多重定量PCR系统中多色荧光检测和光谱串扰校正方法

多色荧光的激发检测光路是多重定量聚合酶链式反应(PCR)系统的核心组成部分。根据系统对荧光激发的均一性、荧光检测的时间和灵敏度需求,提出一种基于磁光开关和光电倍增管(PMT)的多色荧光激发检测光路。通过四色LED单独激发和PMT检测来提高灵敏度;利用磁光效应实现光路的电控切换,配合一维扫描机构和滤光片切换装置,完成96孔标准PCR板的四色荧光扫描。该设计避免了多色荧光光路的系统串扰。由于荧光染料本身光谱特性产生的荧光光谱串扰是通过标准迭代的四维聚类分析算法计算串扰矩阵,并通过4种常用染料的实验研究,对所建荧光检测系统进行荧光光谱串扰评估。

多色荧光原位杂交检测尿沉渣诊断膀胱尿路上皮癌的可行性分析

目的研究分析多色荧光原位杂交检测尿沉渣诊断膀胱尿路上皮癌的可行性。方法选取膀胱尿路上皮癌患者30例,纳入对照组。选取30例正常人,纳入观察组。2组均进行荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridiza-tion,FISH)检测尿沉渣,统计并分析染色体畸变情况。结果观察组与对照组3、7、17、9p21染色体畸变数差异有统计学意义(P<0.05)。3探针敏感性为36.67%,7探针敏感性为43.33%,17探针敏感性为40%,9p16探针敏感性为50%,4组合用探针敏感性为70%显著高于单独使用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论多色荧光原位杂交检测尿沉渣诊断膀胱尿路上皮癌诊断疗效显著,值得临床广泛推广及应用。

Xpert MTB/RIF在抗酸染色阳性痰标本结核分枝杆菌及利福平耐药性检测中的应用分析

目的:探讨多色巢式实时荧光定量核酸扩增检测技术(Multicolor nested real-time fluorescence quantitative nucleic acid amplification detection technology,Xpert MTB/RIF)在抗酸染色阳性痰标本结核分枝杆菌及利福平耐药性检测中的应用价值。方法:选取我院2015年11月—2017年10月疑似肺结核患者190例,进行Xpert MTB/RIF检测、比例法药敏试验、改良罗氏固体培养、显微镜检查。结果:以改良罗氏固体培养法检测结果作金标准,Xpert MTB/RIF检测敏感度为90.00%(81/90)、特异度为89.00%(89/100),两者具有较高一致性(K=0.789);以痰涂片染色法检测结果作金标准,Xpert MTB/RIF检测敏感度为86.67%(91/105)、特异度为98.82%(84/85),两者具有较高一致性(K=0.843);以比例法药敏试验结果作金标准,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药敏感度为83.33%(10/12)、特异度为100.00%(67/67),两者具有较高一致性(K=0.895)。结论:采取多色巢式实时荧光定量核酸扩增检测技术可迅速诊断抗酸染色阳性痰标本结核分枝杆菌,并能准确检测利福平耐药性,为临床制定有效干预方案提供可靠依据。