多聚ADP-核糖聚合酶-1在放射性认知功能障碍中的研究进展

放射治疗后多聚ADP核糖聚合酶-1(PARP-1)的过度激活与神经炎症反应密切相关,而神经炎症是放射性认知功能障碍(RICD)的主要发病机制。该文分析了RICD中神经炎症反应的病理生理机制,包括小胶质细胞激活、星形胶质细胞的增生、少突胶质细胞的破坏、海马微环境改变和血脑屏障损伤,并对PARP-1通过这些共同机制介导神经炎症反应进而加重RICD的研究进展进行综述。最后,探讨了PARP-1抑制剂对RICD的潜在保护作用,旨在为RICD防治药物的开发提供新方向。

AngⅡ致内皮细胞凋亡中多聚(ADP-核糖)聚合酶活性变化的研究

目的:探讨体外AngⅡ在引起血管内皮细胞凋亡过程中细胞内多聚(ADP-核糖)聚合酶的活性变化情况。方法:1μmol/L的AngⅡ处理原代培养人脐静脉内皮细胞6、12、24和48h后,用TUNEL法来检测内皮细胞的凋亡,用[3H]掺入法来检测PARP的活性,硝酸还原法检测NO含量。结果:1μmol/L的血管紧张素Ⅱ以时间依赖性引起内皮细胞的凋亡,6h后细胞内的NO含量开始增加(P<0.05),24h达到高峰,48h后下降到对照组水平;6h后PARP的活性上升(P<0.05),12h到达高峰,24h接近正常,48h后PARP的活性显著低于对照组(P<0.05)。结论:NO含量增加导致的细胞毒性在血管紧张素Ⅱ引起内皮细胞的凋亡中有着重要的作用,在这一过程中PARP活性的变化是先上升后下降。

多聚(ADP-核糖)聚合酶和半胱天冬蛋白酶-3在过氧亚硝基阴离子致气道上皮细胞损伤中的作用

目的 :探讨过氧亚硝基阴离子 (ONOO-)介导气道上皮细胞损伤的作用机制。方法 :在培养的大鼠气道上皮细胞 (RTE) ,观察应用多聚 (ADP -核糖 )聚合酶 (PARP)抑制剂 3 -氨基苯甲酰胺 (3 -AB)和半胱天冬氨酸蛋白酶 - 3 (caspase - 3 )抑制剂Ac -DEVD -CHO后 ,外源性给予ONOO-对RTE细胞乳酸脱氢酶 (LDH)释放、凋亡百分率的影响 ,用Westernblot分析PARP裂解片段。结果 :3 -AB不能完全抑制ONOO-引起的RTE细胞LDH释放率的增高。 3 -AB对ONOO-引起的RTE细胞凋亡无明显影响。Ac -DEVD -CHO呈剂量依赖性抑制ONOO-诱导的RTE细胞凋亡。ONOO-致RTE细胞凋亡过程中有PARP的裂解。结论 :PARP活化是ONOO-介导RTE细胞损伤的途径之一 ,过度的PARP活化参与了ONOO-所致的RTE细胞坏死 ;caspase -

多聚ADP-核糖聚合酶抑制剂对高浓度锌损伤PC12细胞的保护作用

探讨多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-AB)对400μmol/L氯化锌损伤PC12细胞的保护作用及其对锌造成的细胞死亡类型的影响。应用MTT法,免疫细胞化学和Western印迹分别测定PC12细胞的存活率和PARP活性;用Hoechst33342/PI荧光双染色、膜联蛋白V结合实验及DNA断裂分析等方法检测细胞死亡类型。结果表明:在400μmol/L氯化锌的作用下,细胞存活率降至(22.7±4.6)%,PARP活性增强,坏死、凋亡和正常细胞百分比分别为(58.4±6.3)%、(18.0±5.6)%及(23.6±4.2)%;3-AB使细胞存活率提高至(76.9±4.7)%,PARP活性减弱,坏死细胞百分数降至(19.2±5.2)%,而正常和凋亡细胞百分数增加到(43.3±1.9)%和(37.5±6.5)%。实验证明,PARP参与了高浓度锌诱导的PC12细胞损伤,抑制PARP活性可提高细胞的存活率,而这种保护作用在于减少细胞的坏死而非凋亡。

多聚ADP-核糖聚合酶抑制剂对帕金森病小鼠相关脑区病理变化的影响

目的研究帕金森病(Park inson’s d isease,PD)小鼠黑质和纹状体多巴胺(dopam inergic,DA)能神经元数量和超微结构的变化及多聚ADP-核糖聚合酶(poly(ADP-ribose)polym erase,PARP)抑制剂PJ34的干预作用。方法采用1-甲基-4-苯-1,2,3,6-四氢吡啶(1-m ethyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyrid ine,MPTP)制备PD小鼠模型,并用PJ34进行干预,2h、24h、72h进行酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组化染色观察DA能神经元数量,透射电镜观察超微结构改变。结果与正常对照小鼠比较,PD小鼠黑质TH阳性神经元进行性减少,核膜皱缩,染色质凝聚成块并有边聚现象;纹状体TH阳性神经纤维稀疏,突触数量减少。与PD小鼠比较,PJ34干预组黑质TH阳性神经元明显增多,纹状体TH阳性神经纤维密度增加(P<0.01),细胞形态比模型组明显改善。结论PARP的活性改变在PD的发病过程中发挥重要作用,PARP抑制剂对DA能神经元有保护作用。

多聚(ADP-核糖)聚合酶与糖尿病周围神经病变

糖尿病周围神经病变（diabetic peripheral neuropathy，DPN）是糖尿病最常见的慢性并发症之一，常导致糖尿病足的发生，是造成糖尿病患者致残、致死的主要原因之一。DPN发病机制复杂，目前认为与神经微循环障碍、氧化应激、代谢异常、神经营养因子缺乏、炎症、免疫机制异常等因素有关，但迄今为止尚无一种学说能够完全揭示DPN的发生和发展，临床亦缺乏特异性治疗方法及药物。

多聚(ADP-核糖)聚合酶在TNF-α致内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨在体外TNF-α引起血管内皮细胞凋亡过程中PARP的变化情况。方法10ng/ml的TNF-α处理原代培养人脐静脉内皮细胞6、12、24和48h后,用Tunel法和DNALadder来检测内皮细胞的凋亡,Western-blot来观察PARP的片段化情况,并用3H掺入法来检测PARP的活性。结果10ng/ml的TNF-α以时间依赖性引起内皮细胞的凋亡,在干预后12h可以检测出PARP的片段化,PARP的活性也在12h开始降低(P<0.05)。结论TNF-α能引起内皮细胞的凋亡,PARP活性的下降在这一过程中起着主要作用,对PARP片段化的检测可以提示内皮细胞的凋亡的发生。

多聚ADP-核糖聚合酶与帕金森病

多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)可以被DNA损伤断裂激活,使多种核蛋白发生聚ADP核糖化,促DNA的修复。然而,若PARP过度活化则将耗竭细胞内NAD+和能量而导致细胞凋亡和坏死。PARP的过度活化是帕金森病发病的重要危险因素,开发PARP抑制剂,将为临床治疗帕金森病提供新的希望。

多ADP-核糖聚合酶家族

分离鉴定多功能的核基质蛋白及核基质结合蛋白是目前核基质研究的一个重要领域。通过与转录因子、核基质结合元件以及DNA间相互作用,核基质结合蛋白在DNA复制、转录、加工修饰等细胞内事件中起着支持和调节的作用。多ADP-核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase, PARP]是一种高度保守的核基质结合蛋白,在多种活动例如基因组损伤修复、细胞凋亡、信号转导、基因表达调控中都发挥着调节的功能。PARP的潜在生物学功能已越来越引起国内外研究人员的关注。

DNA损伤修复蛋白PARP1聚ADP-核糖基化有丝分裂蛋白BUB3调控HeLa细胞的有丝分裂

目的探讨DNA损伤修复蛋白聚ADP-核糖聚合酶1[poly(ADP-ribose)polymerase 1,PARP1]对HeLa细胞有丝分裂的影响及其分子机制。方法使用流式细胞术、细胞免疫荧光、活细胞成像检测PARP1对HeLa细胞有丝分裂进程的影响。采用染色体核型分析、细胞免疫荧光检测PARP1对HeLa细胞染色体稳定性的影响。使用蛋白免疫印迹和免疫共沉淀检测HeLa细胞有丝分裂期PARP1的蛋白表达及酶活性变化。使用蛋白质组质谱分析方法鉴定与PARP1在有丝分裂期具有特异性相互作用的蛋白并进行免疫共沉淀及聚ADP-核糖基化实验验证。结果流式细胞术和细胞免疫荧光结果显示,敲低PARP1或使用奥拉帕尼抑制PARP1的酶活性后,HeLa细胞对诺考达唑诱导的有丝分裂阻滞反应显著下降(P<0.05)。活细胞成像结果显示,敲低PARP1后HeLa细胞的平均有丝分裂时间缩短(P<0.01)。染色体核型分析和免疫荧光结果显示,敲低PARP1后非整倍体细胞和多极纺锤体细胞的比例明显增加(P<0.05)。蛋白免疫印迹结果显示有丝分裂期PARP1的蛋白表达量无明显变化,免疫共沉淀实验结果显示其酶活性显著增加。蛋白质组质谱鉴定和免疫共沉淀结果显示,PARP1与有丝分裂检查点复合体(mitotic checkpoint complex,MCC)的主要组成蛋白BUB3在有丝分裂期具有特异性相互作用,并且BUB3可以发生聚ADP-核糖基化修饰。结论DNA损伤修复蛋白PARP1可能通过上调其酶活性并聚ADP-核糖基化MCC蛋白BUB3以调控HeLa细胞有丝分裂的正常进行并维持其染色体稳定性。

大鼠脑损伤PARP降解与DNA片段化的时序关系

目的 研究创伤性脑损伤后神经细胞凋亡聚二磷酸腺苷核糖多聚酶 (PARP)降解与DNA片段化的时序关系。方法 以大鼠落体撞击脑损伤为模型 ,分别于损伤后 2、6、12、2 4、4 8h处死取样。分别采用末端标记法 (TUNEL)测定DNA片段化 ,免疫组化法检测PARP降解。光镜下观察阳性细胞所在部位及形态 ,对等切片用HE染色作对照观察。结果 脑损伤后 2h开始出现PARP降解 ,6h开始出现DNA片段化 ,TUNEL阳性细胞最高密度均集中于损伤灶边缘部位 ,随时间推移 ,损伤灶深部区可见散在单个阳性细胞。其中PARP降解高峰出现在 12～ 2 4h ,凋亡细胞出现高峰在 2 4～ 4 8h。结论 创伤性脑损伤后存在细胞凋亡 ,且PARP降解高峰出现早于DNA片段化。建议在脑损伤早期使用抑制PARP降解的药物 。

多聚(ADP-核糖)聚合酶与电离辐射

多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)是广泛存在于细胞内的一种具有蛋白修饰和核苷酸聚合作用的聚合酶,参与细胞DNA损伤后的修复过程。已经证实,PARP具有多种生理、生化功能, 并与细胞的死亡相关,电离辐射等各种细胞损伤因素都可以影响PARP活性。

人肺癌组织中caspase-3及其底物PARP蛋白的表达和意义

目的:检测caspase-3基因及其底物多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)在人肺癌组织的表达及与临床病理特征的关系。方法:采用第2代免疫组化Elivision法和Western blot法检测57例人肺癌原发灶中caspase-3、PARP蛋白的表达。结论:通过Western blot和免疫组化检测caspase-3、PARP的蛋白表达结果一致,在57例肺癌原发灶中caspase-3、PARP 2种蛋白表达阳性率分别为:66.67%,33.33%。caspase-3与细胞分化程度(P=0.023)、淋巴结转移(P=0.004)和组织学类型显著相关(P=0.036),PARP与淋巴结转移显著相关(P=0.025)。57例人肺癌组织中,caspase-3的表达与PARP呈显著负相关(P=0.001)。结果:caspase-3通过降低其底物PARP的表达从而促进肿瘤细胞的凋亡,明显地抑制了肺癌的侵袭和转移。

二苯乙烯苷对氧化诱导内皮细胞凋亡及Caspase-3和PARP表达的影响

为研究二苯乙烯苷对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响并初步探讨二苯乙烯苷抗凋亡的可能机制,采用不同浓度H2O2和二苯乙烯苷处理内皮细胞24 h,以MTT法检测细胞生长活力、Hoechst33258染色观察细胞形态、流式细胞仪检测凋亡率等方法筛选造模内皮细胞凋亡的H2O2浓度和二苯乙烯苷最佳的抗内皮细胞凋亡作用浓度.RT-PCR、Western-blot分别检测Caspase-3、PARP mRNA及蛋白质的表达.结果发现,与空白对照组相比,300μmol/L H2O2作用后,内皮细胞增殖明显受到抑制,Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞,细胞凋亡率显著增加,流式细胞仪检测出明显的凋亡峰,Caspase-3和多聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶(PARP)的表达量显著增加.经二苯乙烯苷处理后,随着二苯乙烯苷浓度增加,细胞的增殖率随之增加,凋亡细胞数减少,凋亡率逐渐降低,与H2O2组比较,10μmol/L的二苯乙烯苷能够显著提高细胞增殖率,降低细胞凋亡率,并显著减少Caspase-3和PARP表达.以上结果表明,二苯乙烯苷能够抑制由H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,增加细胞生长活性,降低细胞凋亡率,其作用机制可能与下调Caspase-3和多聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶(PARP)的表达有关.

PARP抑制对小鼠结肠癌细胞侵袭能力的影响

【目的】探讨多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制对小鼠结肠癌CT26细胞体外运动侵袭能力的影响及机制。【方法】细胞运动及侵袭试验观察PARP抑制对CT26细胞运动侵袭能力的影响;Western Blot和明胶酶谱法分别检测PARP抑制对CT26细胞基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达和活性的影响。【结果】5-AIQ处理组CT26细胞运动迁移率(70%±7%)和侵袭率(63%±10%)较5-AIQ未处理组(100%±7%、100%±11%)均减弱(P<0.001)。5-AIQ处理组CT26细胞MMP-2、MMP-9表达(64%±12%、72%±12%)较5-AIQ未处理组(分别为100%±11%,100%±21%)明显减弱(P=0.0003、0.0163)。且CT26细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9活性,在5-AIQ处理组[积分吸光度(IA)分别为0.34±0.07,0.40±0.05]与未处理组(0.48±0.10、0.61±0.08)之间同样存在明显差别(P=0.0248、0.0013)。【结论】实验结果提示,PARP抑制剂5-AIQ可降低CT26细胞的运动及侵袭能力,其可能与5-AIQ抑制PARP进而降低CT26细胞肿瘤侵袭转移相关因子MMP-2和MMP-9的表达和活性有关。

猕猴脑胱天蛋白酶-3活化及其靶蛋白的体外研究(英文)

凋亡的主要生化过程包括胱天蛋白酶的活化及其对细胞内蛋白质的选择性切割 .在已知的胱天蛋白酶中 ,可被多种凋亡刺激信号激活的胱天蛋白酶 3备受注目 .为进一步揭示灵长类动物神经组织中未知的胱天蛋白酶 3靶蛋白 ,采用成年猕猴脑组织粗提物作为无细胞体系 ,通过加入 granzymeB引发凋亡途径的部分反应 ,如胱天蛋白酶 3的活化及随后发生的蛋白质水解 .经蛋白质印迹分析发现 ,与 granzymeB共孵育后 ,猕猴脑胱天蛋白酶 3以两步方式从酶原转化为活性酶 .对猕猴脑组织自身蛋白质的进一步分析显示 ,多聚ADP 核糖聚合酶 (PARP)被水解为长 85ku的片段 ,此片段提示胱天蛋白酶 3的特异切割活性 .此外 ,神经元凋亡抑制蛋白 (NAIP)也被切割 ,产生长约 4 0ku的小片段 ,但是它的出现不被胱天蛋白酶 3特异性抑制剂Ac DEVD CHO阻断 ,因此可能是 granzymeB直接作用于NAIP所致 .以上结果提示 ,凋亡相关酶切反应可在成年猕猴脑组织提取物中得到重现 ;NAIP可能是granzymeB而非胱天蛋白酶 3的作用靶点 .

脑缺血后细胞凋亡与PARP的关系

目的 观察多聚ADP 核糖聚合酶 (PARP)在脑缺血再灌流损伤中的表达 ,探讨PARP在细胞凋亡中的作用。方法 应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌流模型 (MCAO)。用原位TUNEL和原位杂交技术探求脑缺血后PARP与细胞凋亡的变化关系。结果 缺血再灌流组凋亡细胞主要位于皮质和纹状体的缺血周围区 ,至 2 4h达高峰。PARP的表达在皮质于脑缺血再灌流 6h达高峰 ,在纹状体于再灌流后 2h已达高峰。结论 PARP的mRNA表达发生在细胞凋亡之前 ,表明PARP促进缺血性脑损伤后神经细胞凋亡。

PARP在脑缺血细胞凋亡中的研究进展

脑缺血引发的脑细胞损害与细胞凋亡有关。活化半胱氨酸蛋白酶(Caspases)家族引起其作用底物PARP降解，从而启动细胞调亡。研究PARP在脑缺血细胞凋亡中的作用，可以寻找脑细胞损害的特异性抑制剂，对缺血性脑损伤的防治具有非常重要的意义。

多腺苷二磷酸核糖基化修饰与神经退行性变性疾病

神经退行性疾病的发病率越来越高,但其治疗手段有限。多腺苷二磷酸核糖基化修饰(PARylation)是由多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)催化的蛋白质翻译后修饰。PARylation通过影响蛋白质在细胞内的移位、聚集、蛋白质活性和细胞死亡,参与脑卒中、帕金森病、阿尔茨海默病、运动神经元病等神经退行性变性疾病的发生和发展。PARP抑制剂通过抑制蛋白PARylation,在药物临床前试验和临床试验Ⅰ期都展现了明显的神经保护作用。然而,寻找作用更特异的、符合神经退行性变性疾病治疗药动学特点的新型PARP抑制剂,将是抗神经退行性药物研发的新方向。本文就PARylation与神经退行性变性疾病的研究进展作一综述。

二甲双胍通过调控PARP-1活性对心肌梗死大鼠模型发挥保护作用

目的:探讨二甲双胍通过调控多聚(ADP-核糖)聚合酶1(PARP-1)活性对心肌梗死大鼠模型发挥心功能的保护作用。方法:将50只Wistar大鼠分为5组:对照组、模型组、二甲双胍(DMBG,200 mg·kg^-1)组、PARP抑制药(DPQ,10 mg·kg^-1)组、二甲双胍联合PARP抑制药(DMBG+DPQ,200 mg·kg^-1+10 mg·kg^-1)组。除对照组外,其余各组对其冠状动脉前降支进行结扎,建立心肌梗死大鼠模型。各给药组分别按剂量腹腔注射药物,qd,连续28 d。检测大鼠的体质量(BW)、心率(HR)和收缩压(SBP)等一般指标;对大鼠进行心动图检查,包括:左室舒张末内径(LVIDd)、左室收缩末期内径(LVIDs)和缩短分数(FS);观察大鼠心肌细胞凋亡情况,测定大鼠心肌组织中损伤性活性氧(O^2-)的含量及凋亡相关蛋白半胱天冬酶3(caspase-3)、PARP-1、血管性血友病因子(v WF)表达情况。结果:各组大鼠BW、HR、SBP差异无统计学意义(P>0.05)。DMBG组大鼠的LVIDd、LVIDs较模型组明显降低,而FS较模型组高(P<0.05);心肌细胞凋亡实验结果显示二甲双胍可以显著减少因心肌梗死引起的心肌细胞凋亡;荧光探针实验结果显示二甲双胍可显著降低心肌组织损伤性活性氧含量;蛋白印迹结果显示二甲双胍可以减少凋亡相关蛋白caspase-3的表达,抑制PARP-1活性,同时增加v WF蛋白的表达(P<0.05)。结论:二甲双胍能够减少PARP-1表达从而抑制过氧化反应,减少心肌细胞凋亡,减轻炎症反应,改善心肌梗死大鼠心室重构,发挥保护心脏作用。