多药耐药相关蛋白-2在白血病耐药细胞株K562/A02的表达

目的:研究多药耐药相关蛋白-2(MRP-2)与白血病细胞耐药的关系,并探讨其在白血病多药耐药中的意义。方法:应用RT-PCR方法检测白血病细胞株K562与耐药细胞株K562/A02中MRP-2mRNA的差异表达,然后将MRP-2反义及正义寡核苷酸片段分别用脂质体转染至耐药细胞株K562/A02,采用MTT法、流式细胞术及RT-PCR法检测转染后细胞内阿霉素的荧光强度、耐药指数及MRP-2mRNA的表达情况。结果:耐药细胞株K562/A02中MRP-2mRNA表达水平明显高于白血病细胞株K562(P<0.05)。MRP-2反义寡核苷酸片段转染后耐药细胞株K562/A02细胞内的阿霉素浓度升高,耐药指数较未转染细胞明显降低(P<0.05);转染后耐药细胞株K562/A02细胞MRP-2mRNA表达水平较未转染细胞下降了67.5%,两者比较差异具有显著性(P<0.05)。结论:MRP-2的高表达导致白血病耐药细胞内化疗药物浓度降低,可能是其导致白血病多药耐药的机制之一。

多药耐药相关蛋白-2在乳腺癌组织中的表达及与预后关系

目的:研究多药耐药相关蛋白-2(Multidrug resistance-associated protein2,MRP2)在乳腺癌组织中的表达,评估其在乳腺癌预后中的作用。方法:采用免疫组织化学方法(I mmuno Histo Chemistry,I HC)检测47例手术切除的乳腺癌组织中MRP2的表达,并分析其与临床、病理特征的关系及对预后的影响。结果:MRP2在乳腺癌组织中的阳性表达率为85.1%(40/47),其中高表达者25例(53.2%);MRP2表达与月经状况、肿瘤大小、腋淋巴结转移、组织分级和激素受体状况均无关(P>0.05);Kaplan-Meier生存分析结果表明MRP2表达与无病生存期和总生存期均无关(P>0.05);COX多因素分析显示只有肿瘤大小和腋淋巴结转移和无病生存期和总生存期明显相关(P<0.05)。结论:MRP2在乳腺癌组织中具有一定的表达水平,但与乳腺癌患者预后无关。

蛋白激酶CK2及其抑制剂在肿瘤多药耐药中的研究进展

肿瘤耐药性是临床上化疗失败的主要原因之一。蛋白激酶CK2是一种高度保守、具有广泛生物学活性的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,可磷酸化数百种底物。CK2的激活及过表达在肿瘤发生、发展及耐药过程中起到重要作用,并且CK2通过多种机制和信号通路参与耐药细胞中药物的外排、DNA损伤修复以及药物逃逸反应等,并调控耐药细胞中分子伴侣的活性。本研究主要对蛋白激酶CK2的结构功能及其在肿瘤多药耐药中的作用机制进行综述,并对CK2抑制剂在血液系统肿瘤、乳腺癌、胃癌、肺癌等多种实体瘤中的应用进行了探讨,为临床上开发新的肿瘤耐药分子标志物以及肿瘤的靶向治疗提供新的思路和治疗方案。

多药耐药相关蛋白转运体在药物性肝损伤中的作用研究进展

肝脏是人体新陈代谢最旺盛的器官,也是体内多种药物的解毒器官。当长期或过量使用药物时会增加药物性肝损伤(DILI)的风险。多药耐药相关蛋白(MRPs)是位于细胞膜上的功能蛋白,可转运多种药物,在DILI中发挥重要作用。MRPs功能的抑制、缺失是药物肝毒性产生的重要原因。本文对MRPs的结构、表达部位及功能进行归纳,并对MRPs与DILI的关系及其改善DILI的机制进行总结,期望更好地了解MRPs转运体与DILI的关系,为后续防治DILI提供参考。

UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究

目的探讨尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)/miR-122-5p/pcDNA-胞质多聚腺苷酸元件结合蛋白1(CPEB1)轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究。方法通过实时荧光反转录定量PCR(RT-qPCR)检测UCA1相关miRNA分子,并通过细胞转染获得miR-122-5p和CPEB1相关细胞株。通过双荧光素酶报告实验分别验证UCA1与miR-122-5p、CPEB1与miR-122-5p的结合。药物敏感性实验获得顺铂药物半抑制浓度(IC50);通过肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析CPEB1在肺腺癌中的表达情况以及与免疫细胞功能的关系。结果miR-122-5p在肺腺癌细胞中的表达水平明显升高,并通过双荧光素酶报告实验以验证UCA1与miR-122-5p结合,构建miR-122-5p抑制物和模拟物转染肺腺癌细胞株,发现miR-122-5p抑制后,顺铂IC50浓度下降,而miR-122-5p过表达后,顺铂IC50浓度升高。CPEB1在肺腺癌细胞中的表达水平明显降低,双荧光素酶报告实验证实CPEB1是与miR-122-5p结合,CPEB1过表达后,顺铂IC50浓度减低;对TCGA数据库分析显示肺腺癌组织CPEB1 mRNA明显低于癌旁组织,ROC曲线分析显示CPEB1表达水平能较好地用于诊断肺腺癌(AUC=0.849),进一步分析显示CPEB1表达水平与肺腺癌患者的细胞功能如T细胞、B细胞、CD8+T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞、肥大细胞存在密切关联。结论UCA1与miR-122-5p存在结合位点,后者可影响肺腺癌的顺铂耐药,并与靶基因CPEB1结合;肺腺癌中CPEB1呈低表达,降低肺腺癌顺铂药物的敏感性。UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴有望为干预肺腺癌顺铂耐药的靶点。

miR-532-3p、MAPK在非小细胞肺癌患者靶向治疗耐药中的表达及其相关性分析

目的 探究微小RNA-532-3p (miR-532-3p)、有丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在非小细胞肺癌患者靶向治疗耐药中的表达及其相关性。方法 选取2013年6月至2016年1月榆林市第一医院肿瘤诊疗中心收治的表皮生长因子受体(EGFR)基因突变非小细胞肺癌EGFR酪氨酸澈酶抑制剂(EGFR-TKIs)耐药患者30例作为耐药组,非耐药患者32例为非耐药组。血清中miR-532-3p、MAPK水平分别采用实时荧光定量PCR法、酶联免疫吸附法检测;χ^(2)检验分析血清miR-532-3p、MAPK表达水平与化疗客观有效率的关系;Kaplan-Meier法分析血清miR-532-3p、MAPK表达水平与5年生存期的关系;采用Cox回归模型分析影响非小细胞肺癌患者预后不良的因素。结果 耐药组患者的血清miR-532-3p水平为2.09±0.24,明显高于非耐药组的1.05±0.16,MAPK水平为(1.04±0.57) mg/L,明显低于非耐药组的(7.63±3.28) mg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);化疗3个周期后,miR-532-3p低表达患者治疗有效率为62.50%,明显高于miR-532-3p高表达患者的33.33%,而MAPK低表达患者的治疗有效率为25.81%,明显低于MAPK高表达患者的70.97%,差异均有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier分析结果显示,血清miR-532-3p低表达非小细胞肺癌患者5年累积生存率为84.4%,明显高于血清miR-532-3p高表达者的50.0%,差异有统计学意义(P<0.05);血清MAPK低表达非小细胞肺癌患者5年累积生存率为61.3%,略低于血清MAPK高表达者的74.2%,差异无统计学意义(P>0.05);经多因素Cox回归模型分析结果显示,miR-532-3p高表达、MAPK低表达是非小细胞肺癌患者发生靶向治疗耐药的独立危险因素(P<0.05)。结论 miR-532-3p、MAPK与非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药有关,检测两者表达可能为非小细胞肺癌的治疗提供新思路。

驱动蛋白家族成员2C与卵巢癌化学药物治疗耐药的相关性

目的探讨驱动蛋白家族成员2C(kinesin family proteins 2C,KIF2C)与卵巢癌化学药物治疗(以下简称化疗)耐药的相关性。方法选取2010年1月至2020年12月于首都医科大学附属北京同仁医院接受手术治疗的上皮性卵巢癌患者151例。其中铂类化疗敏感患者98例,铂类化疗耐药患者53例。利用免疫组化染色法检测KIF2C在化疗敏感及化疗耐药卵巢癌组织中的表达情况。结果卵巢癌化疗耐药组织中KIF2C明显低表达。KIF2C及病理分期ⅢC期是影响卵巢癌化疗耐药的危险因素。结论KIF2C有可能成为预测卵巢癌患者化疗敏感性的指标,并可能成为治疗化疗耐药卵巢癌患者的新型治疗靶点。

肺癌组织中耐药相关蛋白和p53 bcl-2表达及其意义

目的:探讨肺癌组织中耐药相关蛋白和p53、bcl-2表达及其意义。方法:应用免疫组化技术检测治疗前73例肺癌组织标本中P-gp、MRP、LRP、GST-π、p53和bcl-2表达。结果:非小细胞肺癌组P-gp、LRP、MRP+LRP、P-gp+p53的蛋白表达明显高于小细胞肺癌组(P<0.05)。腺癌组MRP、LRP、MRP+LRP、MRP+LRP+GST-π、MRP+LRP+P-gp+GST-π蛋白阳性表达高于鳞状细胞癌组、小细胞肺癌组(P<0.05),MRP+GST-π共表达者高于鳞状细胞癌组(P<0.01),P-gp+p53共表达者高于小细胞肺癌组(P<0.05),bcl-2蛋白阳性表达低于鳞状细胞癌组、小细胞肺癌组(P<0.05)。鳞状细胞癌组P-gp、P-gp+p53、P-gp+bcl-2的蛋白表达明显高于小细胞肺癌组(P<0.05)。P-gp与p53、bcl-2蛋白阳性表达呈正相关(P<0.05)。p53与bcl-2蛋白阳性表达呈正相关(P<0.01)。MRP与GST-π蛋白阳性表达呈正相关(P<0.05)。结论:肺癌耐药为一多途径多基因参与的过程,P-gp、LRP、MRP、GST-π、p53、bcl-2表达及其共表达可作为监测肺癌细胞原发性耐药的指标。

多药耐药相关蛋白在阿霉素诱导人肝癌细胞SMMC-7721耐药性产生中的作用及机理

目的 动态观察阿霉素 (ADM )诱导肝癌细胞SMMC 772 1耐药性的产生 ,了解多药耐药相关蛋白 (MRP)在其耐药机理中的作用。方法 分别用逐步提高培养基中ADM的浓度诱导SMMC 772 1细胞和用含不同ADM浓度的培养基直接短期培养SMMC 772 1细胞的方法 ,诱导细胞产生耐药性 ,绘制剂量反应曲线 ,确定细胞耐药倍数 ,RT PCR法测定细胞MRPmRNA的表达水平 ,流式细胞仪检测细胞内柔红霉素 (DNR)的浓度。结果 随着培养基中ADM浓度的逐步提高 ,MRPmRNA的表达也逐渐增强 ,细胞内DNR浓度明显下降 ,SMMC 772 1细胞的耐药性逐渐增加 ;用含不同ADM浓度的培养基直接培养亲代细胞后 ,虽然MRPmRNA表达明显升高 ,但细胞内DNR浓度仍维持较高水平 ,并且绝大部分细胞短期内死亡。结论 ADM可以逐步诱导肝癌细胞产生耐药性 ,其机理主要是由于MRP基因过度表达 ,其蛋白产物能明显降低细胞内化疗药物浓度 ,从而细胞获得耐药性。

益气解毒中药联合靶向药物治疗Her-2阳性晚期乳腺癌疗效及对免疫功能和多重耐药相关蛋白水平的影响

目的观察益气解毒中药联合靶向药物治疗Her-2阳性晚期乳腺癌术后患者疗效及对免疫功能、多重耐药相关蛋白水平的影响。方法将130例Her-2阳性晚期乳腺癌术后患者随机分为2组,对照组65例给予靶向药物治疗,观察组65例在此基础上加用益气解毒中药治疗,观察2组治疗前后中医证候积分、FACT-B量表评分、T淋巴细胞亚群水平、免疫球蛋白水平及多重耐药相关蛋白水平变化情况,统计2组近期疗效和不良反应发生情况。结果治疗后2组气短、乏力、神疲、刺痛且痛有定处、脉络瘀血、皮下瘀斑积分及FACT-B量表评分均显著低于治疗前(P均<0.05),且观察组治疗后各项积分均显著低于对照组(P均<0.05)。治疗后对照组CD4^+、CD4^+/CD8^+及免疫球蛋白水平显著降低而CD8^+和多重耐药蛋白水平显著升高(P均<0.05),观察组CD4^+、CD4^+/CD8^+及免疫球蛋白水平显著升高而CD8^+和多重耐药蛋白水平显著降低(P均<0.05),且观察组各项指标均较对照组显著改善(P均<0.05)。观察组近期治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05),不良反应发生率显著低于对照组(P<0.05)。结论益气解毒中药联合靶向药物治疗Her-2阳性晚期乳腺癌可有效缓解临床症状,提高生活质量,改善免疫系统功能,下调多重耐药相关蛋白水平,且安全。

细胞外泌体蛋白AGR2表达差异与上皮性卵巢癌获得性耐药关系及机制研究

目的:探讨细胞外泌体蛋白AGR2表达差异与上皮性卵巢癌获得性耐药的关系。方法:用不同浓度顺铂(6、12、18、24μg/mL)处理细胞,筛选出大鼠卵巢癌耐药细胞株,MTT法检测细胞存活率。用超速差速离心法获得外泌体蛋白,纳米流式检测外泌体蛋白的粒径大小及颗粒浓度。通过qRT-PCR技术比较两组细胞系AGR2相关mRNA的转录情况,并通过Western blot实验对外泌体中AGR2蛋白表达水平进行比较,分析细胞外泌体中蛋白AGR2表达差异与上皮性卵巢癌获得性耐药的关系。结果:NUTU-19肿瘤细胞生存率与化疗药浓度呈负相关;药物浓度的升高与耐药细胞株(NUTU-19R)死亡率相关性不明显。NUTU-19R细胞株AGR2相关mRNA表达水平高于NUTU-19细胞株,差异有统计学意义(P<0.05);NUTU-19R细胞株AGR2蛋白表达高于NUTU-19细胞株,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:细胞外泌体蛋白AGR2高表达促进了上皮性卵巢癌获得性耐药的形成。

维生素K2调节YAP/TAZ信号通路对胆管癌细胞化疗耐药性的影响

目的:探究维生素K2(VK2)调节Yes相关蛋白(YAP)/PDZ结合基序转录共激活子(TAZ)信号通路对胆管癌(CCA)细胞化疗耐药性的影响。方法:将QBC939细胞设为对照组(Control组,空白培养基处理),QBC939/ADM细胞随机分为5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药组、低浓度VK2组、中浓度VK2组、高浓度VK2组、高浓度VK2+YAP激活剂JASP组。CCK-8法检测细胞增殖能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。流式细胞术检测细胞凋亡。采用Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase3和YAP/TAZ信号通路相关蛋白表达。结果:与Control组相比,5-FU组细胞OD450值(48 h、72 h)、细胞迁移率、细胞侵袭数目、细胞YAP、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著上升(P<0.05),细胞凋亡率、细胞Bax、Caspase-3蛋白表达显著下降(P<0.05)。与5-FU组相比,VK2-M组、VK2-H组细胞的相应指标变化与上述相反(P<0.05)。JASP减弱了VK2逆转CCA化疗药物耐药性的作用。结论:VK2可能通过抑制YAP/TAZ信号通路,逆转CCA细胞对化疗药物的耐药性。

肺耐药蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达及与EGFR、HER-2的相关性

目的探讨肺耐药蛋白(lung-resistance protein,LRP)与促瘤因素表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和HER-2在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化EnVision法,检测76例乳腺癌组织中LRP、EGFR和HER-2的表达。结果1)在乳腺癌组织中,LRP、EGFR、HER-2的表达率分别为35.53%、15.79%和25%,它们相互之间表达相关性不明显。2)随着肿瘤组织恶性程度的增高,LRP的表达明显降低(P=0.039)。3)LRP、EGFR、HER-2在淋巴结非转移组与转移组中的表达差异无统计学意义。结论LRP的表达在乳腺癌的恶性进展过程中起重要作用,诊断过程中结合该指标可更准确判断肿瘤恶性程度。

下调富含脯氨酸蛋白11表达对食管癌耐药细胞EC9706/DDP耐药性的影响及其机制

目的:探讨下调富含脯氨酸蛋白11(PRR11)表达对食管癌耐药细胞耐药性的影响,阐明其相关机制。方法:采用顺铂(DDP)浓度递增间断刺激人食管癌EC9706细胞建立DDP耐药细胞株EC9706/DDP,MTT法检测EC9706/DDP细胞药敏性,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测EC9706/DDP细胞及其亲本EC9706细胞中PRR11 mRNA和蛋白表达水平。将EC9706/DDP细胞分为对照组、sh-NC组(转染sh-NC)、sh-PRR11组(转染sh-PRR11)、sh-NC+DDP组(转染sh-NC后用4 mg·L^(-1)DDP处理)和sh-PRR11+DDP组(转染sh-PRR11后用4 mg·L^(-1)DDP处理),RT-qPCR法检测各组细胞中PRR11 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中PRR11、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)p110α、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)蛋白表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果:成功获得DDP耐药细胞株EC9706/DDP,耐药指数为7.23±0.86。与EC9706细胞比较,EC9706/DDP细胞中PRR11 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。分别与对照组和sh-NC组比较,sh-PRR11组细胞中PRR11 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞的DDP半数抑制浓度(IC50)降低(P<0.05)。与sh-NC组比较,sh-NC+DDP组和sh-PRR11组细胞中PI3K p110α、p-AKT、P-gp和MRP1蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);分别与sh-NC+DDP组和sh-PRR11组比较,sh-PRR11+DDP组细胞中PI3Kp110α、p-AKT、P-gp和MRP1蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论:下调EC9706/DDP耐药细胞中PRR11基因的表达,可抑制耐药相关蛋白的表达,逆转对DDP耐药,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路激活有关。

整合膜蛋白2A与慢性粒细胞白血病耐药的相关性研究

目的:探索整合膜蛋白2A(ITM2A)在慢性粒细胞白血病(CML)耐药患者中的表达模式及临床意义。方法:采用qRT-PCR、Western blot、免疫细胞化学检测ITM2A在CML中的表达情况。为了解ITM2A可能介导的生物学效应,过表达ITM2A后流式细胞术检测CML细胞凋亡、细胞周期、髓系分化抗原表达变化。并初步探索其发挥生物学效应的潜在分子机制。结果:ITM2A在CML耐药患者骨髓中的表达明显低于敏感患者及健康供者(P<0.05);体外细胞实验成功构建CML耐药细胞株K562R,耐药株中ITM2A的表达明显低于敏感株(P<0.05);过表达K562R细胞中的ITM2A能够使K562R细胞对伊马替尼的敏感性增加(P<0.05),且阻滞细胞周期在G_(2)期,但不影响髓系分化。上调ITM2A能够使ERK信号通路的磷酸化水平降低(P<0.05)。结论:ITM2A在CML耐药患者中呈低表达,低表达ITM2A可能是CML对伊马替尼耐药的关键因子。

血管内皮生长因子对胃癌BGC-823细胞多药耐药相关蛋白1启动子活性的影响

目的:检测血管内皮生长因子(VEGF)对多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因启动子转录活性的影响并初步探讨其作用机制。方法:合成MRP1启动子片段,克隆到荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic中;用脂质体2000将重组的报告基因载体与内参质粒β-半乳糖苷酶(β-gal)瞬时共同转染人胃癌BGC-823细胞,检测VEGF作用后MRP1启动子活性的改变;继之,采用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002预处理转染的细胞,再检测VEGF对MRP1启动子转录活性的影响。结果:酶切鉴定和DNA序列分析表明成功地构建了重组PGL3-Basic-MRP1载体;荧光素酶活性分析表明重组PGL3-Basic-MRP1在BGC-823细胞中具有启动子活性(144±3.0),与空载体PGL3-Basic(60±4.910)相比,转录活性增高2.4倍,差异有统计学意义(P<0.01);VEGF能以剂量依赖的方式上调MRP1启动子区的转录活性,与无VEGF作用组(171±6.083)相比,最大活性(924±19.975)增高5.4倍(P<0.05);LY294002能够显著抑制VEGF对MRP1启动子区的转录激活,当LY294002浓度为50μmol/ml时,MRP1启动子活性(392±25.541)与无LY294002作用组(1001±11.533)相比下降2.5倍(P<0.05)。结论:VEGF对MRP1启动子活性具有上调作用,PI3K/AKT信号通路在这一过程中发挥了重要作用。

二十二碳六烯酸联合5-氟尿嘧啶对人肝癌细胞HepG2耐药相关蛋白表达的影响

目的研究二十二碳六烯酸(DHA)联合5氟尿嘧啶(5-FU)对人肝癌细胞HepG2耐药相关蛋白ERK、JNK及p38的表达。方法 Western blot检测5-FU5μg/mL,或5-FU5μg/mL联合DHA30μg/mL作用HepG2细胞48h后ERK、JNK及p38蛋白表达。结果与单用5-FU组比较,5-FU联合DHA组对耐药相关蛋白的影响,p-ERK明显受到抑制,而p-JNK表达显著增加,p-p38表达无差别。结论 DHA对肝癌细胞耐药相关蛋白的调控可能通过抑制ERK、激活JNK信号通路来增强5-FU的细胞毒活动,发挥增敏化疗药物的作用。

白细胞介素-23通过无翅基因相关整合位点/β-连环蛋白通路增强舌鳞状细胞癌抗凋亡及耐药能力

目的检测白细胞介素-23(IL-23)在舌鳞状细胞癌组织中表达水平与临床预后的关系,研究舌鳞状细胞癌细胞系SCC9经IL-23处理后抗凋亡及耐药能力的变化。方法免疫组织化学法检测28例舌鳞状细胞癌患者组织中IL-23的表达情况;实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测不同浓度的IL-23处理后,SCC9中无翅基因相关整合位点(Wnt)1及c-myc的m RNA表达水平;结合小分子干扰RNA(si RNA),Western blot法检测IL-23对SCC9细胞的β-连环蛋白(β-catenin)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)、P-糖蛋白(P-gp)表达影响及潜在机制;甲基噻唑基四唑法检测SCC9细胞在IL-23作用下对顺铂的抗凋亡能力改变。结果舌鳞状细胞癌组织中IL-23表达强度与淋巴结转移、神经侵犯及治疗复发有相关性(P<0.05);IL-23可增强癌细胞抗凋亡蛋白Bcl-2和耐药相关蛋白ABCG2、P-gp的表达,并且与Wnt通路活化程度密切相关;IL-23能够显著加强SCC9细胞对顺铂的抵抗性(P<0.01)。结论 IL-23通过上调舌鳞状细胞癌细胞的Wnt通路增强其抗凋亡及耐药能力。

多药耐药基因1和多药耐药相关蛋白基因1在腺样囊性癌细胞系ACC-2及其耐药细胞系ACC-2/BLM中表达的研究

目的检测多药耐药基因1(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因1(MRP1)在腺样囊性癌细胞系ACC-2及其耐药细胞系ACC-2/BLM中的表达。方法应用RT-PCR和免疫细胞化学技术分别检测MDR1和MRP1的mRNA表达以及相对应的P-gp和MRP1蛋白在两组细胞系中的表达。结果RT-PCR检测结果显示ACC-2以及ACC-2/BLM细胞均不表达MDR1mRNA,MRP1mRNA在ACC-2/BLM细胞中的表达明显强于ACC-2细胞。免疫细胞化学结果显示,2组细胞均不表达P-gp,在ACC-2/BLM细胞中MRP1蛋白表达强于ACC-2细胞。结论MRP1基因及其编码的MRP1蛋白在ACC-2/BLM细胞中高表达,可能与ACC-2/BLM细胞系产生多药耐药有关。

MiR-223-3p通过靶向SORBS1增加结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶的耐药性

目的:5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)是结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的一线治疗药物,CRC细胞对5-FU的耐药是导致化学治疗(以下简称“化疗”)失败的主要原因,然而耐药机制仍不明确。本研究旨在探究参与CRC细胞对5-FU耐药的抑癌基因,并寻找对该基因存在调控作用的微RNA(microRNA,miRNA)。方法:在高通量基因表达(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中下载CRC数据集GSE28702和GSE69657,分别分析2个数据集中对FOLFOX化疗方案应答组和无应答组患者的差异表达基因并确定目标基因;采用在线生物信息学数据库TargetScan、miRwalk和miRDB预测靶向目标基因含山梨醇和SH3结构域蛋白1(sorbin and SH3 domain containing 1,SORBS1)的miRNA。采用瞬时转染技术在CRC细胞系HCT116、SW620中分别转染siSORBS1、HA-SORBS1、miR-223-3p mimic、anti-miR-223-3p及其相应的阴性对照(siNC、HA、miR-NC、anti-miR-NC),在HCT116细胞中共转染miR-NC和HA、miR-223-3p mimic和HA、miR-223-3p mimic和HA-SORBS1、anti-miR-NC和siNC、anti-miR-223-3p和siNC、anti-miR-223-3p和siSORBS1。采用实时反转录PCR(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)和/或蛋白质印迹法检测细胞中SORBS1和miR-223-3p的表达水平。转染后用不同浓度的5-FU处理细胞。采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,双荧光素酶报告分析验证miR-223-3p与SORBS1的靶向关系。结果:GSE69657数据集和GSE28702数据集应答组分别有409和528个高表达基因,共有22个高表达交集基因。在22个高表达交集基因中,与CRC化疗敏感性有关的抑癌基因有3个,选择SORBS1作为目标基因进一步探索。3个在线生物信息学数据库预测的靶向SORBS1的miRNA为miR-223-3p。用5-FU(25μmol/L)处理HCT116、SW620细胞12~36 h后,2种细胞中miR-223-3p的表达水平均显著下调(均P<0.05)。转染siSORBS1或miR-223-3p mimic后,HCT116、SW620细胞中SORBS1表达水平均下调,细胞活力均增加(均P<0.05);转染HA-SORBS1或antimiR-223-3p后,HCT116、SW620细胞中SORBS1表达水平均上调,细胞活力均下降(均P<0.05)。双荧光素酶报告分析结果显示:共转染SORBS13'-非翻译区(untranslated region,UTR)野生型质粒和miR-223-3p mimic的细胞荧光素酶活性显著低于共转染SORBS13'-UTR野生型质粒和miR-NC的细胞(P<0.05)。与共转染miR-223-3p mimic和HA的细胞比较,共转染miR-223-3p mimic和HA-SORBS1的细胞活力明显降低(P<0.01);与共转染anti-miR-223-3p和siNC组比较,共转染anti-miR-223-3p和siSORBS1组细胞活力明显增加(P<0.05)。结论:MiR-223-3p通过靶向SORBS1基因增加CRC细胞对5-FU的耐药性,miR-223-3p有望成为临床治疗CRC的新靶点。