新多肽配体GE11与表皮生长因子受体的结合能力分析

应用亲和毛细管电泳(ACE)分析方法,对表皮生长因子受体(EGFR)和新多肽配体GE11之间的结合能力进行分析。结果表明,EGFR与多肽配体GE11之间存在特异性相互作用,考察EGFR在不同浓度GE11溶液中的迁移情况,采用非线性、双倒数、Y-倒数和X-倒数4个数据处理方法得到较好的数据拟合,并测得结合常数。该文为筛选多肽配体以及测定受体与多肽配体之间的结合常数提供了简便的方法,将有力推动肿瘤靶向药物输送的研究。

EGFR小分子多肽配体修饰提高阳离子脂质体对肿瘤细胞的转染效率

目的:用针对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的小分子多肽配体D4修饰PEG化的阳离子脂质体,观察其提高质粒DNA和siRNA对肿瘤细胞转染效率的作用。方法:将D4连接在DSPE-PEG2000的末端以修饰PEG化的阳离子脂质体,检测该载体系统对高表达EGFR的人非小细胞肺癌细胞株H1299中质粒DNA转染效率的影响,Sirius照度仪检测质粒DNA转染后H1299细胞荧光素酶的表达,荧光显微镜观察转染FAM-siRNA后H1299细胞的荧光强度。结果:制备的脂质体/质粒DNA复合物随着电荷比的提高,复合物粒径逐渐减小,复合物Zeta电位逐渐升高。在质粒DNA的转染中,与无修饰的非靶向脂质体相比,D4修饰的脂质体可以显著提高H1299细胞中荧光素酶的表达(P<0.05或P<0.01);D4修饰的脂质体在各个电荷比处对H1299细胞的转染效率显著高于无修饰的非靶向脂质体(P<0.05或P<0.01)。在FAM-siRNA的转染中,荧光显微镜下可以观察到D4修饰的脂质体组有更高水平的FAM荧光强度。结论:D4修饰的阳离子脂质体提高高表达EGFR肿瘤细胞中质粒DNA和siRNA的转染效率。

多肽配体技术在植物功能基因组学中的应用前景

人工智能配体或适配体(Aptamer)技术是近年来兴起的一项特异性极强的基因干扰技术。通过人工合成特异的智能配体结合靶基因的蛋白产物,达到特异干扰靶基因的生物学功能,这是人工智能配体技术的基本设想。文章综述了多肽配体(Peptide aptamer)技术在基因功能验证中的主要进展,着重阐明它在植物基因功能验证和作物抗病毒育种中的应用前景,并提出克服该技术主要风险对策。

多肽配体R18促进水稻弱势籽粒灌浆的初步研究

14-3-3蛋白在植物生长发育中具有重要的调控作用,其亚型GF14f在水稻弱势籽粒中高表达是其灌浆结实差的一个重要的原因。本研究首先通过分子对接的方式,发现多肽R18与GF14f蛋白具有潜在的结合位点,进而采用体外竞争性实验,发现R18能够竞争性的与GF14f蛋白结合,从而导致GF14f与SuS2、SS和AGPS三个互作靶蛋白间的结合力减弱,与此同时,体外酶活实验表明,外源添加R18能够显著提高淀粉合成酶(StSase)、蔗糖合成酶(SuSase)和ADPG焦磷酸化酶(AGPase)3个酶的活性。免疫共沉淀实验表明,R18在水稻籽粒中除了能和GF14f结合外,还能与GF14b、GF14c、GF14d及GF14e结合,BiFC结果也证实了上述结果。籽粒灌浆期,外源喷施60 mg L^(-1)浓度的R18于弱势籽粒上,StSase、SuSase及AGPase酶活性显著提高,弱势籽粒千粒重及结实率也显著提高。本研究结果表明,多肽配体R18能够与14-3-3互作靶蛋白竞争性结合,减弱14-3-3与靶蛋白间的结合力,进而释放籽粒灌浆过程中蔗糖转化及淀粉合成途径中关键酶的活性,从而有利于弱势籽粒灌浆充实。

新型靶向αvβ6多肽的设计、合成与亲和力评价

通过计算机辅助药物设计策略及固相合成法设计并筛选具有全新结构的αvβ6多肽配体,并用酶联免疫吸附法(ELISA)测定多肽配体与αvβ6的结合亲和力,建立αvβ6多肽配体的筛选方案.首先用Sybyl-X 1.3对αvβ6多肽配体及天然配体进行分子对接;其次用Amber 16对分子对接结果进行分子动力学模拟,确定多肽配体与αvβ6蛋白之间的结合模式,并以RGDLXXL(X为任意氨基酸)为多肽配体核心结构,通过逐步延伸氨基酸构建虚拟肽库,筛选获得长度为7~10个氨基酸的多肽配体,进一步通过相似氨基酸替换的方法设计筛选不同于RGDLXXL核心的新的多肽配体;最后用固相合成法合成新设计的多肽配体,利用间接ELISA法测定多肽配体-αvβ6的结合亲和力.已有多肽配体和天然配体的分子对接以及分子动力学模拟结果表明,αvβ6与配体的结合主要通过Asp218和多肽配体之间形成氢键,以及Mg2+和多肽配体形成金属螯合作用完成.结合虚拟组合筛选与相似氨基酸替换,发现GRTDLGTLLFR,GRRTDLATIHG,RTDVGRVRGRG和RGDVGRVGR等多肽均满足该结合模式,RTDVGRVRGRG与αvβ6的亲和力为10.76μmol/L.可见RTDVGRVRGRG与αvβ6亲和力良好,是一条全新的αvβ6多肽配体.

靶向细胞因子CD40的全新多肽配体的筛选与鉴定

CD40是肿瘤坏死因子受体(tumornecrosis factor receptor,TNFR)超家族成员,表达于免疫细胞、造血细胞、血管细胞、内皮细胞及多种类型的癌细胞表面。作者采用计算机虚拟筛选和细胞实验相结合的方法,研究了CD40蛋白的全新多肽配体。首先,通过同源建模构建CD40蛋白的三维结构;然后,用分子对接虚拟筛选出靶向CD40的多肽配体;再通过表面等离子体共振(surface plasmon resonance,SPR)分子结合实验、多肽靶向脂质体的细胞实验,验证并确定被命名为N9的六肽为CD40的全新配体。进一步研究发现,N9修饰的脂质体对其靶向细胞Raji和树突状细胞(dendritic cells,DC)的转染效果明显提高,提示N9有靶向介导转染的功能。

HPV16E711-20配体抗肿瘤免疫的作用

目的比较HPV16型E7抗原CTL表位E711-20(YMLDLQPETT)与其修饰多肽配体APL(YLLDLQPE-VT)诱发特异CTL免疫应答的能力和抗肿瘤免疫治疗的作用。观察E711-20及其APL的小鼠TC-1细胞肿瘤免除率、存活时间与荷瘤小鼠的肿瘤体积变化,了解其预防和治疗效果。方法以E711-20及其修饰多肽配体(APL)免疫C57BL/6小鼠,测定免疫后小鼠脾淋巴细胞的增殖指数;用LDH释放试验检测免疫后小鼠脾淋巴细胞的CTL杀伤活性。结果脾细胞增殖实验中,3组增殖指数如下:IFA+APL组2.42±0.38,IFA+E711-20组1.68±0.32,IFA组1.07±0.22;CTL杀伤效应实验中,3组靶细胞溶破率(%)如下:IFA+APL组54.21±0.12,IFA+E711-20组62.33±0.46,IFA组0.88±0.07;IFA组肿瘤免除率为0,IFA+E711-20组肿瘤免除率为40%,IFA+APL组肿瘤免除率为80%;荷瘤小鼠中,对照组IFA肿瘤体积迅速增大,E711-20和APL组的肿瘤生长速度较慢。APL免疫诱导的小鼠脾淋巴细胞,其CTL杀伤活性和增殖能力强于E711-20;APL对TC-1肿瘤细胞的预防和治疗效果优于E711-20。结论 APL诱导特异性抗肿瘤免疫应答的能力和抗肿瘤效果优于E711-20,可能为针对HPV16E7抗原的肽疫苗分子设计提供理想的CTL表位。

用蛋白质组学方法分析先兆子痫孕妇血清差异蛋白表达和急性反应蛋白

目的用蛋白质组学方法寻找先兆子痫患者血清蛋白的差异表达。方法 5例重度先兆子痫患者血清和5例正常妊娠对照血清分别混合。每个混合样本血清用亲水亲脂柱(hydrophilic-lipophilic balance,HLB)和多肽配体库磁珠(peptide ligandlibrary bead,PLLB)方法去除表达丰富蛋白,使低含量蛋白表达,洗脱液用1D胶联合液相色谱质谱串联技术(liquidchromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)对蛋白表达进行定量分析;结果 HLB方法共有28种蛋白发生差异表达;PLLB方法共有51种蛋白发生差异表达,包括白介素17F(IL-17F)和铜蓝蛋白(ceruloplasimin,CP)等。结论 PLLB联合1D胶-LC-MS/MS是鉴定血清中差异表达蛋白的一种有效方法;炎性反应因子可能与先兆子痫的发病机制有关。

Dual APL对EAMG免疫治疗时临床症状、黏附分子及趋化因子的影响

目的探讨双修饰性多肽配体(dual altered peptide ligand,dual APL)对实验性重症肌无力(ex-perimental autoimmune myastheia gravis,EAMG)鼻黏膜免疫耐受时临床症状的影响,以及黏附分子及趋化因子在EAMG鼻黏膜免疫致病耐受机制中的作用。方法用AChR-α肽段P259-271联合白细胞介素12(interleukin-12,IL-12)建立EAMG鼠模型,将模型鼠随机分为干预组(经鼻黏膜给予dual APL,n=13)和模型组(经鼻黏膜给予生理盐水,n=13),进行临床评分、重复神经电刺激、光镜下观察dual APL免疫干预后胸腺增生情况及电镜下神经肌肉接头突触后膜损害程度,用ELISA法检测细胞间黏附分子-1(in-tercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)及趋化因子-10(interferon inducible protein-10,IP-10)的表达。结果①dual APL免疫干预后可诱导鼻黏膜免疫耐受使临床症状减轻。②模型组鼠胸腺增生可见胸腺小体;模型组突出后膜皱褶数较干预组减少。③干预组黏附分子ICAM-1表达[(189.8±146.7)U/mL]较模型组[(547.3±251.4)U/mL)]减低(P<0.05);④干预组体内IP-10水平[(0.79±0.32)pg/mL]较模型组[(6.08±1.57)pg/mL]降低(P<0.01);干预组T细胞趋化数30 min[(5.3±0.3)×103/mL]、60min[(5.1±0.5)×103/mL]、90 min[(7.4±1.3)×103/mL]较模型组[(17.3±5.3)×103/mL、(20.0±6.7)×103/mL、(28.0±4.0)×103/mL]明显减少(P均<0.01),两组T细胞趋化数均在90 min达高峰。结论 dual APL能改善临床症状并可能具有抑制特异性T细胞与血管内皮细胞的黏附及趋化功能。

多肽靶向脂质体的表面配体修饰密度及其体内肿瘤靶向效果的研究

脂质体作为一种药物载体广泛应用于肿瘤药物输送中。配体修饰的靶向脂质体,其靶向配体分子在脂质体表面修饰的构象和密度等参数,对脂质体本身的特性及其体内的靶向效果,有很大的影响。但有关其中的具体相互关系,以及可能的最优条件,国内外文献都尚无定论。据此我们建立了多肽靶向脂质体表面配体修饰的分析方法,并通过影像学手段来研究不同靶向肽含量对脂质体在荷瘤裸鼠中的靶向行为的影响。首先采用孵育插入法将带有多肽的脂质分子插入脂质体表面,用分子筛色谱法分离修饰后的脂质体和未插入的多肽脂质,再用HPLC-ELSD定量各脂质成分,得到多肽靶向脂质体表面的靶向肽密度。而后将修饰有不同密度靶向多肽的荧光脂质体经荷瘤小鼠尾静脉注射,分别在给药前后各时间点对小鼠进行扫描,对扫描得到的图像进行处理并计算AUC、T1/2和MRT等相关药代动力学参数。结果表明,随着脂质体表面多肽密度的增加,即多肽密度大于1.298%的靶向脂质体,其肿瘤部位的荧光AUC、T1/2和MRT都较未修饰的隐形脂质体有所提高,显示其在肿瘤组织中的聚集量增多、停留时间延长,针对肿瘤细胞的特异性作用机制得以彰显。

T细胞活化期间细胞内钙信息传递的调节与其在T细胞活化中的意义(三)

3．3细胞外钠离子除去和amiloride对T细胞增殖的影响在细胞外钠离子除去以及有amiloride投与的条件下T细胞增殖均被抑制。有趣的是，amiloride对T细胞增殖的抑制所需要的浓度与它对电压依赖性钠电流的抑制所需要的浓度相类似。二者的IC50均为15μmol左右。

全球多肽核药研究进展与我国的机遇

核药是核医学的灵魂,是分子影像和精准医学的重要基石之一。核药为重大疾病的早期诊断和治疗提供了物质基础。近年来,美国食品药品监督管理局(FDA)批准了多个多肽核药上市,开启了全球多肽核药研究的热潮,核医学正式迈入了精准诊疗一体化时代。围绕核医疗领域的新一轮科技竞争正在全球蔓延。抓住机遇,乘势而为,提高核药自主创新能力,确保在未来全球核科技竞争中掌握主动权,是我国核药领域科学家肩负的历史使命。本文首先概述了全球多肽核药的研发和转化方面取得的瞩目成果,分析了多肽核药的显著优势,总结了当前全球多肽核药研发的热门靶点及药物研发进展。其次,从学科交叉和源头创新的角度出发,提出了我国在多肽核药领域走内涵式发展道路,实现科技自立自强存在的六大机遇。最后,对多肽核药的未来发展进行了展望。

热休克蛋白110对人乳头瘤病毒16型E711-20珈配体的佐剂效应研究

目的探讨热休克蛋白（HSP）110对人乳头瘤病毒（HPV）16型E711-20配体的免疫佐剂效应。方法体外构建HSP110与HPV16型E711-20配体的复合物。将C57BL／6雌性6周龄小鼠15只随机分为3组：复合物组、配体组和磷酸盐缓冲液（PBS）组，每组5只，腹腔注射免疫复合物100txg，肽10μg，PBS100μl，2周后重复1次，第2次免疫2周后，分离脾细胞作为效应细胞。免疫小鼠后采用噻唑蓝法（MTT）判断脾淋巴细胞增殖活性，干扰素γ（IFN-1）胞内染色法检测小鼠脾细胞中特异性细胞毒T淋巴细胞，并以标准51Cr释放实验检测特异性细胞毒T淋巴细胞对靶细胞的杀伤效应。采用SPSS10．0软件进行t检验。结果HSP110与HPV16型E711-20埘配体的复合物免疫小鼠后脾淋巴细胞增殖活性（增殖指数为1．87±0．12）和CD8＋IFN-γ＋ T细胞的频率（3．9％）显著高于配体组（分别为0．32±0．071和0．4％），差异均有统计学意义（P〈0．01）。配体的复合物对靶细胞的杀伤效应（效靶比为100：1、50：1、25：1、12．5：1时，杀伤率分别为54．7％、72．2％、61．5％、39．8％）显著高于配体组（分别为35．2％、49．3％、28．1％、17．4％）。结论HSP110能增强HPV16型7 11-20配体的免疫效应，具有较好的免疫佐剂作用。

靶向性多肽修饰荧光功能化碳纳米管的制备及靶向肿瘤细胞的初步研究

以羟基化多壁碳纳米管(MWNT-OH)为引发剂,通过原位负离子开环聚合制备了生物相容性多羟基超支化聚缩水甘油接枝的碳纳米管(MWNT-HPG),利用酯化反应将荧光分子罗丹明6B标记于聚合物上,然后聚合物上的羟基和丁二酸酐反应将其转化为羧基.用TGA、FTIR、TEM、SEM等手段对产物进行了表征.用靶向表皮生长因子受体(EGFR)的小分子多肽D4修饰了所得的荧光功能化碳纳米管,并将其做为受体介导靶向肿瘤细胞的纳米载体,通过噻唑蓝(MTT)比色法评价功能化碳纳米管作为载体的安全性.用荧光显微镜观察其与人肺腺癌细胞SPCAI细胞的结合状态.结果证明了其有希望成为受体介导靶向肿瘤系统的纳米载体.

气孔谱系细胞发育的分子基础及其调控机制

本文主要介绍气孔发育过程中基因信号调控的新进展,涉及气孔发育的单细胞间隔规律、多肽配体、跨膜受体和MAPK模块进行的信号传递、极性蛋白和细胞命运等。一些参与调节气孔分化或密度的基因也参与激素和环境应答,这可能在调节气孔发育或对环境变化作出反应之间提供了信息联系。

医卫简讯

以综合医改推进医疗服务改善1月3日,2018年全国改善医疗服务工作会议在京召开。国务院副总理刘延东作出重要批示,充分肯定实施进一步改善医疗服务行动计划在优化医疗服务流程、创新医疗服务模式、提升医疗质量安全、改善群众就医感受等方面发挥的重要作用。希望全国卫生计生系统深入贯彻党的十九大精神,以习近平新时代中国特色社会主义思想为指导,坚持以人民为中心。