgM的表达. 结果:微囊可有效保护囊内K562细胞不受NK细胞的杀伤.与裸肝细胞移植组相比,微囊化乳猪肝细胞移植组大鼠存活率显著提高(1wk存活率78.6% vs 66.7%, P=0.0 046;2 wk存活率42.9% vs 25.0%,P=0.0027, P<0.01).大网膜CD4、CD8、IgG表达较弱(P=0.0 342、P=0.0 197及P=0.0 445,P<0.05),而IgM表达无明显差异(P>0.05). 结论:APA微囊可有效隔离抗体及淋巴细胞介导的体液和细胞免疫反应.微囊化异种肝细胞移植可治疗大鼠急性肝衰,给予肝功能代谢支持,提高移植治疗效果.

微囊化牛嗜铬细胞及冷冻保存的体外培养研究

目的 观察体外培养的微囊化牛嗜铬细胞及其冷冻保存复苏后的细胞活力,探索微囊化牛嗜铬细胞的冻存保存方法,为将来进行大规模细胞移植治疗疼痛奠定临床基础.方法 经胶原酶消化成单细胞,微囊包裹,并取部分进行冷冻保存及复温,观察细胞的生长情况;放免法分别检测其培养液中去甲肾上腺素、甲-脑啡呔的含量和在高钾、乙酰胆碱刺激下的分泌量来观察其功能活性.结果 微囊化牛嗜铬细胞及其冷冻复苏后的细胞形态结构完整,生长良好;冻存复苏后的微囊保留了儿茶酚胺和甲-脑啡呔的的分泌功能,基础与刺激分泌量大约为冻存前微囊化牛嗜铬细胞分泌量的92%;同时刺激后去甲肾上腺素、甲-脑啡呔水平较其基础值均有明显增加（P＜0.01）.结论 微囊化牛嗜铬细胞及其冷冻复苏后的细胞具有良好的细胞功能,冷冻保存的微囊化牛嗜铬细胞是有效和成功的.

两种微囊化大鼠胰岛异种移植于糖尿病小鼠的疗效比较

目的将大鼠胰岛分别用两种不同的免疫隔离材料微囊化移植到糖尿病小鼠肾包膜下,对它们的疗效进行比较。方法尾静脉注射3%链脲佐菌素建立小鼠糖尿病模型。成模小鼠随机分为4组:海藻酸钡微囊化胰岛移植组、琼脂糖聚苯乙烯磺酸微囊化胰岛移植组、未微囊化胰岛移植组和空白对照组,每只小鼠肾包膜下植入300个相应大鼠胰岛。结果4组糖尿病小鼠移植前血糖水平无显著差异,移植后1周分别为:海藻酸钡微囊化胰岛移植组(7.26±1.56)mmol/L、琼脂糖聚苯乙烯磺酸微囊化胰岛移植组(7.14±1.04)mmol/L、未微囊化胰岛移植组(7.42±1.52)mmol/L、空白对照组(22.54±1.24)mmol/L,前2组与后2组相比有显著性差异,生存期也明显长于后2组;海藻酸钡微囊化移植组维持正常血糖时间及生存期(分别为76d和92d)明显长于琼脂糖微囊化移植组(分别为41d和56d)。结论用海藻酸钡和琼脂糖聚苯乙烯磺酸制备的微囊化大鼠胰岛均可存活于糖尿病小鼠体内并发挥生物功能,海藻酸钡微囊优于琼脂糖聚苯乙烯磺酸。

微囊膜胰岛移植的进展

微囊膜胰岛移植的进展济南军区总医院内分泌科（山东济南市２５００３１）晏辉综述张胜兰审校胰岛素依赖性糖尿病（ＩＤＤＭ）是由于病毒感染或／及免疫系统功能紊乱，导致胰岛β－细胞功能衰竭，胰岛素分泌绝对不足，其治疗对策除注射外源性胰岛素外，寻求有效的代替胰岛...

微囊化大鼠胰岛移植物的制备与异种移植

为了解决胰岛移植中排斥反应,用海藻酸钠—聚赖氨酸生物膜制备微囊化大鼠胰岛,体外培养,胰岛素释放试验功能良好,与单纯胰岛无显著性差异;异种移植可成功地纠正糖尿病小鼠的高血糖状态平均达4个月之久。表明:大鼠胰岛微囊化可在不使用免疫抑制剂的情况下,有效地延长胰岛在糖尿病小鼠体内的生存期。

聚赖氨酸-海藻酸微囊介导的病毒基因组DNA转染

通过多孔CaCO3微粒吸附伪狂犬病毒(Pseudorabies,PRV)基因组DNA,并在其表面依次交替聚合PLL、Alg至7层;以EDTA溶解去除CaCO3内核,制成聚PLL/Alg包被DNA的载体并感染家兔,观察PRV基因组DNA在体内的复制情况。结果显示,Na2CO3与CaCl2反应可获得直径4～6μm的多孔CaCO3微粒,对DNA的吸附效率约为1mg CaCO3微粒可吸附1μg DNA。经PLL/Alg包被后获得直径1～2μm、囊膜厚约200nm的PRVDNA聚PLL/Alg微囊。肌肉注射含6.5μg PRV DNA的PLL/Alg微囊,可引起试验兔死亡,经PCR检测确定为PRV感染引起的。结果表明,聚PLL/Alg微囊能够介导DNA高效转染,在作为DNA疫苗载体方面具有良好应用前景。

微囊豚鼠肝细胞培养及其细胞免疫屏障作用的观察

目的 观察海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊化肝细胞的生物学功能及对免疫细胞的隔离效应。方法 用胶原酶门腔静脉灌注法分离豚鼠肝细胞,测定微囊化肝细胞及游离肝细胞培养上清白蛋白水平,用自然杀伤细胞(NK)细胞的细胞毒实验来评价微囊的免疫隔离效应。结果 微囊包裹对肝细胞的活率无明显影响,微囊化肝细胞与裸露肝细胞白蛋白分泌水平差异无显著性(P>0.05),NK细胞对K562靶细胞的细胞毒实验表明微囊可有效地保护囊内细胞不受NK细胞的杀伤作用。结论 APA微囊化肝细胞可保持良好的生物活性,APA微囊对细胞免疫具有免疫隔离作用。

微囊化人头皮毛乳头细胞体外培养及异种移植

目的探讨微囊化人头皮毛乳头细胞体外培养及异种移植的可行性,并对海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-polylysine-alginate,APA)微囊与海藻酸钠-BaCl2(barium-alginate,BA)微囊的物理、生物性能进行评价。方法采用“一步酶消化法”分离、培养人头皮毛乳头细胞,分别用APA微囊与BA微囊包裹。对两种微囊的生物相容性、机械强度、免疫隔离效果及微囊内细胞活性进行比较。结果APA微囊生物相容性优于BA微囊(P<0.01),但机械强度低于BA微囊(P<0.01);成囊后短期BA微囊内细胞活性高于APA微囊(P<0.01),但APA微囊内细胞活性增高较快(P<0.05)。在微囊完整、表面无纤维化时,两种微囊均可起到良好的免疫隔离作用。结论微囊化人头皮毛乳头细胞可在体外及异种体内培养。综合评价APA微囊与BA微囊的利弊,在不同情况下选择不同的成囊方式是必要的。

微囊包裹人肿瘤细胞的研究进展及应用

微囊是指直径在200～1500μm的球形生物相容性半透膜,这种膜允许营养物质、氧气、细胞分泌的产物及废弃物双向通过,却能阻止大分子物质如抗体和免疫活性细胞通过.体内原位注射微囊化的肿瘤细胞在细胞生长、模拟体内细胞生长环境、制造原位肿瘤模型、器官转移模型等方面相对于体外单层细胞、团块状细胞培养,体内原位、远端器官肿瘤细胞注射及肿瘤组织种植,都有无可比拟的优势.微囊化人肿瘤细胞可广泛用于抗肿瘤药物的筛选、疗效评估等.本文对微囊化人肿瘤细胞的优点及应用前景作一综述.