弧菌外膜蛋白OmpK多肽免疫原制备及其免疫原性研究

外膜蛋白OmpK在弧菌属中保守性大于79%,是有良好应用前景的诊断和疫苗抗原,但弧菌属保守并且暴露在膜外的OmpK肽段有限,多肽免疫原免疫效果相比完整蛋白可能更具优势。采用Protein蛋白序列分析软件分析弧菌外膜蛋白OmpK,筛选出2条在弧菌属内广泛保守,同时亲水性和表面暴露性较好的多肽P1和P2。将合成的多肽与BSA蛋白偶联制备成多肽免疫原,免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。间接ELISA结果显示,2条多肽免疫原抗血清对OmpK蛋白的效价均达到1∶81000,对弧菌菌体的效价P1-BSA免疫血清高于P2-BSA免疫血清。通过Western blot分析发现,多肽的抗血清均能与重组OmpK蛋白(27 kDa)以及测试的7株副溶血弧菌和1株创伤弧菌全菌蛋白发生免疫反应,P1多肽抗血清与2株气单胞菌,P2多肽抗血清与3株肠杆菌,存在不同程度的交叉反应。结果表明,OmpK的P1和P2多肽是弧菌共有的抗原表位,免疫血清对菌体识别较弱的原因有待进一步研究。

人PIWIL3特异性抗体的制备和PIWIL3蛋白在肿瘤组织中的分布

目的:制备人Argonaute家族中PIWIL3蛋白的特异性抗体,并检测其在人多种肿瘤组织中的表达和分布。方法:根据序列同源性和多肽免疫性,利用内部多肽选择数据库选择最佳的多肽免疫原合成多肽,再与KLH结合用于免疫;免疫所得的抗血清经多肽包被的凝胶进行亲和层析纯化,酶联免疫吸附分析技术(ELISA)检测纯化后抗体与多肽的结合能力,Westernblot检测抗体对相应蛋白的结合能力。人肿瘤组织芯片检测该蛋白在多种肿瘤组织的表达和定位。结果:成功制备特异性人PIWIL3蛋白多克隆抗体。ELISA和Westernblot检测均表明该抗体具有很好的结合能力。肿瘤组织芯片检测到PIWIL3蛋白在人星形细胞神经胶质瘤和脑脊膜瘤胞质中表达。结论:应用内部多肽选择数据库可以得到最佳的多肽免疫原,以区分亚家族中其他有高度序列同源性的蛋白,成功制备出纯度和结合能力均较好的特异性人PIWIL3抗体,对研究人类特定肿瘤的发病具有潜在的应用价值。

纳米金颗粒负载的免疫原性多肽体外T细胞筛选

备受关注的肿瘤免疫治疗其核心在于能够激发免疫应答的抗原表位。该文以纳米金颗粒作为筛选载体,偶联肿瘤抗原,体外与人外周血单个核细胞相互作用,以酶联免疫斑点法精确检测免疫原性来筛选具有免疫原性的抗原多肽。光谱分析证明了纳米金颗粒与合成多肽的偶联,荧光显微镜和电子显微镜直接证明细胞摄取偶联复合物,通过检测T细胞γ-干扰素分泌水平证实了不同多肽的免疫原性。该文优化了实验参数(如p H、缓冲液体系以及孵育时间等),显著地减少了从多肽合成到免疫原性分析的实验过程所需的时间,同时,实验规模也成功地缩小到了96孔板,达到简单快速筛选免疫原性多肽的最终目的。