人PNGase片段的克隆表达和多克隆抗体制备

目的:利用分子生物学技术克隆、表达、纯化PNGase的N端片段,并制备其多克隆抗体。方法:利用内切酶从人PNGase全长质粒上切下PNGaseN端97个氨基酸的编码序列克隆入pGEX4t1载体,进行原核系统诱导表达并纯化出目的蛋白,用该蛋白免疫大白兔制备其多克隆抗体,经免疫印记检测。结果:重组的PN-GaseN端片段经测序显示构建成功,制备的抗体可以特异性识别小鼠组织内源性PNGase。结论:本研究结果为进一步的研究奠定了基础。