抗肿瘤多肽HM-3的中和抗体活性研究

本研究检测抗肿瘤多肽HM-3在SD大鼠和食蟹猴长期毒性实验血清中中和抗体的产生及抗体活性的强弱。将SD大鼠与食蟹猴分别分成4.5,13.5,40.5mg/kg和3,9,27mg/kg3个剂量组,均每日静脉注射HM-3多肽1次,均连续给药6个月。每月取血清用ELISA法测定滴度,并用细胞迁移法测定抗体中和活性。长期给药过程中,中高剂量组的SD大鼠能产生抗体,其中少数检测到中和抗体的活性(P<0.05),而食蟹猴中能产生抗体的数量较少,且其中只有个别食蟹猴的血清中能检测到中和抗体的产生(P<0.05)。且抗体滴度与中和抗体活性不呈正相关。由此,本研究认为HM-3的抗原性较低,长期高剂量给药后极个别会产生一些低亲和力的中和抗体。

多肽HM-3对人非小细胞肺癌裸鼠移植瘤抑制作用研究

目的检测HM-3类不同血管生成抑制剂治疗人非小细胞肺癌裸鼠移植瘤的药效学,考察血管生成抑制剂与肿瘤微环境的相互作用,为临床确定治疗方案提供参考和依据。方法建立人非小细胞肺癌A549的裸鼠移植瘤模型,以多西他赛(10 mg·kg^(-1))为阳性对照药物,评价了在肿瘤体积≥300 mm^3给予有效、过高剂量HM-3和贝伐单抗对肿瘤生长的抑制作用。结果动物实验表明,肿瘤的体积≥300mm^3给药,阳性对照组多西他赛具有很好的抗肿瘤活性。G2多西他赛(10 mg·kg^(-1))组的瘤重抑瘤率为60.80%。G3 HM-3(3 mg·kg^(-1))组、G4 HM-3(48 mg·kg^(-1))组、G5Avastin(5 mg·kg^(-1))组抑瘤效果不佳,瘤重抑瘤率分别为43.60%、-34.80%、44.40%。结论由于受肿瘤生长阶段、肿瘤微环境、作用靶点等影响,血管生成抑制剂HM-3有一定抑制肿瘤生长的效果,但效果不佳。HM-3抑瘤效果在(0~6 mg·kg^(-1))范围内存在剂量依赖关系。而HM-3(48mg·kg^(-1))过高剂量对人非小细胞肺癌A549裸鼠移植瘤无抑制作用,表现促进作用。特殊量效关系提示临床使用血管抑制剂时应注意使用剂量。

抗肿瘤多肽HM-3多克隆抗体的制备与鉴定

应用戊二醛法偶联HM-3与BSA,合成完全抗原,免疫新白兰白兔,制备HM-3多克隆抗体。同位素示踪法测定多抗效价、特异性和亲和力。结果表明:抗体的效价为1∶2000;亲和力常数经Scatchard分析计算为2.84×109L/mol,达到高敏分析要求;交叉实验结果表明抗体有较高的识别特异性。HM-3多抗的制备为放射免疫分析方法的建立奠定了基础。

血管生成抑制多肽HM-3及ES-2的组织分布研究

探讨血管生成抑制多肽HM-3和ES-2在组织中分布的特点。将两种多肽HM-3和ES-2分别用异硫氰荧光素（FITC）进行标记,建立C57BL/6黑色素瘤（B16F10）小鼠模型,将标记多肽以尾静脉注射给药,通过流式细胞仪检测分析给药后小鼠各个组织中多肽的分布情况。结果表明血管生成抑制多肽HM-3和ES-2主要分布在肝、肾和胃中,且分布浓度会随着时间的推移而降低,在心、脾和肺中基本没有分布。

PEG修饰多肽HM-3大鼠体内组织分布和排泄

研究PEG修饰抗肿瘤多肽HM-3单次尾静脉注射后在大鼠体内的组织分布特点和排泄途径,为临床试验提供依据。采用ELISA方法检测静脉注射修饰产物mPEG-SC_(20k)-HM-3后各时间点大鼠组织器官生物样品中药物的含量以及尿、粪和胆汁中mPEG-SC_(20k)-HM-3的排泄情况。大鼠单次静脉给予26mg/kg mPEG-SC_(20k)-HM-3后的组织分布试验表明,药物主要分布在大鼠肝和肾组织,其药物含量均于给药后1 h达最高,分别为(25.75±5.85)μg/g组织和(25.58±5.79)μg/g组织;大鼠静脉给予mPEG-SC_(20k)-HM-3(26 mg/kg)后从(0～104 h内)尿和粪中排泄的原型药物分别占给药总量的1.5%和0.02%;从(0～44 h内)大鼠胆汁中排泄的原型药物小于给药总量的0.1%。表明PEG修饰药物mPEG-SC_(20k)-HM-3主要分布在肝和肾组织,并主要由尿中排泄。

整合素阻断多肽HM-3体外抑制新生血管的研究

研究整合素阻断多肽HM-3体外对血管生成的作用。应用鸡胚尿囊膜实验、大鼠动脉环实验及Matrigel实验考察整合素阻断多肽HM-3抗血管生成作用。结果:鸡胚尿囊膜实验和大鼠动脉环实验表明HM-3能够抑制体外血管生成,多肽HM-3 0.05μg对鸡胚尿囊膜新生血管生成的抑制作用最强,多肽HM-3 8μg/mL对大鼠动脉环微血管生成抑制作用最强。Matrigel实验表明HM-3 7～8μg/mL对内皮细胞生长因子添加剂(ECGS)诱导的HUVEC细胞体外分化成管状结构抑制作用最强。整合素阻断多肽HM-3具有显著的体外抗血管生成的作用。