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PEDV与TGEV双重荧光RT-LAMP检测方法的建立与评价
1
作者
臧冉
徐飞飞
+5 位作者
郑丹阳
赵治钤
赵谜
王慧
高洁
穆杨
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第8期1600-1610,共11页
为建立可快速鉴别检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的双重荧光RT-环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,从Ge...
为建立可快速鉴别检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的双重荧光RT-环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,从GenBank下载PEDV和TGEV不同毒株M基因序列进行比对后,针对高度保守区设计合成内、外引物对和探针,在PEDV探针5′端标记FAM基团,3′端标记BHQ1基团,在TGEV探针5′端标记CY5.5基团,3′端标记BHQ2基团,对反应条件和体系优化后建立了一种快速鉴别PEDV和TGEV的双重荧光RT-LAMP检测方法。采用建立的方法在63℃水浴锅中反应60 min,然后再85℃作用10 min结束反应,将反应管置于多色荧光成像仪,在520、690 nm双通道下即可观察结果。用该方法检测其他猪常见病毒性病原均无交叉反应;以10倍稀释的重组质粒为模板评价该方法的灵敏度,结果最低检测限为10^(2)拷贝/μL重组质粒,是常规RT-PCR方法敏感度的10倍。从175份有腹泻症状仔猪的肛拭子样品中采用建立的方法共检出PEDV阳性样品72份,TGEV阳性样品49份,PEDV和TGEV混合感染样品40份,均比采用常规RT-PCR方法的检出率高。本研究建立的双重荧光RT-LAMP方法采用普通水浴锅即可进行扩增反应,而无需对反应产物进行凝胶电泳,为快速方便的进行PED与TGE的鉴别诊断和PEDV与TGEV混合感染的同步检测提供了技术支撑。
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关键词
猪流行性腹泻病毒
猪传染性胃肠炎病毒
双重
荧光
RT-LAMP
多色荧光成像仪
原文传递
题名
PEDV与TGEV双重荧光RT-LAMP检测方法的建立与评价
1
作者
臧冉
徐飞飞
郑丹阳
赵治钤
赵谜
王慧
高洁
穆杨
机构
西北农林科技大学动物医学院
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第8期1600-1610,共11页
基金
陕西省重点研发计划资助项目(2022NY-099)
国家自然科学基金资助项目(31972675)。
文摘
为建立可快速鉴别检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的双重荧光RT-环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,从GenBank下载PEDV和TGEV不同毒株M基因序列进行比对后,针对高度保守区设计合成内、外引物对和探针,在PEDV探针5′端标记FAM基团,3′端标记BHQ1基团,在TGEV探针5′端标记CY5.5基团,3′端标记BHQ2基团,对反应条件和体系优化后建立了一种快速鉴别PEDV和TGEV的双重荧光RT-LAMP检测方法。采用建立的方法在63℃水浴锅中反应60 min,然后再85℃作用10 min结束反应,将反应管置于多色荧光成像仪,在520、690 nm双通道下即可观察结果。用该方法检测其他猪常见病毒性病原均无交叉反应;以10倍稀释的重组质粒为模板评价该方法的灵敏度,结果最低检测限为10^(2)拷贝/μL重组质粒,是常规RT-PCR方法敏感度的10倍。从175份有腹泻症状仔猪的肛拭子样品中采用建立的方法共检出PEDV阳性样品72份,TGEV阳性样品49份,PEDV和TGEV混合感染样品40份,均比采用常规RT-PCR方法的检出率高。本研究建立的双重荧光RT-LAMP方法采用普通水浴锅即可进行扩增反应,而无需对反应产物进行凝胶电泳,为快速方便的进行PED与TGE的鉴别诊断和PEDV与TGEV混合感染的同步检测提供了技术支撑。
关键词
猪流行性腹泻病毒
猪传染性胃肠炎病毒
双重
荧光
RT-LAMP
多色荧光成像仪
Keywords
porcine epidemic diarrhea virus
transmissible gastroenteritis virus
dual fluorescent RTLAMP
multicolor imaging system
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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作者
出处
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1
PEDV与TGEV双重荧光RT-LAMP检测方法的建立与评价
臧冉
徐飞飞
郑丹阳
赵治钤
赵谜
王慧
高洁
穆杨
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
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引证文献
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