iPDMS多肽微阵列技术多重生物芯片在猪病抗体检测中的应用展望

由中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所研发的基于固相载体iPDMS(聚合物涂层聚二甲基硅氧烷)多肽微阵列的多重生物芯片检测技术,其在微阵列蛋白质芯片技术上做了重要的提升与改进,主要解决了固相载体上蛋白质连接不牢固以及随着样本浓度的扩增产生背景噪音太大干扰检测精确度的问题,适用于临床大样本量检测以及现场快速检测。该技术应用于动物疫病防控中猪病多种抗体同时检测,是一个重要突破。本文以此为基础展开了论述,并对此技术日后的发展和创新做出了展望,给动物疫病多病种抗体同时检测领域工作者以启示作用。

多肽微阵列筛选技术在肺结核诊断中的应用

目的血清免疫学技术广泛用于肺结核检测，但已有的血清标志物其敏感性和特异性还有待提高，需要发掘新的血清标志物。方法利用多肽微阵列技术解析结核菌抗原PPE．FAMILY（RV2430c），SodC（Rv0432）和TrxC（Rv3913）全长蛋白质多肽序列，获得蛋白抗原表位多肽。进行两轮筛选，寻找结核病优势抗原多肽。利用ELISA进行验证，并将多肽与融合全蛋白进行检测效能的比较。结果筛选和验证出一条来自TrxC的抗原多肽，用于ELISA检测肺结核的敏感性和特异性分别是65％和80％，ROC曲线下面积为O．789，比用融合蛋白检测效果更优。结论多肽微阵列在寻找新的肺结核血清标志物方面具有很强的应用前景。

基于多肽微阵列芯片的荧光和共振光散射法筛选凝血酶抑制剂

研制了一种基于多肽微阵列芯片的荧光和共振光散射双通路检测方法,对血液样品中的凝血酶抑制剂进行检测。以生物素化的多肽微阵列芯片为反应平台,加入凝血酶水解多肽上的特异位点使其C末端的生物素解离,通过亲和素和生物素之间的特异性结合,用荧光探针和30 nm金纳米粒子探针标记此反应过程。凝血酶抑制剂阻止凝血酶对底物多肽的水解反应,通过荧光和共振光散射信号强度的变化检测抑制剂的抑制能力。酶溶液和加标人血清中测定的半抑制浓度(IC50)值:阿加曲班<抗凝血酶Ⅲ<4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐,IC50差的绝对值随抑制剂特异性的减弱而增大。当抑制剂浓度为7.5μmol/L时,血浆中5种化合物的抑制能力:阿加曲班>抗凝血酶Ⅲ>胰蛋白酶抑制剂>N-(反式-环氧丁二酰基)-L-亮氨酸-4-胍基丁基酰胺>4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐。在血浆中考察了阿加曲班和抗凝血酶Ⅲ的可逆性。对比荧光法和共振光散射法在血液样品中的检测结果,用30

多肽微阵列筛选技术在肺结核诊断中的应用

目的血清免疫学技术广泛用于肺结核检测，但已有的血清标志物其敏感性和特异性还有待提高，需要发掘新的血清标志物。方法利用多肽微阵列技术解析结核菌抗原PPE—FAMILY（RV2430e），SodC（Rv0432）和TrxC（Rv3913）全长蛋白质多肽序列，获得蛋白抗原表位多肽。进行两轮筛选，寻找结核病优势抗原多肽。利用ELISA进行验证，并将多肽与融合全蛋白进行检测效能的比较。结果筛选和验证出一条来自TrxC的抗原多肽。用于ELISA检测肺结核的敏感性和特异性分别是65％和80％，ROC曲线下面积为0．789，比用融合蛋白检测效果更优。结论多肽微阵列在寻找新的肺结核血清标志物方面具有很强的应用前景。

多肽芯片技术在药物筛选中的应用研究

由蛋白芯片技术发展而来的多肽芯片,正成为生物学和化学中高通量方法的有力工具。多肽芯片上高度集成上千成万的肽片段,具有高度的特异性,只需微量的样本即可快速获得各项生理学信息。多肽芯片已广泛应用于抗体表位筛选、蛋白质结构与功能研究、酶与底物相互作用等。同时,多肽芯片在新药开发、药物筛选、药物分析等方面具有重大的应用前景。

HPV-16多肽在前列腺癌患者血清抗体筛查中的应用

目的探讨HPV-16感染与前列腺癌的相关性及基于HPV-16多肽微阵列芯片在前列腺癌患者血清筛查中的应用。方法对来自HPV-16病毒的7个蛋白的胞外段序列进行叠瓦式切割,构建基于241条精细多肽库的微阵列芯片,对经病理确诊的72例前列腺癌患者和87例前列腺增生患者行血清学筛查。用微阵列芯片表达差异显著分析法筛选在前列腺癌患者和前列腺增生患者血清中具有差异性表达的多肽(特异性多肽);以受试者工作特征曲线(receiver operator characteristic curve,ROC)评价这些多肽对前列腺癌的诊断价值,并与PSA相比较。结果HPV-16多肽在两组血清中的抗体响应不同,与HPV-16多肽反应的自身抗体既存在于前列腺癌患者中,也存在于前列腺增生患者中。其中存在15条多肽,与之响应的抗体在两组血清中呈差异性表达;对这15条具有潜在诊断价值的多肽进行ROC曲线分析,发现多指标联合的诊断模型具有更高的诊断效率,由15条多肽构成的多指标联合诊断模型ROC曲线下面积为0.772,在最佳临界值的诊断灵敏度为75.3%,特异度为61.8%;PSA的ROC曲线下面积为0.770,在最佳临界值的诊断灵敏度为65.3%,特异度83.9%。结论前列腺癌患者血清中存在HPV-16特异性自身抗体,并可通过HPV-16多肽微阵列技术加以检测。

血清p53自身抗体对胶质瘤诊断与预后判断价值探讨

目的脑胶质瘤目前尚缺乏血清学的指标用于早期诊断以及判断预后。本研究拟探索胶质瘤患者血清中p53自身抗体表达在胶质瘤诊断和预后判断中的价值。方法选取苏州大学附属第一医院2013-01-01-2014-12-30收治的48例脑胶质瘤患者的肿瘤组织和血清作为研究对象,选取同期38例正常人血清为对照。采用多肽微阵列纳米芯片技术检测患者血清中p53自身抗体对多肽的响应,聚合酶链反应(PCR)检测组织中p53mRNA的表达,免疫组织化学法检测组织中p53蛋白的表达水平。结果 48例胶质瘤血清样本中,p53自身抗体的信号噪声比(signal noise ratio,SNR)总值为19.05±22.21,高于正常人群的7.08±5.75。p53自身抗体的胶质瘤诊断cut-off值为18.58,ROC曲线下面积为0.63。48例患者中p53自身抗体阳性率37.5%,38名正常对照p53自身抗体阳性率2.6%。p53自身抗体对胶质瘤诊断的敏感性为37.50%,特异性为97.36%。p53自身抗体在不同级别的胶质瘤中无明显差异。p53自身抗体与p53mRNA水平以及免疫组化中的p53蛋白表达未见明显相关性。对48例胶质瘤患者进行随访发现,p53自身抗体阳性的患者较阴性的患者有较长的生存时间,差异有统计学意义,P<0.05。结论正常人血清p53自身抗体阳性率较低,而胶质瘤患者血清中p53自身抗体阳性率较高,且SNR值较高。多肽微阵列技术检测血清p53自身抗体在胶质瘤诊断有一定的作用。对于胶质瘤患者术后的随访以及预后判断具有较大的价值。