多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵与外膜蛋白表达水平分析

目的分析鲍曼不动杆菌对常用抗生素的敏感性,检测外排泵基因和外膜蛋白基因的表达水平,探讨上述基因表达与抗生素耐药之间的关系。方法选择下呼吸道标本分离的鲍曼不动杆菌共213株,对其进行菌种鉴定、药敏试验;根据药敏试验将其分为不敏感组(NS组)与敏感组(S组),应用荧光定量PCR检测外排泵基因(adeB、adeJ、adeG、craA、abeM、amvA)、外膜蛋白基因(omp25、omp33-36、carO)的表达水平,比较上述基因在NS组与S组表达水平的差异。结果鲍曼不动杆菌对阿米卡星、亚胺培南不敏感率分别为89.2%、81.2%,对哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、庆大霉素等药物的不敏感率均超过92%。adeB基因相对表达量升高(RE≥1)在各抗生素(AMK、IPM、CFP、FEP、TZP、CAZ、SXT、CIP、SCF、CN)NS组的比例高于S组,差异有统计学意义(P<0.05)。外排泵adeB基因mRNA的RE值在上述各抗生素NS组和S组之间差异有统计学意义(P<0.05),NS组adeB基因的RE值平均水平较高。外排泵adeJ、adeG、craA、abeM、amvA基因平均RE水平无升高,且经比较分析差异无统计学意义(P>0.05)。外膜蛋白omp25、omp33-36、carO基因平均RE值均超过1.0,提示相对表达量升高。结论本院鲍曼不动杆菌对多种抗生素耐药率较高。外排泵基因adeB过度表达在本院鲍曼不动杆菌耐药中起着重要作用;其余外排泵基因adeJ、adeG、craA、abeM、amvA和外膜蛋白基因omp25、omp33-36、carO在本研究的多数菌株耐药机制中可能不起作用。

金葡菌主动外排蛋白QacAα-螺旋13氨基酸的功能研究

目的评价金葡菌多药耐药主动外排蛋白QacAα-螺旋13位于细胞膜侧的氨基酸对于底物转运的重要性。方法用半胱氨酸定点诱变的方法突变E407,S408,M409,Y410,D411和L412,测序确定突变后,测定最低抑菌浓度(MIC)和进行运输试验比较突变前后细菌转运功能的变化。结果MIC分析表明突变株E407,Y410和D411耐药性显著降低,运输实验结果与MIC结果一致,提示这3株突变株失去对底物的转运能力。结论QacA蛋白α-螺旋13上的3个氨基酸可能与底物的结合和转运功能密切相关。

酚红外排水平评价肺上皮细胞多药耐药相关蛋白1的功能

目的:以酚红为多药耐药相关蛋白1(MRP1)的底物,丙磺舒为其抑制剂,通过酚红的外排水平建立评价肺上皮细胞MRP1的功能的方法。方法:小鼠静脉注射酚红(250mg/kg),30min后进行肺泡灌洗,测定灌洗液中酚红的浓度,并以雾化吸入MRP1特异性抑制剂丙磺舒(150mg/kg)作为对照,观察给予抑制剂前后灌洗液中酚红浓度及灌洗液中酚红浓度/血浆中酚红浓度比值的变化,来评价小鼠肺上皮细胞MRP1功能的改变。结果:与未给予抑制剂相比,给予MRP1抑制剂丙磺舒后,血浆中酚红浓度无显著性差异,但与未给予抑制剂相比,给予MRP1抑制剂丙磺舒60min后,其肺泡灌洗液中酚红浓度、灌洗液中酚红浓度/血浆中酚红浓度比值显著性降低。结论:肺泡灌洗液中酚红的外排水平反映小鼠肺上皮细胞MRP1功能的改变。

P-糖蛋白药物外排作用的研究进展

P-糖蛋白是一个ATP依赖性外排泵,在多药耐药肿瘤细胞和血脑屏障上均有高度表达。P-糖蛋白的药物外排作用参与了肿瘤多药耐药性,降低了药物在脑内的浓度。P-糖蛋白抑制剂则可以抑制P-糖蛋白的药物外排作用,从而逆转肿瘤多药耐药性,增加药物的脑摄取量。

药物制剂技术在抑制P-糖蛋白外排作用中的应用研究近况

P-糖蛋白(P-gp)是一个ATP依赖性药物外排泵,可影响药物代谢动力学,是导致药物吸收差以及肿瘤多药耐药性产生的重要因素。综述P-gp抑制剂的作用机制和具有P-gp抑制作用的药用辅料的实验研究,探讨利用药物制剂技术抑制P-gp对药物的外排作用,促进药物体内吸收,逆转肿瘤多药耐药性。

血脑屏障上P-糖蛋白及其药物外排作用研究进展

P-糖蛋白是与肿瘤多药耐药(Multidrugresistance，MDR)密切相关的糖蛋白，属于能量依赖性药物外排泵。人类的MDR基因有两个亚型(MDR1，MDR2)，啮齿类动物有三种基因(MDR1a，MDR1b，MDR2)。P-糖蛋白是血脑屏障(BBB)的重要成分，BBB上的P一糖蛋白定位于脑微血管内皮细胞的腔面上。

真菌多药耐药相关的外排蛋白基因研究进展

真菌的多药耐药现象日益严重,受到人们广泛重视。外排蛋白表达增强,导致细胞内药物浓度降低是产生多药耐药的重要机制。本文就外排蛋白分类、结构、功能、相关基因及其调控因子的研究进展作一综述。

外排泵ABC转运蛋白基因msbA和spab在幽门螺杆菌多重耐药中的重要作用

目的:探讨外排泵ABC转运蛋白基因msbA和spab在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)多重耐药中的作用.方法:从临床上胃炎和消化性溃疡患者的胃黏膜标本分离H.pylori.采用琼脂二倍稀释法测定氨苄西林、头孢曲松、四环素、克拉霉素、氧氟沙星和呋喃唑酮对H.pylori的最小抑菌浓度(MIC).应用氯霉素对敏感株和标准菌株进行体外诱导多重耐药.采用RT-PCR的方法分别测定敏感株和多重耐药株中msbA和spab基因的相对表达量.分别构建msbA和spab的基因敲除株,分别测定敲除前后菌株对9种抗生素的敏感性.结果:诱导出包括标准菌株NCTC11637在内的5株多重耐药株.多重耐药株中msbA和spab基因的相对表达量明显高于敏感株(1.8200±0.5310,1.8340±0.2726vs0.8420±0.0789,P=0.018,0.015).成功构建了msbA和spab基因敲除株(H.pyloriMZ1006△msbA和H.pylori MZ1006△spab),两株基因敲除株对4种抗生素的敏感性相对于野生株分别有明显的增加.在临床分离的20株H.pylori中均检测出msbA和spab基因,未发现基因缺失株.结论:ABC转运蛋白msbA和spab基因在H.pylori多重耐药机制中起重要作用.

多药及毒素外排转运蛋白遗传药理学研究进展

人体的肝脏、肾脏和肠道上广泛分布着多种转运蛋白,其中多药及毒物外排转运蛋白(MATEs)主要表达在肾脏近端小管的刷状缘膜及肝细胞胆小管面,其功能主要是调节有机阳离子的外排。该文主要讨论的是MATEs家族的成员MATE1和MATE2-K的分型、结构、遗传多态性以及其功能意义,同时也就MATEs的遗传多态性对铂类化合物及二甲双胍药物代谢动力学以及药效学的影响进行阐述。

病原真菌外排转运蛋白与真菌耐药的研究进展

病原真菌通过对抗机体防御系统和抗真菌药物的攻击,从而成功定植于宿主体内并最终导致机体感染,真菌外排转运蛋白在上述过程中起着重要作用,主要包括ATP结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporters,ABC)与主要易化子超家族(the major facilitator super family,MFS),分别通过与ATP水解酶或质子梯度耦合来运输并清除真菌胞内的毒性物质。与其它生物相比,真菌基因组中具有更多转运蛋白家族编码基因,这些转运蛋白不仅对真菌致病过程中所产生的代谢产物和宿主细胞分泌的抗菌成分起外排作用;同时,在病原真菌对抗临床抗真菌药物中也发挥着重要作用。本文就这两个超家族的转运蛋白在主要病原真菌耐药性中所发挥的作用进行综述。

外排转运蛋白在眼部给药中的研究动态

外排运转蛋白是一种广泛分布于人体全身组织器官的细胞膜转运蛋白，它可以将进入细胞内的外源性物质，包括药物等转运出细胞外，对细胞起到保护作用。近年研究表明，该蛋白亦分布于角膜、虹膜、睫状体、视网膜神经上皮和视网膜色素上皮（RPE）等眼部组织，每种转运蛋白都有其相对应的特异性底物及抑制剂。外排转运蛋白通过其对药物的外排转运功能影响不同给药途径中药物在眼内的利用和分布。深入研究外排运转蛋白药物的吸收和分布，清除时所起的作用，有助于进一步了解眼部给药的机制和设计给药方略，为临床眼部给药和给药途径的开发提供更多的科学依据。

主动外排机制和膜蛋白缺失在阴沟肠杆菌耐药中的研究

阴沟肠杆菌是医院感染的重要病原菌，由于头孢菌素等广谱抗菌药物的广泛使用，阴沟肠杆菌的耐药水平不断增加，此菌具有染色体介导的 bush I （AmpC）［1］型β-内酰胺酶（又称诱导酶或 C类头孢菌素酶），常在治疗过程中产生多重耐药［2，3］，多重耐药的阴沟肠杆菌引起的菌血症有很高的病死率。给临床治疗和院内感染控制带来了极大的挑战［4］。阴沟肠杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制，是否与细胞内存在主动外排机制和膜蛋白缺失有关，我们对此作了相应的试验和基因分型。

细菌AcrAB-TolC型外排泵中AcrA蛋白的进化分析

研究不同耐药细菌AcrAB-Tolc型外排泵中关键蛋白AcrA的序列,针对其保守及非保守氨基酸残基进行该类蛋白的进化分析,构建蛋白进化树。收集来源于不同细菌的已知序列的AcrA蛋白,去除冗余并进行序列比对之后,根据其序列比对结果的相似性、氨基酸残基的保守性研究其进化特征。结果表明,不同细菌的AcrA蛋白部分氨基酸残基具有高度的保守性,这与其实现生物学功能有关,非保守区域是主要的进化区域。可为不同菌株的进化提供参考,同时为以AcrAB-Tolc型外排泵为靶标的新药研究提供相关数据。

淋病流行株外排系统与外膜通透性和多重耐药性的关系

探讨外排系统、外膜通透性与淋病流行株多重耐药性的关系。应用K-B法和琼脂稀释法从湛江地区分离出62株淋球菌多重耐药株。利用SDS-PAGE测定淋球菌外膜孔蛋白的表达;应用直接荧光法测定能量抑制剂加入前后淋球菌对抗生素的摄入和积累情况,比较耐药菌与敏感菌内膜泵蛋白表达的差异;利用煮沸法提取细菌DNA,PCR扩增mtrR基因,并对扩增产物测序,比较敏感株与多重耐药株的差异。结果5株多重耐药菌均有外膜孔蛋白表达的缺失或下降,同时伴有外排泵蛋白的表达;5株敏感淋球菌无mtrR的突变,10株多重耐药株均有mtrR基因的突变。表明外排系统、外膜通透性与淋病流行株的多重耐药性密切相关。

定量RT-PCR检测多药耐药铜绿假单胞菌中MexAB-OprM外排泵

铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,PA）所涉及耐药机制相当复杂,包括抗生素灭活酶或修饰酶的生成、外膜低渗透性、外膜孔蛋白缺失、生物膜形成和主动外排等[1]。近年来的研究发现,铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,PA）内存在着多种主动外排系统[2],MexAB-OprM是在PA中发现的第一个RND家族外排系统,在PA对多种β-内酰胺类抗生素（包括碳青霉烯类）的固有耐药机制中发挥重要作用,MexAB-OprM是迄今为止最具有临床意义的药物外排系统。

江西省多重耐药铜绿假单胞菌主动外排系统耐药与相关机制研究

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ，PA ）所涉及耐药机制相当复杂，包括抗生素灭活酶或修饰酶的生成、外膜低渗透性、外膜孔蛋白缺失、生物膜形成和主动外排等［1］。其中外排泵系统是 PA 主要的耐药机制。我们对 MexAB‐OprM 、MexCD‐OprJ 、MexEF‐OprN 、MexXY‐OprM4种主动外排系统在江西省地区南昌大学第一附属医院，九江市第一人民医院等几家医院多重耐药铜绿假单胞菌中高表达情况、可能调控机制进行研究，为临床治疗和药物开发提供思路和依据。

外排泵在结核病治疗中的作用及其作为药靶的潜在意义

对药物运输机制的深入了解与结核病的有效治疗密切相关。结核病治疗的主要问题在于抗结核药物是如何进行人体吸收并穿透结核菌膜的,这将直接系统地影响着这些药物的工作浓度。首先,位于肠道、肝脏和肾脏的转运蛋白都决定了抗结核药物的药代动力学和药效学,在同时使用抗细菌、抗逆转录病毒药物和抗糖尿病药物的环境中,药物相互作用的风险很高。其次,人类的转运蛋白外排转运蛋白限制抗结核药物向脑和脑脊液中渗透,这将无法有效发挥抗结核性脑膜炎作用。最后,位于巨噬细胞和结核分枝杆菌细胞膜上的外排转运蛋白在表型耐受和耐药的出现中起着关键作用。我们回顾了外排转运蛋白在结核病药物处置中的作用,并从全新的整体视角评价了外排泵作为抗结核药靶的应用前景。

多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶、膜孔蛋白及β-内酰胺类靶位编码基因研究

目的研究一株多重耐药鲍曼不动杆菌(Multi-drug-resistant Acinetobacter baumannii,MDR-ABA)J65可能存在的β-内酰胺类药物耐药机制。方法 MDR-ABA J65株分离自2011年12月某三甲医院住院患者痰标本,用gyrA和parC基因PCR扩增、测序和BLASTn比对确认菌种。用PCR法分析该菌株的PBP1a、PBP2、CarO和33种A^D类β-内酰胺酶编码基因,并对检出的β-内酰胺酶编码基因作了插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测。结果 MDR-ABA J65检出β-内酰胺酶编码基因bla TEM-1、bla ADC-62、bla OXA-23、bla OXA-66,插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测显示ISaba1-ADC-62和ISaba1-OXA-23为阳性。PBP1a、PBP2和CarO编码基因序列与鲍曼不动杆菌敏感株(SDF)相比均存在有义突变,且三维结构同源建模显示,与SDF株PBP1a、PBP2和CarO蛋白分子立体结构有明显差别。结论 MDR-ABA J65对β-内酰胺类耐药机制为PBPs和孔蛋白CarO变异及可移动遗传元件介异的β-内酰胺酶编码基因。

P糖蛋白与配体相互作用的结构基础及其肿瘤耐药逆转的研究

P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是一种多药外排转运体,对控制各种抗癌药物的生物学活性具有重要意义。P-gp转运体作为生理屏障阻滞药物渗透,从而使药物发挥效应受限。传统的化疗增敏剂通过对转运体的调节可有效改善抗肿瘤药物的药代动力学并逆转多药耐药。本文将简要概述近年来有关P-gp与配体相互作用的结构信息以及肿瘤耐药逆转策略的研究进展。

多药耐药相关蛋白2:在肠道药物处置中的重要作用

多药耐药相关蛋白2(MRP2)是ATP结合盒转运蛋白超家族成员之一,是一种ATP依赖性有机阴离子转运蛋白。鉴于其广泛的底物专属性,MRP2在肠道药物处置中发挥着重要作用,包括肠吸收、肠分泌以及与肠道药物Ⅱ相代谢酶如谷胱甘肽-S-转移酶、UDP-葡萄糖醛酸转移酶及硫酸转移酶等的协同作用。此外,MRP2还影响着中药成分的肠吸收过程。