多聚ADP-核糖聚合酶-1在放射性认知功能障碍中的研究进展

放射治疗后多聚ADP核糖聚合酶-1(PARP-1)的过度激活与神经炎症反应密切相关,而神经炎症是放射性认知功能障碍(RICD)的主要发病机制。该文分析了RICD中神经炎症反应的病理生理机制,包括小胶质细胞激活、星形胶质细胞的增生、少突胶质细胞的破坏、海马微环境改变和血脑屏障损伤,并对PARP-1通过这些共同机制介导神经炎症反应进而加重RICD的研究进展进行综述。最后,探讨了PARP-1抑制剂对RICD的潜在保护作用,旨在为RICD防治药物的开发提供新方向。

多聚ADP-核糖聚合酶抑制剂对高浓度锌损伤PC12细胞的保护作用

探讨多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-AB)对400μmol/L氯化锌损伤PC12细胞的保护作用及其对锌造成的细胞死亡类型的影响。应用MTT法,免疫细胞化学和Western印迹分别测定PC12细胞的存活率和PARP活性;用Hoechst33342/PI荧光双染色、膜联蛋白V结合实验及DNA断裂分析等方法检测细胞死亡类型。结果表明:在400μmol/L氯化锌的作用下,细胞存活率降至(22.7±4.6)%,PARP活性增强,坏死、凋亡和正常细胞百分比分别为(58.4±6.3)%、(18.0±5.6)%及(23.6±4.2)%;3-AB使细胞存活率提高至(76.9±4.7)%,PARP活性减弱,坏死细胞百分数降至(19.2±5.2)%,而正常和凋亡细胞百分数增加到(43.3±1.9)%和(37.5±6.5)%。实验证明,PARP参与了高浓度锌诱导的PC12细胞损伤,抑制PARP活性可提高细胞的存活率,而这种保护作用在于减少细胞的坏死而非凋亡。

多聚ADP-核糖聚合酶抑制剂对帕金森病小鼠相关脑区病理变化的影响

目的研究帕金森病(Park inson’s d isease,PD)小鼠黑质和纹状体多巴胺(dopam inergic,DA)能神经元数量和超微结构的变化及多聚ADP-核糖聚合酶(poly(ADP-ribose)polym erase,PARP)抑制剂PJ34的干预作用。方法采用1-甲基-4-苯-1,2,3,6-四氢吡啶(1-m ethyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyrid ine,MPTP)制备PD小鼠模型,并用PJ34进行干预,2h、24h、72h进行酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组化染色观察DA能神经元数量,透射电镜观察超微结构改变。结果与正常对照小鼠比较,PD小鼠黑质TH阳性神经元进行性减少,核膜皱缩,染色质凝聚成块并有边聚现象;纹状体TH阳性神经纤维稀疏,突触数量减少。与PD小鼠比较,PJ34干预组黑质TH阳性神经元明显增多,纹状体TH阳性神经纤维密度增加(P<0.01),细胞形态比模型组明显改善。结论PARP的活性改变在PD的发病过程中发挥重要作用,PARP抑制剂对DA能神经元有保护作用。

拟南芥多聚ADP-核糖化修饰蛋白的富集和鉴定

多聚ADP-核糖化修饰[poly(ADP-ribosyl)ation,PARylation]是一种可逆的蛋白质翻译后修饰,该修饰由多聚ADP-核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]催化.多聚ADP-核糖化修饰蛋白主要在动物中发现,在植物中少有报道.微生物来源的蛋白质AF1521具有一个能结合多聚ADP-核糖[poly(ADP-ribose),PAR]的macro结构域(macro domain),其突变蛋白AF1521-G42E失去了结合PAR的活性.我们利用AF1521蛋白对PAR的亲和作用来富集拟南芥中的PARylation蛋白质底物并进行质谱分析,同时用AF1521-G42E作为富集过程的负对照.通过这种方法,我们得到多个ADP-核糖化修饰相关蛋白,并对其中一个蛋白GRP7进行了验证.

多聚ADP-核糖聚合酶与帕金森病

多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)可以被DNA损伤断裂激活,使多种核蛋白发生聚ADP核糖化,促DNA的修复。然而,若PARP过度活化则将耗竭细胞内NAD+和能量而导致细胞凋亡和坏死。PARP的过度活化是帕金森病发病的重要危险因素,开发PARP抑制剂,将为临床治疗帕金森病提供新的希望。

AngⅡ致内皮细胞凋亡中多聚(ADP-核糖)聚合酶活性变化的研究

目的:探讨体外AngⅡ在引起血管内皮细胞凋亡过程中细胞内多聚(ADP-核糖)聚合酶的活性变化情况。方法:1μmol/L的AngⅡ处理原代培养人脐静脉内皮细胞6、12、24和48h后,用TUNEL法来检测内皮细胞的凋亡,用[3H]掺入法来检测PARP的活性,硝酸还原法检测NO含量。结果:1μmol/L的血管紧张素Ⅱ以时间依赖性引起内皮细胞的凋亡,6h后细胞内的NO含量开始增加(P<0.05),24h达到高峰,48h后下降到对照组水平;6h后PARP的活性上升(P<0.05),12h到达高峰,24h接近正常,48h后PARP的活性显著低于对照组(P<0.05)。结论:NO含量增加导致的细胞毒性在血管紧张素Ⅱ引起内皮细胞的凋亡中有着重要的作用,在这一过程中PARP活性的变化是先上升后下降。

多聚(ADP-核糖)聚合酶和半胱天冬蛋白酶-3在过氧亚硝基阴离子致气道上皮细胞损伤中的作用

目的 :探讨过氧亚硝基阴离子 (ONOO-)介导气道上皮细胞损伤的作用机制。方法 :在培养的大鼠气道上皮细胞 (RTE) ,观察应用多聚 (ADP -核糖 )聚合酶 (PARP)抑制剂 3 -氨基苯甲酰胺 (3 -AB)和半胱天冬氨酸蛋白酶 - 3 (caspase - 3 )抑制剂Ac -DEVD -CHO后 ,外源性给予ONOO-对RTE细胞乳酸脱氢酶 (LDH)释放、凋亡百分率的影响 ,用Westernblot分析PARP裂解片段。结果 :3 -AB不能完全抑制ONOO-引起的RTE细胞LDH释放率的增高。 3 -AB对ONOO-引起的RTE细胞凋亡无明显影响。Ac -DEVD -CHO呈剂量依赖性抑制ONOO-诱导的RTE细胞凋亡。ONOO-致RTE细胞凋亡过程中有PARP的裂解。结论 :PARP活化是ONOO-介导RTE细胞损伤的途径之一 ,过度的PARP活化参与了ONOO-所致的RTE细胞坏死 ;caspase -

多聚(ADP-核糖)聚合酶与糖尿病周围神经病变

糖尿病周围神经病变（diabetic peripheral neuropathy，DPN）是糖尿病最常见的慢性并发症之一，常导致糖尿病足的发生，是造成糖尿病患者致残、致死的主要原因之一。DPN发病机制复杂，目前认为与神经微循环障碍、氧化应激、代谢异常、神经营养因子缺乏、炎症、免疫机制异常等因素有关，但迄今为止尚无一种学说能够完全揭示DPN的发生和发展，临床亦缺乏特异性治疗方法及药物。

多聚(ADP-核糖)聚合酶在TNF-α致内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨在体外TNF-α引起血管内皮细胞凋亡过程中PARP的变化情况。方法10ng/ml的TNF-α处理原代培养人脐静脉内皮细胞6、12、24和48h后,用Tunel法和DNALadder来检测内皮细胞的凋亡,Western-blot来观察PARP的片段化情况,并用3H掺入法来检测PARP的活性。结果10ng/ml的TNF-α以时间依赖性引起内皮细胞的凋亡,在干预后12h可以检测出PARP的片段化,PARP的活性也在12h开始降低(P<0.05)。结论TNF-α能引起内皮细胞的凋亡,PARP活性的下降在这一过程中起着主要作用,对PARP片段化的检测可以提示内皮细胞的凋亡的发生。

人肺癌组织中caspase-3及其底物PARP蛋白的表达和意义

目的:检测caspase-3基因及其底物多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)在人肺癌组织的表达及与临床病理特征的关系。方法:采用第2代免疫组化Elivision法和Western blot法检测57例人肺癌原发灶中caspase-3、PARP蛋白的表达。结论:通过Western blot和免疫组化检测caspase-3、PARP的蛋白表达结果一致,在57例肺癌原发灶中caspase-3、PARP 2种蛋白表达阳性率分别为:66.67%,33.33%。caspase-3与细胞分化程度(P=0.023)、淋巴结转移(P=0.004)和组织学类型显著相关(P=0.036),PARP与淋巴结转移显著相关(P=0.025)。57例人肺癌组织中,caspase-3的表达与PARP呈显著负相关(P=0.001)。结果:caspase-3通过降低其底物PARP的表达从而促进肿瘤细胞的凋亡,明显地抑制了肺癌的侵袭和转移。

槲皮素通过抑制核因子-κB表达诱导A549细胞凋亡

目的观察槲皮素对人肺腺癌A549细胞核因子(NF)-κB信号通路的影响,探讨其诱导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的作用机制。方法体外培养A549细胞,实验分为槲皮素组(给予终浓度为30μg/ml槲皮素)、顺铂组(给予终浓度为3μg/ml顺铂)及对照组〔给予等体积二甲基亚砜(DMSO)〕。采用ELISA法检测Caspase-3浓度;采用免疫组化荧光染色检测PARP裂解片段阳性细胞荧光强度;采用Western印迹分析检测NF-κB蛋白的相对表达强度。结果槲皮素可明显升高Caspase-3浓度、增强多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)裂解片段阳性细胞荧光强度、抑制NF-κB的表达,与对照组差异显著(P<0.05,P<0.01)。结论槲皮素可通过抑制NF-κB表达而诱导A549细胞凋亡,可能是其抗NSCLC的机制之一。

猕猴脑胱天蛋白酶-3活化及其靶蛋白的体外研究(英文)

凋亡的主要生化过程包括胱天蛋白酶的活化及其对细胞内蛋白质的选择性切割 .在已知的胱天蛋白酶中 ,可被多种凋亡刺激信号激活的胱天蛋白酶 3备受注目 .为进一步揭示灵长类动物神经组织中未知的胱天蛋白酶 3靶蛋白 ,采用成年猕猴脑组织粗提物作为无细胞体系 ,通过加入 granzymeB引发凋亡途径的部分反应 ,如胱天蛋白酶 3的活化及随后发生的蛋白质水解 .经蛋白质印迹分析发现 ,与 granzymeB共孵育后 ,猕猴脑胱天蛋白酶 3以两步方式从酶原转化为活性酶 .对猕猴脑组织自身蛋白质的进一步分析显示 ,多聚ADP 核糖聚合酶 (PARP)被水解为长 85ku的片段 ,此片段提示胱天蛋白酶 3的特异切割活性 .此外 ,神经元凋亡抑制蛋白 (NAIP)也被切割 ,产生长约 4 0ku的小片段 ,但是它的出现不被胱天蛋白酶 3特异性抑制剂Ac DEVD CHO阻断 ,因此可能是 granzymeB直接作用于NAIP所致 .以上结果提示 ,凋亡相关酶切反应可在成年猕猴脑组织提取物中得到重现 ;NAIP可能是granzymeB而非胱天蛋白酶 3的作用靶点 .

PJ34对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元保护的实验研究

目的研究多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)抑制剂PJ34对帕金森病(PD)小鼠黑质多巴胺(DA)能神经元的保护作用。方法采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备PD小鼠模型,2、24、72 h后取中脑组织进行酪氨酸羟化酶(TH)观察DA能神经元的损害情况,同时应用多聚ADP核糖聚合物(PAR)免疫组化染色检测PARP的活性改变。另经PJ34预处理该模型后,对上述指标进行检测。结果PD小鼠黑质DA能神经元出现一过性PARP的过度活化,PJ34预处理显著抑制PARP活性,减轻PD小鼠黑质致密部TH阳性神经元的脱失现象(P<0.01)。结论PARP的活性改变在PD的发病过程发挥重要作用,PJ34通过抑制PARP过度活化对PD小鼠黑质DA能神经元产生保护作用。

PARP在脑缺血细胞凋亡中的研究进展

脑缺血引发的脑细胞损害与细胞凋亡有关。活化半胱氨酸蛋白酶(Caspases)家族引起其作用底物PARP降解，从而启动细胞调亡。研究PARP在脑缺血细胞凋亡中的作用，可以寻找脑细胞损害的特异性抑制剂，对缺血性脑损伤的防治具有非常重要的意义。

色胺酮抑制胸腺基质淋巴细胞生成素促肥大细胞增殖的药理机制

目的探讨色胺酮抑制由胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)促肥大细胞增殖的药理机制,为色胺酮治疗肥大细胞相关过敏性皮炎提供理论依据。方法在TSLP刺激人源肥大细胞系-1(HMC-1)细胞增殖的前提下,同步采用色胺酮处理增殖的细胞,观察对细胞增殖的影响和相关蛋白水平变化。噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度色胺酮处理对细胞活力的影响;溴脱氧尿苷渗入试验和Ki67 mRNA水平检测不同处理组细胞增殖情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测鼠双微体基因2(MDM2)、P53、Caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)剪切蛋白水平变化;实时荧光定量聚合酶链反应检测白细胞介素7受体α(IL-7Ra)和TSLPR mRNA的含量。结果 MTT比色法结果表明,色胺酮无细胞毒性;溴脱氧尿苷渗入试验和Ki67 mRNA水平的检测均显示色胺酮抑制TSLP刺激的肥大细胞增殖;色胺酮抑制TSLP刺激的HMC-1中MDM2蛋白表达水平,蛋白灰度分析比较差异有统计学意义;色胺酮处理后,HMC-1细胞中,P53蛋白和凋亡标志蛋白Caspase-3、PARP剪切蛋白水平升高,且蛋白灰度分析比较差异有统计学意义;TSLP上游调控蛋白IL-7Ra和TSLPR mRNA水平在色胺酮的作用下受到抑制。结论色胺酮可抑制TSLP促肥大细胞增殖,对治疗肥大细胞相关过敏性皮炎有一定的潜力。

多腺苷二磷酸核糖基化修饰与神经退行性变性疾病

神经退行性疾病的发病率越来越高,但其治疗手段有限。多腺苷二磷酸核糖基化修饰(PARylation)是由多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)催化的蛋白质翻译后修饰。PARylation通过影响蛋白质在细胞内的移位、聚集、蛋白质活性和细胞死亡,参与脑卒中、帕金森病、阿尔茨海默病、运动神经元病等神经退行性变性疾病的发生和发展。PARP抑制剂通过抑制蛋白PARylation,在药物临床前试验和临床试验Ⅰ期都展现了明显的神经保护作用。然而,寻找作用更特异的、符合神经退行性变性疾病治疗药动学特点的新型PARP抑制剂,将是抗神经退行性药物研发的新方向。本文就PARylation与神经退行性变性疾病的研究进展作一综述。

α-硫辛酸对糖尿病大鼠肾脏聚ADP-核糖多聚酶表达的影响

目的探讨α-硫辛酸(α-LA)对糖尿病大鼠肾脏聚ADP-核糖多聚酶(PARP)表达的影响。方法 30只SD大鼠随机均分为链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病组(A组)、α-LA干预的糖尿病组(B组)及正常对照组(C组)。8周后测各组大鼠肾脏超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,TUNEL法检测肾脏细胞凋亡,免疫组化法观察PARP在肾脏中的表达,Western blot法检测肾脏半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达。结果与C组比,A组大鼠肾脏SOD活性下降,MDA含量、肾脏细胞凋亡数、PARP和Caspase-3的表达均显著增多(P<0.05),而B组上述指标均较A组明显改善(P<0.05)。结论α-LA对糖尿病大鼠肾脏保护作用可能与抑制氧化应激、下调PARP表达而对抗细胞凋亡有关。

PARP抑制对小鼠结肠癌细胞侵袭能力的影响

【目的】探讨多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制对小鼠结肠癌CT26细胞体外运动侵袭能力的影响及机制。【方法】细胞运动及侵袭试验观察PARP抑制对CT26细胞运动侵袭能力的影响;Western Blot和明胶酶谱法分别检测PARP抑制对CT26细胞基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达和活性的影响。【结果】5-AIQ处理组CT26细胞运动迁移率(70%±7%)和侵袭率(63%±10%)较5-AIQ未处理组(100%±7%、100%±11%)均减弱(P<0.001)。5-AIQ处理组CT26细胞MMP-2、MMP-9表达(64%±12%、72%±12%)较5-AIQ未处理组(分别为100%±11%,100%±21%)明显减弱(P=0.0003、0.0163)。且CT26细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9活性,在5-AIQ处理组[积分吸光度(IA)分别为0.34±0.07,0.40±0.05]与未处理组(0.48±0.10、0.61±0.08)之间同样存在明显差别(P=0.0248、0.0013)。【结论】实验结果提示,PARP抑制剂5-AIQ可降低CT26细胞的运动及侵袭能力,其可能与5-AIQ抑制PARP进而降低CT26细胞肿瘤侵袭转移相关因子MMP-2和MMP-9的表达和活性有关。

胃癌患者血清sLAG-3、PARP-1、CA50含量与手术切除病灶中癌基因表达的相关性

目的:研究胃癌患者血清可溶性淋巴细胞活化基因-3(soluble 1ymphocyte activation gene3,sLAG-3)、多聚ADP-核糖聚合酶-1(poly ADP-ribose polymeras-1,PARP-1)、糖类抗原50(carbohydrate antigen 50,CA50)含量与手术切除病灶中癌基因表达的相关性。方法:选择2015年6月~2017年3月期间在周至县人民医院诊断为胃癌的98例患者作为研究的胃癌组,同期体检的健康志愿者60例作为研究的对照组。采集两组受试者的血清并测定sLAG-3、PARP-1、CA50的含量;采集胃癌组患者的胃癌病灶和癌旁病灶,测定PDCD4、RASSF1A、p16ink4a、Kiss-1、Eaf-2、CDC4、UHRF1、OCT4、Zeb-1、c-jun的蛋白表达量。结果:胃癌组患者血清sLAG-3、PARP-1、CA50的含量均显著高于对照组(P<0.05),且TNM分期越高,血清sLAG-3、PARP-1、CA50的含量越高(P<0.05);胃癌病灶内PDCD4、RASSF1A、p16ink4a、Kiss-1、Eaf-2、CDC4的蛋白含量均显著低于癌旁病灶(P<0.05),且与血清sLAG-3、PARP-1、CA50的含量呈负相关,胃癌病灶内UHRF1、OCT4、Zeb-1、c-jun的蛋白含量均显著高于癌旁病灶(P<0.05),且与血清中sLAG-3、PARP-1、CA50的含量呈正相关。结论:胃癌患者血清中sLAG-3、PARP-1、CA50含量的增多与胃癌的病理进程及抑癌基因表达缺失、原癌基因表达增多密切相关。

DNA单链断裂损伤修复研究进展

在哺乳动物细胞中DNA单链断裂的修复过程需要多聚（ADP-核糖）聚合酶、X射线修复交叉互补蛋白1、DNA连接酶IIIα和其他DNA损伤修复因子的参与。该修复过程分为单链断裂的检测、断链末端处理、缺口填补和DNA连接四个环节。