多胺类似物CPENSpm通过干扰多胺代谢抑制肺癌细胞的增殖

目的研究多胺类似物CPENSpm对肺癌细胞株A549增殖和细胞凋亡的影响,以探讨CPENSpm抗肿瘤的作用机制。方法MTS法分析细胞的增殖速度,化学分析法测定多胺代谢酶的活性,HPLC法分析细胞内的多胺含量,亚凋亡峰测定法和DNA片段化分析法鉴定细胞程序性凋亡。结果CPENSpm处理A549肺癌细胞可导致:①癌细胞生长抑制并激发细胞凋亡;②抑制多胺合成关键酶ODC的活性,活化多胺降解代谢关键酶SSAT和SMO的活性;③耗竭细胞内多胺含量。SMO抑制剂MDL72527可拮抗CPENSpm对A549细胞的生长抑制作用。结论CPENSpm通过干扰A549细胞的多胺代谢途径,耗竭肿瘤快速生长必需的多胺成分,诱导产生活性氧H2O2从而抑制癌细胞生长并激发细胞程序性凋亡。

多胺类似物BENS和TBP对胰腺癌PANC-1细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响

为探讨多胺类似物BENS和TBP对胰腺癌PANC-1细胞生长的影响、促进细胞凋亡的机制以及迁移能力的影响,运用MTT法检测药物对细胞生长的影响;亚凋亡峰流式细胞分析法及TUNEL法检测细胞凋亡;Western blotting法测定Bax蛋白、细胞色素C蛋白的表达变化;Ranswell技术检测细胞迁移能力的改变。分析发现,两种多胺类似物均可显著抑制PANC1癌细胞增殖,抑制作用随药物浓度加大而增加,其细胞毒性大小依次为BENS>TBP。细胞凋亡分析发现,BENS和TBP均可诱导PANC1发生细胞程序性凋亡,导致亚凋亡峰出现和明显的DNA断裂现象。胞浆中Bax蛋白和细胞色素C含量显著增加,同时显著性抑制PANC1细胞的迁移能力。表明BENS和TBP能够抑制人胰腺癌PANC1细胞增殖;阻止PANC1细胞迁移的能力;同时诱导细胞发生凋亡,其作用机制可能与改变肿瘤细胞正常的细胞周期,活化线粒体参与的细胞凋亡途径相关。

新多胺类似物TBP对人膀胱移行细胞癌T24细胞凋亡及迁移能力的影响

目的:研究新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutyl propaneadiamine,TBP)对人膀胱移行细胞癌T24细胞生长、凋亡及迁移能力的影响。方法:MTT比色法分析细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期改变,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot用于分析细胞凋亡相关蛋白Bax和细胞色素C的表达水平,Transwell技术检测细胞迁移能力的变化。结果:TBP有效抑制T24细胞增殖及迁移能力。细胞周期分析显示TBP抑制细胞发生G_1/S期转换,导致S期细胞比例显著性下降,G_0/G_1期细胞比例升高,同时出现SubG_1亚凋亡峰。TBP处理后,细胞呈现典型凋亡现象,细胞浆中促凋亡蛋白Bax和细胞色素C含量明显升高。结论:TBP能够抑制人膀胱移行细胞癌T24细胞增殖、降低T24细胞迁移能力,诱导细胞凋亡,其机制可能与影响肿瘤细胞的细胞周期,活化线粒体相关的细胞凋亡途径有关。

siRNA抑制精胺氧化酶的表达可降低人A549肺癌细胞对多胺类似物CPENSpm的敏感性

目的研究精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)基因表达抑制对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响。方法用siRNA技术获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法和酶活性分析法用于鉴定SMO基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA降解分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况。结果成功获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株。用SMO-siRNA质粒转染的细胞中,SMO mRNA和酶活性的基础水平分别降低53%和14%。用10μmol·L-1 CPENSpm处理对照细胞24h可使SMO mRNA和酶活性分别升高10倍和20倍,但在SMO-siRNA质粒转染的细胞中,这种药物对SMO的表达诱导被抑制。细胞增殖实验发现,SMO表达抑制的细胞对CPENSpm(0～20μmol·L-1)的药物敏感性低于对照细胞。细胞凋亡分析发现,与对照细胞相比,CPENSpm诱导SMO表达,抑制细胞发生细胞凋亡的能力明显减弱。结论CPENSpm诱导肿瘤细胞内SMO高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一。

多胺类似物双乙基去甲精胺联合阿司匹林高效杀伤宫颈癌Caski细胞的研究

目的:研究多胺类似物双乙基去甲精胺(BENS)与阿司匹林联用对宫颈癌Caski细胞的生长影响以及可能的细胞学机制。方法:多胺类似物BENS联用阿司匹林孵育体外培养的人宫颈癌Caski细胞,采用四甲基偶氮唑蓝法测定细胞存活率,DNA Ladder以及流式细胞术观察各组细胞周期和凋亡率变化,Western blot检测Bcl-2、Bax和cyt-C凋亡相关基因的表达情况,化学发光法测定精胺氧化酶(SMO)活性。结果:BENS与阿司匹林联用能显著降低单用BENS的细胞存活率(P<0.05),同时低剂量阿司匹林就能显著增强BENS诱导细胞凋亡作用(P<0.01)。联合用药组与单独用药组相比较,细胞G0/G1期比例明显升高,S期和G2/M期比例下降;诱导细胞凋亡发生;胞浆中Bcl-2表达量减少,Bax表达增加,cyt-C由线粒体释放。且SMO活性无明显改变。结论:联用低剂量阿司匹林能有效增强BENS诱导人宫颈癌Caski细胞凋亡的作用,但与多胺代谢过程无关。

多胺类似物DENSPM对人胶质瘤LN229细胞增殖的抑制作用

目的探讨多胺类似物二乙基去甲精胺(DENSPM)对人的胶质母细胞瘤LN229细胞的抑制作用。方法用DENSPM处理LN229细胞后,采用单溶液细胞增殖检测(MTS)法、细胞流式术、高效液相色谱法、定量逆转录酶-聚合酶链反应(qRT-PCR),分别检测其细胞增殖率、细胞周期变化和细胞内过氧化氢水平、细胞内多胺表达水平、亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)、多胺氧化酶(PAO)、鸟氨酸脱羧酶(ODC)mRNA表达变化。结果 LN229细胞经DENSPM处理后,其存活率随着药物浓度的增加而逐渐降低(F=124.051,P<0.001),并于体外培养72 h后在细胞增殖周期中出现典型的亚凋亡峰;细胞内过氧化氢水平于72 h后显著升高(F=57.27,P<0.001);细胞内腐胺、亚精胺和精胺水平显著下降(P≤0.001),而乙酰亚精胺和乙酰精胺水平显著上升(P<0.001);亚精胺/精胺-N1-乙酰基转移酶、多胺氧化酶和鸟氨酸脱羧酶水平上升(P<0.001)。结论 DENSPM可能通过降低肿瘤细胞内多胺表达水平,来抑制LN229细胞的生长并诱导其发生凋亡。

多胺类似物DENSPM诱导U87细胞凋亡

目的探讨多胺类似物二乙基去甲精胺(DENSPM)诱导人胶质瘤细胞株U87细胞凋亡的机制。方法体外培养U87细胞,经DENSPM处理后,单溶液细胞增殖检测法(MTS)检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞过氧化氢水平、细胞凋亡和线粒体膜电位的变化,western blot法检测PI3K/Akt/mROT介导的蛋白含量。结果 MTS法分析显示DENSPM能显著抑制U87细胞的增殖,抑制率呈药物浓度依赖性。流式细胞术分析显示DENSPM能引起U87细胞内过氧化氢水平升高,且是时间依赖性;同时显示U87细胞内线粒体受到损伤,其膜电位显著增高(P<0.01),药物处理后U87细胞的凋亡率明显增加(P<0.01)。western blot显示细胞色素C在线粒体和细胞质中的分布没有变化,同时DENSPM降低U87细胞内PI3K/Akt/mTOR介导的蛋白表达水平(P<0.01)。结论 DENSPM可诱导人胶质瘤U87细胞的凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR介导的蛋白质翻译起始途径密切相关。

新多胺类似物四丁基丙二胺对人肝癌HepG2细胞增殖及侵袭迁移的影响

目的研究新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutyl propanediamine,TBP)对人肝癌HepG2细胞增殖及侵袭迁移的影响。方法 MTT比色法分析细胞增殖影响,流式细胞术检测细胞周期改变,Transwell体外迁移/侵袭实验检测迁移侵袭能力的变化,Western Blot用于分析细胞多胺代谢相关蛋白精胺氧化酶(SMO)的表达水平,化学发光法测定SMO活性,反相高效液相色谱法分析TBP对细胞多胺含量的影响。结果 TBP有效抑制HepG2细胞增殖水平,对细胞的侵袭、迁移能力也有明显抑制作用。TBP抑制细胞DNA复制,导致S期细胞比例显著性下降,G0/G1期细胞比例升高。细胞浆中SMO含量明显升高,但其酶活性下降。TBP显著性增加了细胞的腐胺水平,但对精脒和精胺无影响。结论 TBP能够抑制人肝癌HepG2细胞增殖、降低HepG2细胞侵袭和迁移的能力,其机制可能与影响肿瘤细胞DNA合成,改变细胞周期时相分布有关。

多胺类似物CHEN,CPEN和BENS对Hela宫颈癌细胞生长的影响

目的:探讨多胺类似物CHEN,CPEN和BENS对宫颈癌细胞株Hela生长的影响。方法:MTT法检测细胞的生长状况;亚凋亡峰流式细胞分析法及DNA片段化分析法检测细胞凋亡;化学分析法测定精胺氧化酶(SMO)活性。结果:3种多胺类似物均可显著抑制Hela癌细胞增殖,抑制作用随药物浓度加大而增加,其细胞毒性大小依次为CHEN>CPEN>BENS。细胞凋亡分析发现,CHEN,CPEN和BENS可诱导Hela细胞程序性凋亡,导致凋亡峰出现和明显的DNA片段化。用10μmol.L-1CHEN,CPEN和BENS处理Hela细胞24 h可显著性抑制精胺氧化酶活性。结论:CHEN,CPEN和BENS通过诱导细胞凋亡而抑制Hela癌细胞生长,其诱导凋亡的作用与精胺氧化酶活性无关。

多胺类似物DENSPM对人胶质母细胞瘤SNB19细胞生长的影响

目的探讨多胺类似物DENSPM对人胶质母细胞瘤sNB19细胞生长的影响。方法采用MTS法、流式细胞术、高效液相色谱法和逆转录-聚合酶链反应,分别检测经DENSPM处理后的SNB19细胞存活率、细胞周期变化和细胞内过氧化氢水平,以及细胞内多胺水平和鸟氨酸脱羧酶、亚精胺/精胺-N1-乙酰基转移酶、多胺氧化酶mRNA表达变化。结果经DENSPM处理后,SNB19细胞存活率随着药物浓度的增加逐渐降低(F=81.915,P=0.001),并于体外培养72h在细胞增殖周期中出现典型的亚凋亡峰;细胞内腐胺、亚精胺和精胺水平显著下降,而乙酰亚精胺和乙酰精胺水平略有上升(均P<0.01);鸟氨酸脱羧酶表达水平下降(P<0.01),而亚精胺/精胺-N1-乙酰基转移酶和多胺氧化酶水平上升(P<0.05或P<0.01);但细胞内过氧化氢水平与DENSPM处理前差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DENSPM可抑制人胶质母细胞瘤SNB19细胞的生长并诱导其发生凋亡,而诱导细胞凋亡的可能机制是肿瘤细胞内多胺表达水平下降。DENSPM可能具有治疗胶质母细胞瘤的潜在临床应用价值。

高表达OAZI-1增加小鼠黑素瘤B16-F1细胞对多胺类似物CPENSpm的敏感性

目的检测高表达OAZI-1的小鼠黑素瘤B16-F1细胞对抗癌药物多胺类似物CPENSpm敏感性的影响并探讨其作用机制。方法高表达OAZI-1的B16-F1细胞经CPENSpm处理后,MTT法检测细胞增殖;QT-RT-PCR检测细胞内OAZI-1、ODC和OAZ的mRNA表达水平;反相高效液相色谱法检测细胞内多胺含量;化学发光法分析细胞内SMO酶活性。结果高表达OAZI-1显著增加B16-F1细胞对CPENSpm的敏感性,QT-RT-PCR结果显示,OAZI-1高表达增加ODCmRNA但降低OAZ mRNA水平,CPENSpm处理对ODC和OAZ的mRNA水平无进一步影响。与对照细胞相比,CPENSpm处理能更显著性地降低OAZI-1高表达细胞中的多胺含量,同时更强地诱导SMO酶的活性。结论 CPENSpm处理能在更大程度上耗竭OAZI-1高表达的B16-F1细胞中的多胺,由此对该肿瘤细胞显示出更大的细胞毒性。

多胺类似物四丁基丙二胺对人早幼粒白血病细胞HL-60生长的影响

目的:研究新多胺类似物四丁基丙二胺(TBP)对人早幼粒白血病细胞HL-60生长的影响及其作用机制。方法:MTT比色法分析TBP对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测TBP对HL-60细胞周期的影响,DNA片段化和线粒体膜电位分析用于检测细胞凋亡,化学发光法检测TBP对多胺降解代谢酶精胺氧化酶(SMO)和乙酰多胺氧化酶(APAO)活性的影响。结果:TBP通过抑制细胞周期和诱导细胞凋亡显著抑制HL-60细胞增殖;随TBP药物浓度增高,HL-60细胞凋亡水平增加,SMO和APAO的活性亦显著增高。结论:新多胺类似物TBP能够通过诱导多胺降解代谢途径关键酶活性和诱导细胞凋亡而抑制HL-60细胞增殖,具有抗白血病治疗的潜在应用前景。

多胺类似物BENS联合阿司匹林有效抑制宫颈癌Siha细胞增殖

目的：N1, Nll-bis （ethyl） norspermine （BENS）是人工合成的与天然多胺有着相似化学结构的多胺类似物，最近研究证实，对非小细胞肺癌、乳腺癌和结直肠癌细胞有很强的细胞毒作用。

多胺类似物CHEN通过诱导细胞程序性凋亡抑制宫颈癌细胞生长

发现肿瘤细胞的快速生长对多胺（腐胺、精脒和精胺）呈高度依赖，以及多种肿瘤组织内有多胺代谢异常后，多胺代谢途径逐渐成为当今抗肿瘤药物设计的热点靶途径。已设计和合成出一批与天然多胺有类似化学结构的多胺类似物（Polyamine Analogue），用于抗肿瘤的基础研究和前期临床。

多胺类似物四丁基丙二胺对人A549肺癌细胞的影响

目的:研究新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutyl propanediamine,TBP)对人A549肺癌细胞增殖、细胞迁移能力和多胺代谢的影响及其机制。方法:MTT法用于分析细胞增殖;流式细胞术用于分析细胞周期;QT-RT-PCR技术用于分析多胺代谢酶的表达水平;高效液相色谱用于检测细胞内多胺含量。结果:TBP处理A549细胞后导致:(1)显著抑制人A549细胞增殖,其抑制效应呈浓度和时间的依赖性;(2)G1期和G2期细胞显著减少,但S期细胞显著性增加;(3)显著诱导多胺降解代谢限速酶SSAT的表达,但对其他酶影响较小;(4)细胞内多胺含量显著性下降。结论:上述研究结果提示TBP具有抑制人A549肺癌细胞增殖的药理活性,有作为肺癌治疗药物的潜在临床应用前景。其机制可能与干扰DNA复制、抑制细胞周期和降低细胞内多胺水平相关。

多胺类似物及其抗肿瘤作用机制

多胺类似物是一类研发中的新型抗肿瘤药物。在肿瘤细胞内,多胺类似物通过干扰正常多胺代谢耗竭肿瘤快速生长必需的多胺成分、影响DNA结构和功能、调节肿瘤相关基因表达水平、改变细胞周期和诱导细胞凋亡等途径发挥抗肿瘤效应。本文就多胺类似物及其抗肿瘤的作用机制作一综述。

用SiRNA沉默SSAT基因表达降低人A549肺癌细胞对抗癌多胺类似物CPENSpm的敏感性

目的探讨精脒/精胺乙酰转移酶(Spermidine/Spermine N1-Acetyltransferase,SSAT)基因表达沉默对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响。方法用SiRNA技术获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法用于分析SSAT基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA片段化分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况。结果成功获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株。用10μmol·L-1CPENSpm处理对照细胞24h可使SSAT mRNA水平升高23倍,但在SSAT表达沉默的细胞中CPENSpm无此影响。细胞增殖实验发现,SSAT表达沉默的细胞对CPENSpm(0～20μmol·L-1)的药物敏感性显著性低于对照细胞。细胞凋亡分析发现,10μmol·L-1CPENSpm处理细胞48h导致对照细胞出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象和亚凋亡峰,但在SSAT表达沉默的细胞株中,CPENSpm诱导细胞凋亡的能力明显减弱。结论CPENSpm诱导肿瘤细胞内SSAT高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一。

多胺类似物抑制肿瘤细胞的机制研究进展

迄今为止，关于多胺的功能尚无定论．但有研究表明它参与稳定DNA构象、染色质浓缩、DNA转录以及细胞生长和发育过程，可特异性地修饰某些RNA分子。稳定或激活RNA酶，参与mRNA的翻译以及影响蛋白质合成等。多胺是真核细胞生存所必需的小分子物质。

精胺氧化酶高表达对人宫颈癌Hela细胞生长和药物敏感性的影响

目的研究精胺氧化酶(SMO)稳定性高表达对人宫颈癌Hela细胞生长和药物敏感性的影响。方法含SMO全长编码序列的真核表达质粒用脂质体法稳定转染人宫颈癌Hela细胞后,QT-RT-PCR和酶活性分析法筛选SMO高表达的细胞株。MTS法检测细胞的增殖和对抗癌药物的敏感性。流式细胞分析法检测细胞周期和细胞凋亡。结果成功获得SMO稳定高表达的人Hela宫颈癌细胞株。MTS分析发现,SMO高表达细胞的生长速度显著性高于对照细胞,且对多胺类似物抗癌药物CPENSpm的敏感性明显下降。与对照细胞相比,CPENSpm诱导SMO高表达细胞发生细胞凋亡的能力明显减弱。结论 SMO稳定性高表达可降低宫颈癌细胞对抗癌药物CPENSpm的敏感性。

基于多胺转运系统的抗肿瘤药物研究进展

多胺是维持细胞生长分化等生命活动的必需物质。肿瘤的增殖与细胞内多胺水平密切相关,利用肿瘤细胞膜表面高表达的多胺转运系统介导多胺类似物和缀合物进入细胞,可耗竭细胞内多胺并诱导肿瘤细胞凋亡。也可利用多胺聚阳离子的结构特点进行基因递送,提高外源基因的转染效率。综述了基于多胺转运系统的多胺类似物,缀合物和基因递送的癌症治疗研究进展,旨为以多胺结构为基础的抗肿瘤药物研究提供参考。