基于特征多肽抗原的阿胶基原鉴定

目的 以特征多肽为半抗原并制备多克隆抗体,鉴定阿胶原材料基原。方法 经文献调研及数据库比对筛选特征多肽,将多肽抗原与血蓝蛋白偶联并免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,通过ELISA、dot blot和Western blot分析与验证多克隆抗体的产生、效价及特异性。结果 筛选所得5个特征多肽序列均具有T细胞表位和B细胞表位,亲水性-1~0,二级结构大多为无规则卷曲。多肽抗原ECS1、ECS3~ECS5在二次加强免疫后,效价分别为1∶6 400、1∶400、1∶12 800和1∶800。制备所得的多克隆抗体之间不产生交叉反应,而且多克隆抗体Ab-ECS3与驴皮及其伪品蛋白的结合显现出较大差异。结论 以特征多肽为半抗原制备所得的多克隆抗体可通过Western blot对驴皮进行真伪鉴别,为胶类中药的基原鉴定提供了参考。

血清神经元特异性烯醇化酶、胃泌素释放肽前体、组织多肽抗原检测对非小细胞肺癌的诊断价值

目的探讨血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、组织多肽抗原(TPA)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)检测对非小细胞肺癌的诊断价值。方法选取80例非小细胞肺癌患者作为肺癌组,另选取80例肺良性疾病患者作为对照组。比较两组患者血清NSE、ProGRP、TPA水平,比较血清NSE、ProGRP、TPA单独及联合检测对非小细胞肺癌的诊断效能。结果肺癌组患者血清NSE、ProGRP、TPA水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。血清NSE、ProGRP、TPA联合检测诊断非小细胞肺癌的灵敏度、阳性预测值、阴性预测值、约登指数分别为88.75%、79.78%、87.32%、0.662,均高于血清NSE、ProGRP、TPA单独检测。结论血清NSE、ProGRP、TPA联合检测可提高非小细胞肺癌的诊断效能。

癌胚抗原、组织多肽抗原、糖类抗原19-9、维生素K缺乏或拮抗剂-Ⅱ诱导蛋白、甲胎蛋白联合检测对原发性肝癌的诊断价值

目的 探讨血清癌胚抗原(CEA)、组织多肽抗原(TPA)、糖类抗原19-9(CA19-9)、维生素K缺乏或拮抗剂-Ⅱ诱导蛋白(PIVKA-Ⅱ)、甲胎蛋白(AFP)联合检测对原发性肝癌的诊断价值。方法 选取83例疑似原发性肝癌患者,以手术病理结果作为金标准,分析血清CEA、TPA、CA19-9、PIVKA-Ⅱ、AFP单独及联合检测对原发性肝癌的诊断效能,比较不同临床分期原发性肝癌患者的血清CEA、TPA、CA19-9、PIVKA-Ⅱ、AFP水平,采用Pearson相关分析法分析血清CEA、TPA、CA19-9、PIVKA-Ⅱ、AFP水平与原发性肝癌患者临床分期的相关性。结果 血清CEA、TPA、CA19-9、PIVKA-Ⅱ、AFP联合检测诊断原发性肝癌的灵敏度、特异度、准确度及约登指数分别为95.95%、88.89%、95.18%、0.85,均高于各指标单独检测。不同临床分期原发性肝癌患者的血清CEA、TPA、CA19-9、PIVKA-Ⅱ、AFP水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01);随着临床分期的升高,原发性肝癌患者的血清CEA、TPA、CA19-9、PIVKA-Ⅱ、AFP水平均逐渐升高。相关性分析结果显示,血清CEA、TPA、CA19-9、PIVKA-Ⅱ、AFP水平与原发性肝癌患者的临床分期均呈正相关(P﹤0.05)。结论 血清CEA、TPA、CA19-9、PIVKA-Ⅱ、AFP可作为临床诊断原发性肝癌和监测病情进展的客观实验室指标,单独检测的诊断效能一般,联合检测可提高诊断效能,更有利于原发性肝癌的早期检出。

刺激人γδ^+ T细胞增殖的结核杆菌多肽抗原的纯化与活性鉴定

目的:纯化可刺激人γδ+ T细胞增殖的结核杆菌耐热多肽抗 原。方法:采用快速蛋白液相色谱仪(FPLC)S-100分子筛层析柱,对结核杆菌耐热抗原(Mtb-Ag)初步分离。将获得的结核杆菌耐热Mr低的多肽抗原(Mtb-LW-Ag)洗脱峰,分别再经FPLC Mono Q离子交换层析柱进一步纯化,并且采用流式细胞仪对获得的Mtb-LW-Ag进行刺激γδ+ T细胞增殖活性的测定。结果:Mtb-Ag经FPLC S-100柱可分离出1个大分子蛋白峰A和3个M,低的多肽峰(B,C,D)。Mr低的多肽峰分别经Mono Q柱层析,鉴定出B峰含有6个主峰,C峰含有1个主峰,D峰含有8个主峰。对Mtb-LW-Ag及其纯化多肽进行活性检测,发现多肽峰B和C以及纯化多肽B-Ⅲ和C-主肽均可显著刺激γδ+ T细胞扩增。结论:利用FPLC法可快速高效地从Mtb-Ag中纯化出多种Mr低的多肽,而且其中的B-Ⅲ多肽和C-主肽可能是促进γδ+ T细胞活化增殖的主要多肽。

纯化的结核杆菌多肽抗原刺激人γδT细胞的效应分析

目的 :探讨从结核杆菌多肽抗原 (Mtb Ag)纯化的多肽 (C主肽 )对人新鲜外周血γδT细胞的促增殖效应以及对已活化扩增的T细胞再次刺激的激活效应。方法 :采用不同剂量的C主肽体外刺激健康人外周血PBMC ,培养 10天时经流式细胞仪检测细胞表型 ;另外以γδT细胞活化标志分子CD6 9的表达为指标 ,分析C主肽对已被Mtb Ag激活扩增 13天的γδT细胞再次刺激的激活效应。同时以MTT法检测C主肽的再刺激对已活化扩增的γδT细胞的促增殖活性。结果 :结核杆菌C主肽对人新鲜的γδT细胞具有显著扩增效应 ;当C主肽再刺激已经活化的γδT细胞时 ,可使其显著表达CD6 9分子 ,同时对γδT细胞具有显著促增殖活性。结论 :结核杆菌C主肽可能是Mtb

组织多肽抗原联合ProGRP、CEA、NSE、SCC、CYFRA21-1在肺癌诊治中的价值

目的评估组织多肽抗原(TPA)联合Pro GRP、CEA、NSE、SCC、CYFRA21-1在肺癌诊断与疗效监测中的应用价值。方法用化学发光法和电化学发光法检测238例肺癌患者、25例肺部良性疾病患者及65名健康对照者血清中的TPA、Pro GRP、NSE、SCC、CYFRA21-1和CEA水平,并对33例肺癌患者进行随访检测。同时用SPSS19.0统计软件及接受器工作性能曲线(ROC)分析,评价肿瘤标志物的临床应用价值。结果肺癌患者血清TPA水平(中位数为130.45 U/L)明显高于肺部良性疾病患者(中位数为82.21 U/L)和健康对照组(中位数为70.96 U/L)(P=0.000,0.002)。根据ROC曲线分析,TPA检测肺癌的临界值为130 U/L,敏感度为50%,特异性为88.9%,相比于其他肺癌标志物(Pro GRP、NSE、SCC、CYFRA21-1、CEA),敏感度较高,特异性稍低。肺癌患者血清TPA水平及阳性率随着肿瘤分期的升高而升高(P均<0.05)。TPA水平与疗效也密切相关,临床治疗有效时TPA下降,而病情恶化或出现转移时则升高。各种组合检测中,以六项组合诊断肺癌的敏感度和有效性最高。结论 TPA联合Pro GRP、CEA、NSE、SCC、CYFRA21-1测定在肺癌的诊断、疗效及监测复发转移中,具有一定的临床价值。

刺激人γδT细胞增殖的结核杆菌多肽抗原的生物学特性分析

目的 :分析可刺激人γδT细胞增殖的结核杆菌多肽抗原(Mtb Ag)的某些生物学特性。方法 :以结核杆菌分泌蛋白与经透析或链霉蛋白酶处理的Mtb Ag体外分别刺激人外周血单个核细胞 (PBMC)增殖 ,培养 10d时 ,采用流式细胞仪分析细胞的表型。结果 :透析后的Mtb Ag刺激γδT细胞增殖的活性未见明显降低 ;而经链霉蛋白酶处理的Mtb Ag促进γδT细胞增殖的活性则显著下降。另外 ,与结核杆菌分泌蛋白相比较 ,Mtb Ag刺激γδT细胞增殖的活性显著增强。 结论 :Mtb Ag中可刺激人γδT细胞增殖的成分是一种相对分子质量 (Mr)大于 10 0 0 0、非分泌性。

多肽抗原检测淋球菌抗体ELISA法的建立及应用

目的建立多肽抗原检测淋球菌抗体的ELISA方法。 方法用固相合成肽方法合成 2个淋球菌多肽抗原 ,建立测定淋球菌抗体的酶免疫测定 ,并对 89份正常人血清和 47份淋病患者血清进行检测。 结果批内测定变异系数为 7 1% ;批间测定变异系数为 10 7%。与金标记的试剂盒平行检测临床标本符合性良好。 结论该方法操作简单 ,试剂稳定 ,已制备成试剂盒在国内应用 。

联合检测血清胃泌素释放肽前体和特异性组织多肽抗原在小细胞肺癌诊断中的临床价值

目的:探讨联合检测血清胃泌素释放肽前体(ProGRP)和组织多肽特异性抗原(TPS)在小细胞肺癌(SCLC)诊断中的临床意义。方法:采用ELISA法测定93例SCLC患者、63例肺良性疾病患者和62例正常对照组的ProGRP和TPS水平,并对其结果进行比较。结果:SCLC组患者血清ProGRP、TPS水平[(436.4±765.8)ng/ml、(367.8±518.7)U/L]显著高于肺良性疾病组[(21.7±9.5)ng/ml、(101.1±45.1)U/L]和正常对照组[(17.3±9.5)ng/ml、(85.6±37.4)U/L](P<0.01),SCLC组患者血清ProGRP、TPS水平Ⅲ、Ⅳ期显著高于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.01),ProGRP和TPS诊断SCLC的敏感性分别为67.5%和59.4%,特异性分别为97.6%和82.4%。Ⅲ、Ⅳ期(79.6%,83.7%)ProGRP和TPS诊断SCLC的敏感性均明显高于Ⅰ、Ⅱ期(50%,52.9%)。联合检测ProGRP和TPS敏感性和特异性分别为81.9%和80%。治疗前ProGRP和TPS水平[(604.4±637.3)ng/ml、(538.3±650.5)U/L]分别是治疗后[(141.5±179.1)ng/ml、(275.2±269.9)U/L]的4.27倍和1.96倍,治疗前ProGRP、TPS和治疗后比较有显著差异(P<0.05),治疗效果明显。结论:ProGRP作为一种新的SCLC肿瘤标志物,对SCLC诊断敏感、特异,ProGRP比TPS具有更高的特异性,同时检测,起到优势互补的作用,有助于提高SCLC早期的阳性检出率,减少漏诊率,对判别病情变化及疗效有重要作用。

血清组织多肽抗原对11种恶性肿瘤的诊断价值探讨

目的:检测11种恶性肿瘤患者血清中组织多肽抗原(TPA)变化,探讨TPA在诊断恶性肿瘤中的价值。方法:应用TPA酶免试剂盒,采用双抗体夹心法定量测定血清中TPA含量。结果:11种恶性肿瘤患者血清TPA总阳性率21.13%(115/544),其中肝癌73.53%(25/34),胰腺癌62.64%(14/22),卵巢癌39.58%(19/48),肺癌32.50%(13/40),结直肠癌16.95%(10/59),淋巴瘤15.15%(5/33),胃癌13.79%(12/87),乳腺癌9.89%(9/91),食管癌6.98%(3/43),胶质瘤6.82%(3/44),咽喉癌4.65%(2/43),腺癌24.56%(42/171),鳞癌9.86%(7/71),转移癌27.08%(75/277),非转移癌16.89%(38/225)。结论:血清TPA在肝癌、胰腺癌、卵巢癌和肺癌中有较高阳性率,可以鉴别诊断腺癌和鳞癌,转移癌和非转移癌。对临床肿瘤患者治疗方案的选择有重要的参考价值。

戊型肝炎病毒ORF2编码多肽抗原的表达及其特性研究

迄今所发现的唯一的戊型肝炎病毒 (HEV)中和表位定位于开放读码框架 2 (ORF2 )编码蛋白的第 5 78和第 6 0 7氨基酸(aa)之间的区域。将对应于此区域的基因片段通过一段柔性的甘氨酸铰链与乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)基因的 3’端相连 ,构建成HBV/HEV融合基因。该融合基因在毕赤酵母细胞内的表达产物为分子量约 2 9kDa的融合蛋白 ,具有组装成嵌合病毒样颗粒 (VLP)的能力。此嵌合VLP具有与HBsAgVLP相似的特性且保留了天然HBV/HEV双重抗原性。对此嵌合VLP特性的初步研究提示其可能具有HBV/HEV双价重组疫苗的潜在应用前景。

神经酰胺对结核杆菌低分子多肽抗原诱导的γδT细胞活化及凋亡作用

目的 :研究神经酰胺对结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb)诱导的γδT细胞活化及凋亡作用。方法 :用结核杆菌低分子多肽抗原刺激正常人PBMC ,并用磁珠阳性分选法获得高纯度的γδT细胞。通过MTT试验观察神经酰胺、鞘磷脂酶以及神经酰胺合成酶抑制剂FumonisinB1对γδT细胞的活化作用 ;FACS检测其对γδT细胞的凋亡作用。结果 :Mtb刺激获得的γδT细胞可达 73 % ,磁珠分选后可高达 98% ;高浓度神经酰胺及鞘磷脂酶能抑制γδT细胞的增殖 ,而出现凋亡 ,FumonisinB1则对γδT细胞的增殖及凋亡无明显影响。结论

结核杆菌低分子多肽抗原诱导活化的γδ＋T细胞的细 …

目的 探讨选择性扩增人γδ＋Ｔ细胞的方法及其细胞毒性。方法 用耐热性结核杆菌低分子多肽抗原（Ｍｔｂ）刺激正常人ＰＢＭＣ，并用磁珠阳性分选法获得高纯度的γδ＋Ｔ细胞，通过ＭＴＴ试验观察γδ＋Ｔ细胞对人红白细胞白血病细胞株Ｋ５６２的细胞观察γδ＋Ｔ细胞对人红白细胞白血病细胞株Ｋ５６２的细胞毒活性。结果 Ｍｔｂ刺激及磁珠分选后的γδ＋Ｔ细胞可达７３％和９８％。

多肽抗原检测心肌肌球蛋白重链抗体方法研究

目的建立抗肌球蛋白重链(AMHC)自身抗体的间接酶联免疫吸附法(ELISA),并探讨此抗体与病毒性心脏病的关系。方法以合成肽作为抗原,建立ELISA方法,检测心肌炎40例,扩张型心肌病48例和30名正常人血清中AMHC自身抗体。结果阳性血清批内和批间变异系数分别为0.086与0.127,用抗原吸收后,吸光度(A)值下降了62.9%,慢性病毒性心肌炎,扩张型心肌病患者AMHC自身抗体阳性率分别为42.1%和47.9%,显著高于急性病毒性心肌炎组(9.5%)和正常对照组(3.3%)。结论用多肽抗原代替天然肌球蛋白检测AMHC自身抗体,特异性和敏感性高,操作简便,为临床开展心肌炎、心肌病的免疫学监测提供了新的检测方法。

NDV单抗针对多肽抗原的鉴定

经对液氮保存的抗鸡新城疫病毒单抗杂交瘤细胞株进行复苏、再克隆,并用ELISA 和IIF筛选,得到24 株分泌力较强的细胞株。将这些细胞株再接种BALB/C小鼠,取其腹水进行预处理,测其ELISA 效价、IIF效价,并用Westernblotting 测定它们所针对的中国标准强毒株F48 E8 的多肽抗原表位。

FBL-3肿瘤抗原的实验研究:Ⅰ.抗原的预测及合成多肽抗原性的验证

T细胞在肿瘤免疫中发挥着重要作用,它是通过T细胞抗原受体(TCR)识别肿瘤细胞表面由MHC分子呈递的肿瘤源性多肽,其中细胞毒T淋巴细胞(CTL)是通过识别肿瘤细胞MHC I类分子结合并呈递的多肽。研究表明:CTL识别的多肽常由8～9个氨基酸组成,多肽的呈递受MHC分子等位型的限制,不同的MHC分子具有不同的等位型特异的多肽结合基序(peptidebinding motif)。FBL-3是B6小鼠(H-2~b)源由Friend病毒诱导的小鼠白血病细胞,灭活FBL-3免疫B6小鼠可诱导FBL-3特异CTL产生,从而建立FBL-3特异的免疫应答,保护小鼠免受FBL-3的致瘤性。因此,实验中根据H-2D^b多肽结合基序和Friend病毒gag基因序列,预测出7个可能编码FBL-3抗原多肽的片段。根据预测的结果人工合成了7个九肽(gag1-gag7)。实验结果显示:合成多肽免疫B6小鼠可诱导多肽特异的CTL产生,但用体外实验方法不能诱导初次免疫应答;FBL-3特异CTL可以杀伤gag3,gag5致敏的靶细胞EL-4(H-2~b),但体内实验表明gag3,gag5不象FBL-3一样,它们体内免疫后不能建立有效的抗FBL-3肿瘤免疫效应。表明预测的7个多肽可能不是FBL-3的肿瘤抗原。文中讨论了多肽抗原性预测的复杂性和可能的对策。

组织多肽抗原、糖类抗原及癌胚抗原联合检测在大肠癌早期诊断及治疗中的意义

[目的]探讨组织多肽抗原(TPA)、糖类抗原242(CA 242)和癌胚抗原(CEA)3种肿瘤标志物检测在大肠癌诊断和疗效观察中的应用价值.[方法]应用ELISA法测定60例健康成人及82例大肠癌患者血清TPA,CA 242和CEA水平,并对34例大肠癌患者行术后随访复检.[结果]大肠癌患者血清TPA,CA 242和CEA水平及检测阳性率均明显高于正常组,3项肿瘤标志物联合检测大肠癌的阳性检出率明显升高;大肠癌患者经有效治疗后3项肿瘤标志物水平显著降低.[结论]TPA,CA 242和CEA联合检测对大肠癌的诊断及术后疗效观察有意义.

晚期非小细胞肺癌病人血清组织多肽抗原水平对预后的影响

①目的探讨晚期非小细胞肺癌(NSCLC)病人血清组织多肽抗原(TPA)水平对病人预后的影响。②方法对78例晚期NSCLC病人给予4～6周期化疗,其中24例辅助放疗。所有病人在治疗前抽血测血清TPA。③结果34例病人(43.6%)血清TPA水平升高,其1年生存率为11.6%,2年生存率为0。血清TPA水平正常的病人1年生存率为56.8%,2年生存率为13.6%。两者生存率差异有显著性(χ2=3.95,P<0.05)。Cox多因素分析表明,病人的预后与TPA水平(P=0.000)和疗效(P=0.047)有关。④结论血清TPA水平可作为判断晚期NSCLC病人预后的一个独立指标。