白介素37下调多药耐药基因-1逆转肺腺癌紫杉醇耐药的研究

目的 本研究旨在探究白介素37(IL-37)在抑制肺腺癌细胞多药耐药性方面的潜在作用,及其对于耐紫杉醇的A549/TAX细胞的影响。方法 通过细胞培养、处理程序、实时荧光定量PCR、Western blot分析和统计学分析等实验方法,系统研究了IL-37对耐紫杉醇A549/TAX细胞的影响。结果 紫杉醇明显抑制了A549和A549/TAX细胞的增殖,其中A549/TAX的耐药指数RI为16.88。100ng/mL的rhIL-37显著抑制了A549/TAX细胞的增殖。在紫杉醇和rhIL-37联合处理组,细胞增殖的抑制率显著高于仅用紫杉醇处理组(P<0.05)。此外,rhIL-37在24小时后显著抑制了A549/TAX细胞的迁移和侵袭。非细胞毒性浓度的rhIL-37也能显著抑制A549/TAX细胞的集落形成。经rhIL-37作用48小时后,A549/TAX细胞中MDR1的表达水平比对照组下降了约66%(P<0.05)。结论 IL-37与紫杉醇联合处理可有效抑制A549/TAX细胞的增殖、迁移和侵袭,同时通过降低MDR1基因的表达水平可能逆转细胞的耐药性,为IL-37在肺腺癌治疗中的潜在应用提供了实验依据。

多药耐药基因-1高表达可加剧类风湿关节炎患者对氨甲蝶呤的耐药

目的观察多药耐药基因-1(MDR1)在类风湿关节炎(RA)患者氨甲蝶呤(MTX)耐药中的作用。方法体外利用重组腺病毒Ad-EGFP-MDR1感染RA患者成纤维样滑膜细胞(FLS),获得MDR1过表达RA FLS。采用Real-time PCR和Western blot法检测MDR1过表达RA FLS中 MDR1基因转录水平及其编码产物P-糖蛋白(P-gp)的表达水平,罗丹明123外排实验验证MDR1过表达RA FLS外排罗丹明123功能,MTT法检测MDR1过表达RA FLS对MTX的耐药性。结果重组腺病毒Ad-EGFP-MDR1感染RA FLS 72 h后,MDR1过表达RA FLS细胞内颗粒增加,细胞体积变大,生长速度变慢。MDR1过表达组RA FLS中MDR1 mRNA表达水平(1.4325±0.3924比0.0650±0.0070;t=6.035, P=0.004)、 P-gp 蛋白表达水平(1.8667±0.2857比 0.9367±0.0551;t=5.536, P=0.005)和细胞外排罗丹明123能力(979.43±196.81比1680.06±147.04;t=-4.940, P=0.008)均明显高于阴性病毒对照组。MTX各个浓度下MDR1过表达RA FLS的存活率均显著增高( P 均<0.05)。结论MDR1基因高表达可通过上调P-gp蛋白的表达影响RA FLS对MTX的外排能力,从而增强RA FLS对MTX的耐药性。

多药耐药基因-1、脑源性神经营养因子基因的两个多态性与小儿耐药性癫痫的关联研究

目的探讨多药耐药基因-1、脑源性神经营养因子(BDNF)基因的两个多态性与小儿耐药性癫痫的关联性。方法选取多药耐药基因-1的T-129C多态性、BDNF基因的C270T多态性作为研究的位点,利用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性分析技术,在耐药性癫痫组41例患儿、药物有效癫痫组43例患儿、正常对照组30例儿童中进行这两个多态性检测,比较3组之间基因型分布及等位基因频率的差异。结果耐药性癫痫组MDR1基因T-129C多态性的TT基因型分布频率、T等位基因频率高于药物有效癫痫组及正常对照组,差异有显著性(P<0.05)。耐药性癫痫组BDNF基因C270T多态性的CC、CT、TT基因型分布频率和C、T等位基因频率与药物有效癫痫组及正常对照组差异无显著性(P>0.05)。结论MDR1基因T-129C多态性可能与小儿耐药性癫痫存在关联,在小儿耐药性癫痫的发生中可能起作用;而BDNF基因C270T多态性与小儿耐药性癫痫可能无关联。

多药耐药基因-1及其多态性与癫痫耐药性的关系

癫痫是神经系统的常见病,约四分之一的癫痫患者为难治性癫痫,即用药物治疗得不到有效地控制。近年来,人们对多药耐药基因（人类简称MDR1,动物简称mdr1）及其多态性（SNP）与癫痫耐药的关系越来越感兴趣,但对他们的关系还存有争议。本文结合文献就其与癫痫耐药性的关系综述如下。

Y-盒结合蛋白1对白血病K562细胞多药耐药基因-1表达的调控

目的:观察多柔比星诱导K562细胞多药耐药基因-1(mdr1)基因表达过程中Y-盒结合蛋白1(YB-1)表达和核易位的变化情况,初步探讨YB-1蛋白对mdr1基因的转录调控。方法:多柔比星间歇性长期作用于K562细胞,剂量逐渐增加。RT-PCR检测mdr1,YB-1基因表达,流式细胞仪检测mdr1基因编码的P糖蛋白(P-gp)表达,蛋白质印迹检测YB-1蛋白核易位。通过RNA干扰技术使K562细胞中YB-1基因表达沉默,多柔比星处理YB-1基因沉默细胞,RT-PCR、流式细胞仪分别检测mdr1 mRNA和P-gp的表达。结果:经多柔比星作用后K562细胞mdr1基因转录上调,P-gp表达增加,同时YB-1基因转录也增强,且出现明显的核易位。YB-1基因沉默后,mdr1基因诱导性表达减少。结论:多柔比星诱导K562细胞mdr1基因表达的过程中,YB-1对于mdr1基因的转录活化起一定的作用。

大黄素通过下调多药耐药基因-1的表达改善胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药研究

目的探讨大黄素改善胰腺癌细胞株SW1990/Gemcitabine(GEM)耐药作用及其可能机制。方法用吉西他滨体外浓度递增法诱导培养人胰腺癌细胞株10个月,获得耐药细胞株SW1990/GEM。将细胞分为4组:对照组、大黄素组、吉西他滨组、联合组。对照组,加入等量0. 1%DMSO溶液;其他3组分别给予10μmol·L^(-1)大黄素、20μmol·L^(-1)吉西他滨与联合两药(大黄素组+吉西他滨)来分别处理SW1990/GEM细胞。用MTT法检测细胞增殖,以流式细胞仪检测细胞凋亡,以逆转录-聚合酶链反应实验检测细胞中MDR^(-1)基因的表达水平,以流式细胞技术检测P-gp的功能。罗丹明外排实验检测SW 1990/GEM细胞内P-gp的功能。结果联合组与吉西他滨相比,可明显抑制胰腺癌SW1990/Gemcitabine细胞的增殖。吉西他滨单独处理SW 1990/GEM与SW1990细胞时,对2个细胞的抑制率分别为13. 34%与36. 52%,两者比较差异有统计学意义(P <0. 05),说明与细胞株SW 1990相比较,SW 1990/GEM细胞株对吉西他滨具备了明显的耐药性。当吉西他滨联合大黄素处理细胞时,对2种细胞的抑制率分别是40. 45%与43. 87%,差异不明显,由此可见大黄素能够增强吉西他滨对耐药细胞株SW 19901GEM增殖的抑制作用。联合组与吉西他滨组比较,可抑制细胞MDR^(-1)基因的表达,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论大黄素通过下调多药耐药基因^(-1)的表达,可以改善胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药。

MDR-1与GST-π在柔红霉素诱导Kasumi-1细胞耐药中的作用

目的探讨柔红霉素诱导M2型急性髓系白血病(AML-M2)细胞株Kasumi-1耐药性与多药耐药基因-1(MDR-1)和谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)表达的相关性。方法长期间歇性小剂量递增法诱导Kasumi-1对柔红霉素耐药,四氮唑蓝(MTT)法检测细胞耐药程度;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测MDR-1和GST-π基因表达变化情况;Western blot检测P-糖蛋白(P-gp)和GST-π蛋白表达的变化情况。结果诱导后Kasumi-1对柔红霉素耐药倍数为(3.9±0.6)倍,耐药细胞与非耐药细胞MDR-1表达无明显差别,耐药细胞GST-π表达明显高于非耐药细胞(P<0.01)。Western blot检测结果与RT-RCR一致,两种细胞P-gp表达情况无明显差异,耐药株GST-π蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论 AML-M2细胞株Kasumi-1对柔红霉素耐药与MDR-1表达无关,与GST-π表达有关,抑制GST-π在Kasumi-1细胞中的表达可能成为逆转柔红霉素耐药的靶点。

外周血CK19、MMP-9和MDR1水平评定体外药敏的价值

目的检测乳腺癌患者外周血中细胞角蛋白19(CK19)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和多药耐药基因1(MDR1)的表达量,评定参照体外药敏选择化疗方案的价值。方法采用荧光定量RT-PCR技术,检测117例乳腺癌患者化疗前后外周血中CK19mRNA、MMP-9mRNA和MDR1mRNA的表达量。结果实验组较对照组外周血中CK19、MMP-9和MDR1mRNA的表达量ΔCt值变化有显著差异,平均差值分别为-5.2105/-3.9938、-5.3312/-2.6930和0.6750/3.6140。结论实验组较对照组,外周血中CK19、MMP-9mRNA的表达量显著下降,而对照组MDR1表达量的增高较实验组更显著,提示在现行的循证医学基础上增加体外药敏实验结果这一参考因素,有可能选择更敏感的化疗药物,提高个体化治疗的效果。

mdr-1基因转染的骨髓细胞对大剂量MMF治疗的耐受性研究

目的检测转染多药耐药基因-1(multidrug resistance gene-1,mdr-1)的骨髓细胞能否耐受大剂量霉酚酸脂(mycophenolate mofetil,MMF)的杀伤作用,为体内实验提供依据。方法将重组腺病毒Ad-EGFP-mdr-1转染大鼠骨髓细胞。RT-PCR法和Western blot法检测mdr-1 mRNA及蛋白的表达水平;柔红霉素排出试验检测转染mdr-1基因后的骨髓细胞有无功能表达;MTT法检测不同浓度MMF处理后转染mdr-1基因骨髓细胞的存活情况。结果骨髓细胞病毒转染率为30.14%,存活率为89.25%;转染后骨髓细胞mdr-1的mRNA及蛋白质水平都存在功能性表达;导入的mdr-1表达产物P-gp有药物外排泵功能;不同剂量的MMF处理后,转染mdr-1基因的骨髓细胞存活率没有明显差异(P>0.05)。结论转染mdr-1的大鼠骨髓细胞能有效耐受超大剂量MMF治疗。

江苏地区汉族儿童多药耐药基因3个单核苷酸多态性位点的单倍型研究

目的分析江苏汉族人群多药耐药基因-1(MDR1)的单核甘酸多态(12外显子1236C→T突变、21外显子2677G→T/A突变、26外显子3435C→T突变)及其构成的单倍型分布。方法通过多重单碱基延伸反应(SNaPshotSNP分型技术)对江苏地区170名健康儿童的MDR1C1236T、G2677T/A、C3435T的SNP位点进行基因分型,统计各基因型频率。UNPHASED软件对MDR1的SNPs(C1236T-G2677T/A-C3435T)进行单倍型分析。结果在170例儿童中,等位基因1236T、2677T、2677A、3435T频率分别为63.5%、37.4%、17.0%和35.0%。基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡(HWE),差异无统计学意义(P>0.05)。MDR1的1236、2677、3435三个位点间(C1236T-G2677T/A-C3435T)存在连锁不平衡性,以TTT(31.8%)、TGC(25.3%)、CGC(17.7%)和CAC(16.2%)四种单倍型为主。结论江苏地区汉族人群MDR1的单核甘酸多态及单倍型分布具有自己的特点。在临床应用相关药物时,进行基因型及单倍型检测,将有助于指导临床个体化用药。

多药耐药基因与体外药敏检测在急性白血病中的临床意义

目的:研究急性白血病(AL)多药耐药-1(MDR_1)基因表达与临床疗效的关系,提高对肿瘤细胞耐药情况预测的准确性.方法:采用逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)检测了30例AL患者骨髓中MDR_1基因的表达,同时对每例均进行体外化疗药物敏感性(MTT法)检则.结果:30例ALMDR_1基因过度表达占40%,MTT检出耐药为30%(10/30),既有MDR_1基因过量表达又显示耐药者为27%(8/30);体外药敏实验结果与疗效比较,总符合率为86%,阳性符合率85%,阴性符合率91%,MDR_1基因过度表达与临床疗效呈负相关.结论:同时进行这两种方法的检测能提高临床耐药判断的准确性,有利于合理选用化疗药物以提高疗效.

重组变构人TNF相关促凋亡配体联合三氧化二砷诱导白血病耐药细胞株凋亡

本研究探讨重组变构人TNF相关促凋亡配体(recombinant mutant human TNF-related apoptosis-inducing ligand,rmhTRAIL)联合三氧化二砷(As2O3)对阿霉素诱导的人慢性髓系白血病红白血病变耐药细胞株K562/AO2(mdr-1+)的促凋亡作用。以亲本阿霉素敏感细胞株K562(mdr-1-)为对照,观察rmhTRAIL作用后细胞形态变化,采用MTT法测定rmhTRAIL、As2O3单药及联合作用后细胞增殖抑制率;碘化丙锭染色的流式细胞术(FACSCalibur)定量检测rmhTRAILL、As2O3单药及联合作用后sub-G1峰占检测细胞的百分比(sub-G1%)。结果表明:rmhTRAIL联合As2O3对K562/AO2和K562增殖的抑制作用优于单药,采用国内金(正均)氏公式判断rmhTRAIL和As2O3联合作用具有协同作用;流式细胞术定量检测sub-G1%显示,rmhTRAIL2 000ng/ml与As2O32μmol/L单独作用下K562/AO2组与K562组凋亡率分别为(34.93±0.10)%、(10.53±0.16)%(p<0.01);(5.95±0.07)%、(3.50±0.01)%(p<0.05),联合作用下细胞凋亡率分别为(50.95±0.91)%、(20.75±0.95)%(p<0.05),K562/AO2组凋亡效应强于K562组。结论:rmhTRAIL可诱导K562、K562/AO2细胞凋亡;rmhTRAIL联合凋亡诱导剂As2O3对白血病耐药细胞株K562/AO2和K562细胞株的凋亡具有协同作用;rmhTRAIL、As2O3对K562/AO2的促凋亡作用优于其亲本K562细胞。

重组腺病毒Ad-EGFP-mdr-1转染大鼠骨髓细胞模型的构建

目的构建转染多药耐药基因-1(multidrug resistance gene-1,mdr-1)的骨髓细胞。方法将重组腺病毒Ad-EGFP-mdr-1转染大鼠骨髓细胞。RT-PCR法和Western blot法检测mdr-1 mRNA及蛋白的表达水平;柔红霉素排出试验检测转染mdr-1基因后的骨髓细胞有无功能表达。结果骨髓细胞病毒转染率为30.14%,存活率为89.25%,转染后骨髓细胞mdr-1的mRNA及蛋白质水平都存在功能性表达,导入的mdr-I表达产物P-gp有药物外排泵功能。结论转染mdr-1的大鼠骨髓细胞模型的成功构建,为进一步研究肿瘤的多药耐药提供实验基础。

CYP3A4,CYP3A5,MDR1基因多态性与他克莫司个体间差异相关性的研究进展

他克莫司是一种新型强效免疫抑制性大环内酯类抗生素,主要通过细胞色素P450(如CYP3A4和CYP3A5等)代谢,由P-糖蛋白进行转运。越来越多的研究发现CYP3A4,CYP3A5酶及P-糖蛋白的某些基因多态性可以影响他克莫司的药代和药效。现就CYP3A4,CYP3A5及P-糖蛋白的基因变异与他克莫司个体间差异相关性研究进行综述。

含mdr1启动子的荧光素酶报告基因质粒的构建

目的克隆编码mdr1基因的启动子并插入荧光素酶报告基因载体。方法用PCR技术扩增出人类mdr1基因启动子片段,通过亚克隆将启动子分别插入到pGEMT载体和荧光素酶报告基因pGL3enhancer载体中,并确定扩增DNA的序列。结果测序结果显示扩增mdr1启动子序列正确。结论成功克隆了mdr1启动子,为下一步对多耐药性卵巢癌进行靶向基因治疗提供了重要基础。

阿霉素对豚鼠耳蜗外侧壁中多耐药基因1基因表达的影响

目的:探讨豚鼠耳蜗外侧壁中多耐药基因1(mdr1)是否对外源性的阿霉素(ADM)发生应激反应;ADM在耳蜗内淋巴液中积聚浓度的变化。方法:经静脉注射中毒剂量的ADM后,利用RTPCR技术半定量mdr1mRNA;采用高效液相色谱法(HLPC)检测内淋巴液中的ADM浓度。结果:①注射后24h时相点ADM组mdr1mRNA的量明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而其4h时相点,与空白组相比差异无统计学意义;生理盐水组各时相点mdr1mRNA的量与空白组间差异无统计学意义;②内淋巴液中的ADM浓度4h时相点较24h时相点高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:mdr1是一种防御或应激基因,可被外源性ADM所诱导;其在耳蜗外侧壁中的表达,可能与减少耳毒性药物在内淋巴液中的积聚,增强耳蜗自我保护功能有关。

肺癌患者外周血中MDR1的表达及临床意义

目的检测多药耐药基因-1(MDR1)在肺癌患者外周血中的表达,探讨MDR1的表达水平与肺癌病理类型及临床化疗进程之间的关系。方法应用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,动态监测45例肺癌患者化疗前后外周血中MDR1的表达水平,并与48例健康者进行对照比较。结果肺癌组化疗前MDR1的阳性率28.89%(13/45),明显高于健康对照组2.08%(1/48),差异显著(P<0.05);各种病理类型的肺癌随着化疗次数的增多MDR1的表达均增强;化疗前后各期MDR1的表达程度:非小细胞肺癌(NSCLC,肺鳞癌和肺腺癌)明显高于小细胞肺癌(SCLC),差异具有统计学意义(P<0.05),而肺鳞癌和肺腺癌之间MDR1的表达程度相当,无显著差异,(P>0.05)。结论化疗可诱导各种病理类型肺癌MDR1表达增加;病理类型不同诱导化疗耐药的机制可能不同:NSCLC可能为原发性MDR,SCLC可能为获得性MDR;动态检测肺癌患者外周血中MDR1的表达水平,有利于进行肺癌耐药的监测与评价。

耐药性癫痫患者血清和脑脊液P-糖蛋白的表达水平变化及其临床意义

目的观察耐药性癫痫患者血清和脑脊液中多药耐药基因-1、P-糖蛋白的表达水平变化及其临床意义。方法选取2014年1月-2016年4月本院收治的耐药性癫痫患者以及同期在本院接受抗癫痫药物治疗控制良好的癫痫患者各85例,分别作为耐药性癫痫组和治疗有效组。另选取健康人群85例作为健康对照组。采用酶联免疫吸附测定法及荧光定量聚合酶链反应技术检测所有受试人员的外周血清及脑脊液中多药耐药基因-1及P-糖蛋白表达水平,比较不同类型癫痫患者以上两项指标的表达水平变化。结果与治疗有效组、健康对照组比较,难治性癫痫组患者血清P-糖蛋白及MDR1-mRNA表达水平较其他2组均明显增高(P<0.05,P<0.01);治疗有效组与健康对照组比较,血清P-糖蛋白及MDR1-mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。与治疗有效组比较,耐药性癫痫组脑脊液P-糖蛋白及MDR1-mRNA表达水平明显增高(P<0.05)。耐药性癫痫组中不同发作类型患者血清MDR1-mRNA、P-糖蛋白表达水平比较,均无明显差异(P均>0.05)。结论外周血及脑脊液中多药耐药基因-1、P-糖蛋白的表达水平可以作为癫痫耐药的一项重要指标。

鼻腔、鼻咽部恶性淋巴瘤多药耐药基因表达的临床研究

目的:探讨多药耐药基因-1(MDR-1)表达产物P-糖蛋白(P-gp)在鼻腔、鼻咽部恶性淋巴瘤组织中表达的临床意义。方法:用S-P免疫组化染色方法,检测37例鼻腔、鼻咽部恶性淋巴瘤组织中P-gp表达情况,并与患者的初诊与复诊、原发部位、病理类型、免疫组化分型等不同组织中P-gp的表达及预后相关性进行分析。结果:P-gp表达阳性的是复诊患者87.5%(7/ 8)、鼻咽部患者70.0%(7/10),与初诊患者34.5%(10/29)、鼻腔部患者37.0%(10/27)相比,均有明显差异;P-gp阳性表达患者耐药率88.2%(15/17),与P-gp阴性表达患者耐药率10.0%(2/20)相比,有明显差异。结论:P-gp阳性表达对预测耐药及临床医师选药、制定方案提供科学依据。

MDR1启动子的活性研究

目的:克隆编码多药耐药基因-1(MDR1)中不同长度的启动子片段并探讨和比较其在乳腺癌细胞中的转录活性。方法:利用PCR扩增技术以MCF-7/ADR细胞基因组为模板克隆3种不同长度的启动子片段。pGL3-basic的启动区域中,构建一系列报告基因载体pGL3-MDR1Pn。以pGL3-control为阳性对照,分别将含不同长度的MDR1启动子的报告基因载体pGL3-MDR1Pn与p RL-TK以一定比例共转染到敏感的MCF-7细胞和耐阿霉素的MCF-7/ADR细胞,通过分析表达的荧光素酶的活性比较不同长度的启动子片段在这两种细胞中的转录活性。结果:酶切鉴定和测序验证了已将不同长度的MDR1启动子片段成功插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,且克隆的片段中没有出现碱基突变。将表达载体转染细胞后活性检测结果显示,pGL3-MDR1P1、pGL3-MDR1P2和pGL3-MDR1P3在MCF-7中活性分别为阳性对照的(13.03±2.35)%、(14.60±3.57)%和(10.27±1.89)%;而在MCF-7/ADR中活性分别为阳性对照的(105.26±6.84)%、(59.08±4.95)%和(62.39±5.76)%。结论:成功克隆了MDR1启动子片段,并成功构建了荧光素酶报告基因载体pGL3-MDR1P。启动子的活性分析结果初步表明长度约为2 000 bp的MDR1P1在MCF-7/ADR中具有相对较高的特异性。