系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎患者ANA、ENA多肽谱及抗ds-DNA抗体联合检测的意义

系统性红斑狼疮(SLE)患者81例,类风湿性关节炎(RA)患者46例,健康体检者30例,抽取血液,分离血清,分别用间接免疫荧光法检测ANA、免疫印迹法检测ENA多肽谱、金标免疫斑点法检测抗ds-DNA抗体。发现SLE患者中,ANA阳性率为90.1%,ENA阳性率为85.2%,抗ds-DNA抗体阳性率为61.7%,三种抗体联合检测阳性率达97.5%;RA患者阳性率分别为34.8%、19.6%、15.2%、52.2%。提示自身免疫性疾病患者体内存在多种自身抗体,联合检测ANA、ENA、抗ds-DNA三项指标有助于疾病的诊断和鉴别诊断。

应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法研究原发性胆汁性肝硬化的血清多肽谱

目的应用弱阳离子交换磁珠提取多肽结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF-MS)分析原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者的血清多肽谱,寻找具有潜在意义的血清标志物。方法收集105例血清样本,包括55例PBC患者、25例其他肝病患者和25例正常对照者血清样本,经弱阳离子交换磁珠纯化,MALDI-TOF-MS分析及ClinProTools生物信息学方法研究其血清多肽表达谱。结果在质荷比(m/z)1000～10 000 Da的范围内3组间共检测到158个血清多肽峰,其中83个有统计学意义(P<0.001),在PBC中表达上调的多肽有31个,表达下调的多肽有52个。组合m/z 1062.47、5356.13、4268.63、846.18、1945.31和6649.53Da 6个峰建立多肽诊断指纹图谱模型,该模型盲样验证的准确率在PBC组、正常对照组和其他肝病组分别为100%、81.8%和72.7%。结论可以利用MALDI-TOF-MS技术和ClinProTools软件来筛选PBC血清标志物,其在PBC诊断方面具有一定的价值。

DWT-PLS在SELDI-TOF MS血清多肽谱解析中的应用

针对表面增强激光解吸/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)血清多肽谱解析,首先采用离散小波变换(discrete wavelet transform,DWT)对数据进行滤噪、压缩;再采用偏最小二乘(partial leastsquares,PLS)法建立癌症诊断预测模型.考察了DWT对血清多肽谱数据预滤噪、压缩的效率,同时重点研究了小波分解尺度、主成分数对诊断预测准确率的影响.研究结果表明,采用DWT-PLS法解析血清多肽谱简便、高效、预测准确.

直肠癌血清多肽谱诊断模型的建立及其应用效果

目的建立直肠癌血清多肽谱诊断模型,并探讨其在诊断直肠癌中的应用效果。方法应用液体芯片飞行时间质谱技术分析119例直肠癌患者(直肠癌组)及127例健康人(对照组)的血清多肽谱,建立直肠癌血清多肽谱诊断模型。以病理诊断为"金标准",分析筛选出的血清多肽单独诊断和血清多肽谱诊断模型的灵敏性、准确率和特异性。使用ELISA检测两组血清中表达有差异的蛋白标志物的水平。结果多因素非条件logistic回归筛选出EHD家族蛋白2(EHD2)、1-异戊烯半胱氨酸氧化酶(Pcyox1)及α2-硫醇蛋白抑制酶(KING1)作为诊断模型中的变量,建立血清多肽谱诊断模型p=1÷[1+e-(0.002EHD2+0.006Pcyox1+0.003KING1)]。该血清多肽谱诊断模型诊断直肠癌具有较高的灵敏性、准确率及特异性,分别为82.3%、87.4%及92.1%,ROC曲线面积为0.892。直肠癌组EHD2、KING1表达水平明显高于对照组(P<0.05),Pcyox1表达水平明显低于对照组(P<0.05)。结论基于EHD2、Pcyox1及KING1蛋白的直肠癌血清多肽谱诊断模型具有较高的灵敏性、准确率及特异性,具有一定的临床应用价值。

五种革兰阴性菌血流感染小鼠血清多肽谱的研究

目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)分析5种革兰阴性菌血流感染所致小鼠血清多肽指纹图谱的变化,寻找其共有的多肽峰,并建立相应的诊断模型。方法分别建立ICR小鼠大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和变形杆菌等5种革兰阴性菌的血流感染模型,收集不同时间段血清,行MALDI-TOFMS检测,采用BioExplorer软件分析感染组之间以及感染组与对照组之间的血清差异多肽指纹图谱。结果大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和变形杆菌感染组分别获得95、104、127、115和103个多肽峰;与对照组比较,其差异多肽峰数量分别为73、50、99、62和77个(P<0.01),其中表达趋势为感染组高于对照组的多肽峰有4个,表达趋势为感染组低于对照组的有9个。结论利用MALDI-TOF MS发现了5种常见革兰阴性菌血流感染血清多肽指纹图谱的共有特征峰,为后续寻找血流感染标志物奠定了基础。

血清多肽谱对高级别浆液性卵巢癌诊断价值分析

目的寻找高级别浆液性卵巢癌相关的血清标志,并评价其诊断价值。方法收集2006-07-17-2011-03-30浙江省肿瘤医院卵巢癌血清样本165例,均经病理确诊。采用纳米磁珠结合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,检测95例高级别浆液性卵巢癌患者、34例其他上皮性卵巢癌患者、36例卵巢良性肿瘤患者和70名健康志愿者血清样本,并获得血清多肽谱。采用Biomarker Wizard软件分析所获得的多肽谱找出差异蛋白,进一步采用SPSS 12.0中ROC曲线分析差异蛋白,评价其诊断灵敏度和特异性。结果通过34例高级别浆液性卵巢癌患者和34名年龄匹配的健康人群血清多肽谱比较筛选出8个差异峰,P<0.000 1。进一步扩大样本量,经分析ROC曲线面积>0.9的有2 742、8 568和8 692m/z 3个差异峰;当差异峰2 742m/z取临界值24.31时,其诊断敏感性和特异性分别为90%和84.2%,其中早期卵巢癌诊断敏感性为82.35%。早期(Ⅰ、Ⅱ)与晚期(Ⅲ、Ⅳ)高级别浆液性卵巢癌比较有3 163、4 180和4 288m/z 3个差异峰,P<0.01,其ROC曲线面积均>0.7;其中3 163m/z鉴别早晚期高级别浆液性卵巢癌敏感性和特异性分别为52.9%和88.5%。高级别浆液性卵巢癌患者与其他上皮性卵巢癌患者比较无明显差异峰。高级别浆液性卵巢癌患者和卵巢良性肿瘤患者比较有13 745、15 930和28 111m/z 3个差异峰,P<0.01,ROC曲线面积>0.7的差异峰有15 930和28 111 m/z;其中15 930 m/z的鉴别诊断敏感性和特异性分别达到52.6%和80.6%。结论 2 742m/z差异蛋白对于早期高级别卵巢癌具有较高的诊断价值,3 163m/z在早期和晚期高级别浆液性卵巢癌患者的鉴别诊断中有一定价值,15 930m/z对于高级别浆液性卵巢癌和良性卵巢肿瘤鉴别诊断有一定的价值。

血清多肽谱检测对子宫内膜癌早期诊断价值

目的研究子宫内膜癌患者血清多肽谱的变化,探讨子宫内膜癌早期诊断相关的差异蛋白。方法选取2008-05-01-2011-05-31浙江省肿瘤医院收治的子宫内膜癌患者134例、子宫体良性病变患者103例和健康女性志愿者95名作为研究对象。将研究对象分为测试组（45例Ⅰ期子宫内膜癌患者和45名健康女性）、验证组（134例子宫内膜癌患者和95名健康女性）,采用基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-associated laser disso-ciation/ionization time of flight mass spectrmtry,MALDI-TOF-MS）结合纳米磁珠技术测定其血清多肽谱,Biomarker Wizard软件筛选差异蛋白峰,采用SPSS 12.0中ROC曲线分析差异峰建立诊断模型,进一步评价模型对诊断子宫内膜癌的敏感度和特异性,并分析差异蛋白峰在各期子宫内膜癌及子宫良性病变患者中的分布情况。结果血清多肽谱检测结果显示,测试组质荷比为1 500~30 000m/z,共测得82个蛋白峰,其中有12个差异峰差异有统计学意义,P〈0.001。在12个差异峰中,取ROC曲线面积≥0.8的2 768、3 402和6 441m/z 3个差异峰作为子宫内膜癌的诊断模型,其敏感度分别为78.4%、75.4%和66.8%,特异性分别为92.6%、89.5%和86.2%;三者联合的敏感度和特异性为88.1%和75.8%。联合诊断模型鉴别子宫内膜癌和子宫良性病变的敏感度为94.9%。结论血清多肽谱检测筛查发现的差异峰2 768、3 402和6 441m/z能较正确的区分子宫内膜癌患者、健康人和子宫良性病变患者,有助于子宫内膜癌的早期筛查。

血清多肽谱在胃癌早期诊断中的应用价值

目的 寻找早期胃癌相关的血清标志物,并评价其诊断价值.方法 利用质谱联合纳米磁珠技术对433例胃癌患者（其中包括65例ⅠA期患者）和120名健康人群的血清多肽谱进行研究,用Biomarker Wizard软件筛选差异峰.将所有研究对象分为测试组（204例胃癌患者和70名健康人）和验证组（229例胃癌患者和50名健康人）.进一步用SPSS 12.0中ROC曲线分析差异峰,评价其灵敏度和特异性 并分析差异峰在不同分期的胃癌患者中分布情况.结果 通过42例胃癌患者和42名性别年龄匹配的健康人群血清比较筛选出13个差异峰（均P＜0.01）.在测试组和验证组中ROC曲线面积都在0.8以上的有2745、2768、6629、3402、6436 m/z 5个差异峰,同时鉴定出6629 m/z差异峰为甲状腺素运载蛋白.测试组分析显示,当6629 m/z取24.58这个截点时,可获得较高的诊断敏感度和特异度.验证组分析显示,6629 m/z总体诊断敏感度和特异度分别为65.5%和92.0%,对于ⅠA胃癌患者,其诊断敏感度为59.4%.结论 6629 m/z差异峰（甲状腺素运载蛋白）对于早期胃癌具有较高的诊断价值,有助于胃癌的早期筛查.

老年2型糖尿病患者尿液多肽谱分析与机制

目的对老年T2DM患者及健康人群尿液的多肽谱进行定量和定性分析,探讨老年T2DM患者与健康人群的标志性蛋白。方法取20例老年T2DM患者(老年T2DM组)和22名健康人(NC组)尿样,富集尿液中的多肽,并进行在线反相液相色谱分离和串联质谱分析,检测尿液中的多肽谱。获得的原始质谱图导入到ProteinPilot软件(v4.5)行数据库检索比对分析,以鉴定蛋白质。结果老年T2DM组尿液中测得816条多肽,对应100种蛋白;NC组尿液中测得1048条多肽,对应133种蛋白。两组尿液多肽含量和种类不同,对应的蛋白也不同。老年T2DM组尿液较NC组增加的多肽对应的蛋白为转甲状腺素蛋白(TTR)、载脂蛋白A-1(ApoA-1)、.ApoA-4、骨桥蛋白(OPN)及补体C3。结论尿液中的TTR、ApoA-1、ApoA-4、OPN及补体C3可能是区分老年T2DM患者和健康人群的标志性蛋白。

反相高效液相色谱与质谱联用分析合成七肽的消旋产物

采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)与质谱(MS)联用技术对固相法化学合成七肽(H2N-PFNSLAI-COOH,M r 760.9)时出现的消旋产物进行了分析。根据弱疏水性合成七肽粗品特性,提出了充分利用吸附和分配双重保留机制的“早期吸附”概念,以此优化色谱条件得到4个峰形良好的色谱峰;质谱分析表明:4谱峰具有相同的m/z761.5[M+H]+值,对每一消旋产物进行在线多肽测序,并利用串联质谱(MSn)谱图叠加的方法,得到b轴和y轴两套片段信息,成功确定了合成七肽的4个消旋产物。

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱研究白色念珠菌血流感染的血清多肽指纹图谱

目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析白色念珠菌所致血流感染的血清多肽指纹图谱,寻找差异多肽峰并建立相应的诊断模型。方法建立ICR小鼠白色念珠菌血流感染模型,收集血清标本,经弱阳离子磁珠纯化,MALDI-TOF MS检测及BioExplorer软件分析白色念珠菌感染与正常对照组的血清多肽指纹图谱,同时分析大肠埃希菌感染组、金黄色葡萄球菌感染组和白色念珠菌感染组的血清多肽指纹图谱。结果比较白色念珠菌感染组和正常对照组共得到135个多肽峰,其中表达上调的多肽有5个,表达下调的多肽有6个,表达呈先上调后下调的多肽有7个,组合m/z 1610.9、1742.3、2666.4、2778.0、3345.1、4528.8这6个峰建立诊断模型,该模型区分白色念珠菌感染的正确率为80.0%。综合比较大肠埃希菌感染组、金葡菌感染组和白色念珠菌感染组的血清多肽指纹图谱发现,有5个多肽峰在感染组中共同出现,分别为m/z 1513.8、2910.8、3538.1、3884.9和5007.3。结论利用MALDI-TOF MS可有效区分白色念珠菌感染和正常血清的多肽峰,同时感染中共同出现的多肽峰有望成为辅助诊断血流感染的标志物,通过建立相应的诊断模型能早期辅助诊断真菌性血流感染,为临床合理用药及标志物寻找提供依据。

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱研究细菌性血流感染的血清多肽指纹图谱

目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF MS)分析金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌引起的血流感染血清多肽指纹图谱,寻找差异多肽峰并建立相应的诊断模型。方法建立ICR小鼠金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌血流感染模型,收集血清标本,经弱阳离子交换磁珠纯化,MALDI-TOF MS检测及BioExplorer生物软件分析研究金葡菌感染组与正常对照组、大肠埃希菌感染组与正常对照组间血清多肽指纹图谱。结果比较金葡菌感染组与正常对照组发现,表达上调的多肽有6个,表达下调的多肽有7个,表达呈先上调后下调的多肽有8个。比较大肠埃希感染组与正常对照组发现,表达下调的多肽有5个,表达呈先下调后上调的多肽有4个,表达呈先上调后下调的多肽有8个。结论利用MALDI-TOF MS技术和Bio Explorer软件研究大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌血流感染的血清多肽,可以发现感染组与正常对照组间的差异多肽并有效地建立这两种细菌感染的诊断模型,对于细菌性血流感染的诊断具有一定的价值。

小鼠屎肠球菌血流感染的血清多肽质谱分析

目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)分析屎肠球菌血流感染后不同时间点小鼠的血清多肽指纹图谱,筛选差异多肽峰,建立相应的诊断模型并寻找新的标志物。方法 90只ICR小鼠分为对照组(10只)与感染组(80只)。其中,对照组注射无菌磷酸缓冲盐溶液(PBS),感染组注射1/2 LD50的菌液,注射量均为0.1 ml/10 g,分别于8个时间点(感染后1、3、6、12、24、48、96、128 h)收集血液标本检测白细胞介素(IL)-1α、IL-1β和IL-6水平。收集血清标本,经弱阳离子磁珠纯化后,行MALDI-TOF MS检测,并采用BioExplorer软件分析屎肠球菌感染组与对照组的血清多肽指纹图谱。应用纳米液相色谱-电喷雾电离-串联质谱对候选多肽氨基酸序列进行鉴定。结果与对照组相比,感染组小鼠精神萎靡,活动减少;其血液中IL-1α含量呈下降趋势,IL-1β和IL-6呈上升趋势。分析多肽指纹图谱,共检测到102个血清多肽峰,以感染组与对照组含量相差5倍为基准筛选出了8个感染组高于对照组的多肽(P<0.01),9个感染组低于对照组的多肽(P<0.01)。以m/z分别为1227.4、1512.9、4509.7、5007.3、7816.7的5个多肽峰建立的诊断模型准确率为80.0%,特异性为76.6%,敏感性为83.3%。经二级质谱鉴定:m/z 1227.4为β2-微球蛋白,m/z5007.3为补体C3。结论利用MALDI-TOF MS技术和BioExplorer软件研究屎肠球菌血流感染的血清多肽,可以发现感染组与对照组间的差异多肽,并有效地建立细菌感染的诊断模型。β2-微球蛋白和补体C3有望成为新的用于辅助诊断细菌性血流感染的标志物。

胰腺癌胰液肽表达谱变化的分析

目的:分析正常胰液与胰腺癌胰液多肽表达谱的差异。方法:用ZipTipC18提取胰液样品多肽,采用基质辅助激光解析离子化飞行时间/飞行时间质谱技术(MALDITOF/TOFMS)对胰液的多肽表达谱进行肽质量指纹图谱(PMF)分析,对获得的数据进行标准化处理,对高丰度的差异肽段进行TOF/TOF分析,建立胰腺癌胰液的诊断模型。结果:通过质谱分析,得到了反映胰腺癌胰液多肽组成的特征图谱,通过TOF/TOF分析,一个胰腺癌胰液相关的肽段鉴定为fibrinogenα链前体,氨基酸序列为DS-GEGDFLAEGGGVR。结论:ZipTipC18富集胰液样品后直接进行MALDI-TOF/TOFMS分析的技术,可应用于快速扫描与胰腺癌有关的多肽表达谱,建立胰腺癌胰液的多肽诊断模型,具有较好的临床应用价值。

MALDI-TOF分析多肽指纹图谱的进展与应用

1前言 蛋白组学研究是目前生命科学研究领域中的一大热点,蛋白组学研究中的关键技术之一是如何得到准确的多肽指纹谱图,以保证蛋白质的准确定性.基于方便、快速、简捷的要求,基体辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF)技术是目前分析多肽指纹谱图中最常用的方法.

准确是关键——MALDI-TOF分析多肽指纹图谱的进展与应用

蛋白组学研究是目前生命科学研究领域中的一大热点，蛋白组学研究中的关键技术之一是如何得到准确的多肽指纹谱图，以保证蛋白质的准确定性。基于方便、快速、简捷的要求，基体辅助激光解吸电离——飞行时间质谱（MALDI-TOF）技术是目前分析多肽指纹谱图中最常用的方法。

胃溃疡大鼠在合募配穴针刺后胃组织的纳升级二维液相色谱

目的:揭示合募配穴法治疗胃溃疡特异性效应和协同机制.方法:大鼠35只随机分为空白对照组、应激性胃溃疡模型组、募穴组(中脘穴)、下合穴组(足三里组)和合募配穴组(中脘穴配足三里穴组),利用水浸加捆绑法复制应激性胃溃疡模型大鼠,借助纳升级二维液相色谱(Nano-2D-LC)技术研究大鼠胃经下合穴及募穴针刺后胃组织差异蛋白表达谱峰.结果:在保留时间27和32min时,模型组、募穴组、下合穴组和合募配穴组比空白对照组多出色谱峰5个,并且色谱峰5个的峰面积依次对应缩小.结论:针刺对应激性胃溃疡的治疗机制可能与5种多肽含量的减小有关.

血清差异多肽检测技术及其在女性生殖系统恶性肿瘤早期诊断中的应用现状

理想的肿瘤标志物是实现肿瘤早期诊断的希望,也是临床研究的热点,但目前女性生殖系统恶性肿瘤尚无敏感性和特异性均较高的专属肿瘤标志物。血清差异多肽谱是通过检测血液中差异多肽片段所获得的图谱,可用于寻找某些疾病在血液中的潜在分子标志物并用于疾病的筛查和诊断。近年来其在宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌等早期诊断中的应用取得了一定进展。

自身免疫病中多种自身抗体的检测及分析

目的:通过对自身免疫病患者常用自身抗体的综合检测、分析,评价其在自身免疫病中的意义及价值。方法:选取临床上已确诊为自身免疫病患者216例作为疾病组(其中SLE患者102例,RA患者54例,MCTD患者18例,SS患者16例,PSS患者16,PM/DM患者10例),健康体检者30例作为对照组,抽取血液,分离血清,分别采用间接免疫荧光法、欧蒙免疫印迹法和ELISA法检测ANA、抗ds-DNA、ENA多肽谱、RF。结果:6种自身免疫性疾病中,RF的阳性检出率以类风湿性关节炎(RA)患者为最高(74.2%),干燥综合症(SS)患者次之(62.5%),而多发性皮肌炎(PM/DM)患者中未检出;ANA在6种自身免疫病患者中均有较高的阳性检出率,以系统性红斑狼疮(SLE)患者为最高(94.1%),混合性结缔组织病(MCTD)患者次之(88.9%),RA患者最低(33.3%);抗ds-DNA则只在2种自身免疫病患者中检出,其中SLE患者阳性检出率最高(80.4%),而RA患者较低(3.7%);6种自身免疫病患者中,ENA多肽谱的各种抗体的检出率差别较大,其中,抗SSA/R0均有检出,但阳性率不高(均低于40.0%),而抗-Histones只在SLE患者中有检出,抗Scl70只在系统性硬皮病(PSS)患者中有检出,抗J0-1则只在PM/DM患者中有检出,但抗U1-snRNP则在MCTD患者中检出率较高(88.9%),抗-Centromere均无检出。结论:自身免疫病患者同时检测多种自身抗体有助于疾病的特异性诊断和筛查。

LTQ和SELDI-TOF质谱对弱阳离子磁珠捕获的血清多肽和蛋白的鉴定

[目的]鉴定弱阳离子磁珠捕获的血清多肽和蛋白峰。[方法]收集经弱阳离子磁珠从人血清中捕获后洗脱下来的蛋白,然后经过HPLC分离,各组分的一部分跑SDS-PAGE胶并用LTQ质谱鉴定,另一部分采用SELDI-TOF检测,最后结合参考文献信息初步确定部分峰的鉴定结果。[结果]通过SELDI-TOF检测结果发现5个组分有比较明显的峰,基于LTQ质谱鉴定了这5个组分分子量在30kD以下的蛋白,数据库搜索结果显示评分在100分以上共鉴定出66个单一蛋白。并初步确定了13个SELDI-TOF上峰的蛋白结果。[结论]HPLC分离富集结合SELDI-TOF和LTQ质谱能比较有效地鉴定丰度比较高的差异峰,是各种差异峰鉴定策略的有益补充。