多药耐药相关蛋白-3表达与肝癌耐药的相关性

目的探讨多药耐药相关蛋白-3(MRP-3)的表达与肝癌耐药的相关性。方法应用RT-PCR方法检测正常肝细胞L-02、肝癌细胞BEL及肝癌耐药细胞HepG2/ADM中MRP-3mRNA的差异表达,再将MRP-3反义及正义寡核苷酸片段分别用脂质体转染进肝癌耐药细胞HepG2/ADM中,用MTT法、流式细胞仪及RT-PCR检测转染后细胞内阿霉素(ADM)的荧光强度、耐药指数及MRP-3mRNA的表达情况。结果肝癌耐药细胞HepG2/ADM中MRP-3mRNA的表达明显高于正常肝细胞L-02和肝癌细胞BEL(P<0.05)。MRP-3反义转染进耐药细胞后,可明显降低细胞内ADM的耐药指数,提高细胞内ADM浓度(P<0.05),细胞内MRP-3mRNA的表达较未转染细胞下降了62.5%(P<0.05)。结论 MRP-3的高表达可能是导致肝癌多药耐药的机制之一。

多药耐药相关蛋白-3、4基因在人胆囊胆固醇结石中表达的半定量研究

目的通过半定量RT-PCR的方法研究多药耐药相关蛋白-3、4(MRP3、MRP4)基因在患胆固醇结石病人的胆囊中与非结石人群胆囊中表达的异同。方法用半定量RT-PCR的方法研究MRP3、MRP4在胆固醇结石病人与无结石人群胆囊上皮组织中的表达的异同。结果在患胆固醇结石的胆囊组织中,MRP3和MRP4同时表达,而且表达水平均显著高于正常胆囊;另外,MRP3的表达水平显著高于MRP4(P<0.001)。在正常(对照组)胆囊组织中,仅有MRP3表达,而未能检测到MRP4。结论胆固醇结石病人的胆囊组织中MRP3、MRP4蛋白的表达高于无胆固醇结石人群,提示它们可能促进人胆囊胆固醇结石形成。

茵陈水提物对多药耐药蛋白3基因突变致新生儿肠外营养相关性胆汁淤积的保护作用

目的探讨茵陈水提物对多药耐药蛋白3(MDR3)基因突变导致的新生儿肠外营养相关性胆汁淤积(PNAC)的保护作用及可能机制。方法①将人原代培养肝细胞应用体外细胞培养、CRISPR/Cas9慢病毒感染、MDR3突变基因导入等技术处理后,比较1%脂肪乳诱导处理前(0)和处理后16、32、48 h不同时间点肝细胞上清液中肝胆生化指标〔丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、间接胆红素(IBil)、总胆汁酸(TBA)〕的水平,确定构建MDR3基因突变PNAC肝细胞模型脂肪酸诱导所需的时间。②将人原代培养肝细胞株按随机数字表法分为空白对照组、MDR3基因野生型组、MDR3基因突变组、茵陈水提物干预组。空白对照组只用培养液处理,MDR3基因野生型组应用慢病毒感染融入野生型MDR3基因和培养液培养,MDR3基因突变组应用慢病毒感染慢病毒导入MDR3(c.485T>A、c.2793insA、c.1031G>A、c.3347G>A)突变基因和培养液培养,茵陈水提物干预组应用慢病毒感染导入MDR3突变基因和培养液培养的基础上,加入100 g/L茵陈水提物预处理,然后将4组肝细胞分别加入1%脂肪乳诱导处理,处理时间为构建MDR3基因突变PNAC肝细胞模型脂肪酸诱导所需时间。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定4组肝细胞上清液中肝胆生化(ALT、AST、TBil、DBil、IBil、TBA)水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测4组肝细胞编码MDR3、胆盐输出泵(BSEP)、多药耐药相关蛋白(MRP)2~4和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的三磷酸腺苷结合盒蛋白(ABCB4、ABCB11、ABCC2、ABCC3、ABCC4)和TNF基因mRNA的表达丰度。结果与空白对照组和MDR3基因野生型组比较,MDR3基因突变组在经1%脂肪乳诱导处理前和处理后16 h肝细胞上清液中肝胆生化指标(ALT、AST、TBil、DBil、IBil、TBA)水平比较差异无统计学意义,经1%脂肪乳诱导处理32 h和48 h MDR3基因突变组肝细胞上清液肝胆生化指标(ALT、AST、TBil、DBil、IBil、TBA)水平均明显升高(均P<0.05),确定构建MDR3基因突变PNAC肝细胞模型脂肪酸诱导所需的时间为32 h。与MDR3基因突变组比较,茵陈水提物干预组肝细胞在脂肪乳处理后32 h肝细胞上清液中肝胆生化指标(ALT、AST、TBil、DBil、TBA)水平均明显降低〔ALT(ng/L):148.3±2.3比164.9±7.0,AST(ng/L):2767.4±78.8比3239.4±107.1,TBi(lμmol/L):7.6±0.2比13.6±0.3,DBi(lμmol/L):1.8±0.1比5.7±0.2,TBA(μmol/L):3.4±0.2比6.7±0.1,均P<0.05〕;空白对照组、MDR3基因野生型组、MDR3基因突变组和茵陈水提物干预组肝细胞编码MDR3、MRP2、MRP3、MRP4的ABCB4、ABCC2、ABCC3、ABCC4基因mRNA表达丰度差异无统计学意义;TNF基因mRNA在MDR3基因突变组呈高表达(2-ΔΔCt:1.258±0.200比1.001±0.052),茵陈水提物干预组呈低表达(2-ΔΔCt:0.387±0.247比1.258±0.200),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。与MDR3基因突变组比较,茵陈水提取物干预组肝细胞编码BSEP的ABCB11基因mRNA的表达丰度明显增高(2-ΔΔCt:2.955±0.479比1.333±0.529,P<0.05)。结论茵陈水提物对MDR3基因突变导致的PNAC有一定保护作用,可能与拮抗炎症反应,降低TNF基因的mRNA表达和改善编码BSEP的ABCB11基因的mRNA表达有关。

多药耐药相关蛋白转运体在药物性肝损伤中的作用研究进展

肝脏是人体新陈代谢最旺盛的器官,也是体内多种药物的解毒器官。当长期或过量使用药物时会增加药物性肝损伤(DILI)的风险。多药耐药相关蛋白(MRPs)是位于细胞膜上的功能蛋白,可转运多种药物,在DILI中发挥重要作用。MRPs功能的抑制、缺失是药物肝毒性产生的重要原因。本文对MRPs的结构、表达部位及功能进行归纳,并对MRPs与DILI的关系及其改善DILI的机制进行总结,期望更好地了解MRPs转运体与DILI的关系,为后续防治DILI提供参考。

miR-152-3p表达下调降低紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇的耐药性

目的探讨miR-152-3p对紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇耐药性的影响及机制。方法①紫杉醇(1.875,3.75,7.5,17和23μmol·L^(-1))与人卵巢癌A2780和A2780T细胞作用48 h,MTT法检测细胞存活率,计算抑制细胞存活半数抑制浓度(IC50)值和耐药指数(RI)。Western印迹法检测A2780和A2780T细胞耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)蛋白表达。②实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测A2780和A2780T细胞miR-152-3p表达水平。脂质体瞬时转染技术转染miR-152-3p抑制物降低A2780T细胞中miR-152-3p表达(miR-152-3p抑制物组),同时设转染miR-152-3p阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法、划痕实验和流式细胞术分别检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞存活、迁移和凋亡的影响;Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。③用miRDB,Targetscan,miRWalk和Starbase数据库预测miR-152-3p的靶基因,并用Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞磷酸酯酶张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达的变化及RT-qPCR检测A2780和A2780T细胞PTEN mRNA表达水平予以验证。随后,脂质体瞬时转染技术转染PTEN siRNA沉默A2780T细胞中PTEN表达,同时设转染siRNA阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法检测沉默PTEN表达后A2780T细胞存活率和IC50值,Western印迹法检测P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达。结果①紫杉醇处理后A2780和A2780T细胞存活率均降低(P<0.01),A2780T细胞RI为2.8。与A2780细胞相比,A2780T细胞P-gp,MRP1和ABCG2蛋白高表达(P<0.05,P<0.01)。②与A2780细胞相比,A2780T细胞miR-152-3p明显高表达(P<0.01)。与转染miR-152-3p阴性对照组比较,转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和细胞迁移能力(P<0.05)明显降低,细胞凋亡率升高(P<0.01);Bax蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。③生物信息学数据库分析结果提示,PTEN是miR-152-3p的一个靶基因;Western印迹法验证显示,转染miR-152-3p抑制物组A2780T细胞PTEN蛋白表达低于转染miR-152-3p阴性对照组(P<0.05);RT-qPCR结果显示,A2780T细胞PTEN mRNA表达水平高于A2780细胞(P<0.01)。转染PTEN siRNA沉默PTEN表达后,与转染siRNA阴性对照组相比,A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和IC50值(P<0.01)显著降低,P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论miR-152-3p在A2780T细胞中高表达,其表达下调可抑制A2780T细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,降低A2780T细胞对紫杉醇的耐药性,该作用可能是通过降低其靶基因PTEN表达发挥的。

CAFs分泌的PDGFC通过PI3K-mTOR信号通路促进乳腺癌细胞对阿霉素耐药

目的探讨肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)来源的血小板衍生生长因子C(platelet derived growth factor C,PDGFC)是否促进乳腺癌细胞对阿霉素(doxorubicin,DOX)耐药并探讨其机制。方法原代提取CAFs和正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)并获取CAFs和NFs的条件培养基(conditional medium,CM),观察CAFs-CM是否影响乳腺癌细胞对DOX的敏感性;检测CAFs及其条件培养基中PDGFC的表达;Western blot检测乳腺癌细胞凋亡相关蛋白BAX/BCL2、耐药蛋白ABCG2、线粒体膜蛋白TOM20与COXⅣ及信号蛋白(p-)PI3K与(p-)mTOR的表达;DCFH-DA荧光染色、JC-1试剂盒分别检测乳腺癌细胞内ROS水平与线粒体膜电位。结果CAFs-CM减少乳腺癌细胞中DOX的含量,诱导对DOX耐药,同时乳腺癌细胞中BAX减少,Bcl2增加,ROS减少,线粒体膜电位升高及线粒体膜蛋白TOM20与COXⅣ表达增加。进一步研究发现,CAFs及CAFs-CM中PDGFC均高表达,重组人PDGFC产生了与CAFs-CM相似的促进乳腺癌细胞对DOX耐药的作用,PDGFRα的特异性抑制剂则显著抑制了CAF-CM诱导的耐药;进一步机制研究表明,CAFs分泌的PDGFC通过激活PI3K-mTOR信号通路诱导了乳腺癌细胞耐药。结论CAFs分泌的PDGFC通过PI3K-mTOR通路促进乳腺癌细胞对DOX耐药,这一发现为开发靶向CAFs的抗癌药物提供了新的思路。

Circ_DCAF6通过调控miR-485-3p/FOXK1轴影响结直肠癌顺铂耐药细胞增殖、迁移和凋亡

目的:探讨circ_DCAF6对结直肠癌顺铂(DDP)耐药细胞增殖、迁移和凋亡的影响及可能机制。方法:体外培养SW480及DDP耐药细胞SW480/DDP,RT-qPCR法检测细胞中circ_DCAF6和miR-485-3p表达,蛋白质印迹法检测FOXK1蛋白表达。分别转染si-NC、si-circ_DCAF6、miR-NC、miR-485-3p及si-circ_DCAF6与anti-miR-485-3p至SW480/DDP细胞,CCK-8法检测不同浓度(0、0.156、0.625、2.5、10、40、160μg/mL)DDP作用转染后的细胞24 h的存活率,并计算半数抑制浓度(IC50值);检测细胞迁移、凋亡并验证circ_DCAF6、miR-485-3p和FOXK1调控关系。结果:与SW480细胞相比,SW480/DDP细胞中circ_DCAF6和FOXK1蛋白表达升高,miR-485-3p表达降低(P<0.05)。沉默circ_DCAF6或过表达miR-485-3p可抑制SW480/DDP细胞增殖、迁移和FOXK1蛋白表达,升高SW480/DDP细胞对DDP的敏感性,并促进细胞凋亡(P<0.05);敲低miR-485-3p可减弱沉默circ_DCAF6对SW480/DDP细胞恶性表型的影响。circ_DCAF6可靶向结合miR-485-3p;FOXK1是miR-485-3p的靶基因。结论:沉默circ_DCAF6可抑制SW480/DDP细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,其作用机制与靶向调控miR-485-3p/FOXK1轴有关。

miR-532-3p、MAPK、Nrf2表达与非小细胞肺癌患者对EGFR-TKIs耐药的关系研究

目的 探讨血清微小核糖核酸-532-3p(miR-532-3p)、有丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、核因子E2相关因子2(Nrf2)表达情况与非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)治疗耐药的关系。方法 回顾性选取2021年1月—2023年7月张家口市第一医院收治的198例EGFR基因突变非小细胞肺癌EGFR-TKIs治疗耐药患者作为耐药组,另选同期收治的202例非耐药患者作为非耐药组。比较两组血清miR-532-3p、MAPK、Nrf2表达水平,用Pearson相关性分析EGFR基因突变非小细胞肺癌EGFR-TKIs治疗耐药患者血清miR-532-3p、MAPK、Nrf2表达的相关性,并予以多因素Logistic回归分析EGFR基因突变非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药的危险因素。结果 耐药组血清miR-532-3p表达水平高于非耐药组(P<0.05),血清MAPK、Nrf2表达水平低于非耐药组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,EGFR基因突变非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药患者血清miR-532-3p与血清MAPK、Nrf2均呈负相关(r=-0.612、-0.598,P<0.05),血清MAPK与Nrf2呈正相关(r=0.499,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清miR-532-3p表达水平上调、血清MAPK、Nrf2表达水平下调是EGFR基因突变非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药的独立危险因素(OR=3.089、2.217、3.428,P<0.05)。结论 EGFR基因突变非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药的发生与血清miR-532-3p上调、MAPK、Nrf2下调密切相关,检测三者表达水平可能成为非小细胞肺癌治疗过程中的关键生物治疗靶点。

lncRNA CCAT1通过miR-490-3p对膀胱癌细胞化疗耐药的影响

目的 探讨lncRNA CCAT1通过miR-490-3p对膀胱癌细胞化疗耐药的影响。方法 构建膀胱癌细胞T24耐顺铂细胞株。荧光素酶报告实验检测lncRNA CCAT1与miR-490-3p的结合、miR-490-3p与KDM7A mRNA-UTR的结合。敲低lncRNA CCAT1或敲低KDM7A或过表达miR-490-3p后,检测耐顺铂细胞株的凋亡水平。结果 顺铂处理后,相对于对照膀胱癌细胞系T24,膀胱癌顺铂耐药细胞系T24的凋亡水平显著下降(P<0.05)。敲低LncRNA CCAT1后顺铂使膀胱癌顺铂耐药细胞系T24的凋亡水平显著上升(P<0.05)。过表达miR-490-3p后,相比于LncRNA CCAT1突变型,荧光素酶报告实验发现LncRNA CCAT1野生型的荧光素酶活性下降(P<0.05)。过表达miR-490-3p后,顺铂使膀胱癌顺铂耐药细胞系T24的凋亡水平显著上升(P<0.05)。过表达miR-490-3p后,相比于KDM7A-3'UTR突变型,荧光素酶报告实验发现KDM7A-3'UTR野生型的荧光素酶活性下降(P<0.05)。过表达miR-490-3p后,膀胱癌顺铂耐药细胞系T24中KDM7A的mRNA和蛋白表达水平均下降(P<0.05);敲低miR-490-3p后,膀胱癌顺铂耐药细胞系T24中KDM7A的mRNA和蛋白表达水平均上升(P<0.05)。敲低KDM7A后,顺铂使膀胱癌顺铂耐药细胞系T24的凋亡水平显著上升(P<0.05)。结论 lncRNA CCAT1/miR-490-3p/KDM7A促进了膀胱癌细胞对化疗药物的抵抗。

IL-6/STAT3信号通路介导索拉非尼治疗原发性肝癌耐药机制的研究进展

原发性肝癌(PLC)是我国常见恶性肿瘤之一,肝细胞癌(HCC)是其最主要的类型。索拉非尼是一种新型多功能口服抗癌药物,作为首个被批准用于临床的多靶点靶向治疗药物,索拉非尼主要用于治疗不能手术或远处转移的HCC患者。目前,仍是HCC的一线治疗药物之一。近年来,肝癌患者对索拉非尼产生耐药性,同时,索拉非尼联合其他药物降低耐药性的临床试验仍处于瓶颈期,因此,探究索拉非尼耐药性的产生机制对克服索拉非尼治疗PLC耐药性具有临床意义。有研究表明,白细胞介素-6(IL-6)/信号传导子与转录激活子3(STAT3)信号通路在索拉非尼耐药机制中具有重要作用。该文对IL-6/STAT3信号通路介导索拉非尼治疗PLC耐药机制的研究进展进行了综述,为解决其耐药性的产生提供了新的思路。

miR-532-3p、MAPK在非小细胞肺癌患者靶向治疗耐药中的表达及其相关性分析

目的 探究微小RNA-532-3p (miR-532-3p)、有丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在非小细胞肺癌患者靶向治疗耐药中的表达及其相关性。方法 选取2013年6月至2016年1月榆林市第一医院肿瘤诊疗中心收治的表皮生长因子受体(EGFR)基因突变非小细胞肺癌EGFR酪氨酸澈酶抑制剂(EGFR-TKIs)耐药患者30例作为耐药组,非耐药患者32例为非耐药组。血清中miR-532-3p、MAPK水平分别采用实时荧光定量PCR法、酶联免疫吸附法检测;χ^(2)检验分析血清miR-532-3p、MAPK表达水平与化疗客观有效率的关系;Kaplan-Meier法分析血清miR-532-3p、MAPK表达水平与5年生存期的关系;采用Cox回归模型分析影响非小细胞肺癌患者预后不良的因素。结果 耐药组患者的血清miR-532-3p水平为2.09±0.24,明显高于非耐药组的1.05±0.16,MAPK水平为(1.04±0.57) mg/L,明显低于非耐药组的(7.63±3.28) mg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);化疗3个周期后,miR-532-3p低表达患者治疗有效率为62.50%,明显高于miR-532-3p高表达患者的33.33%,而MAPK低表达患者的治疗有效率为25.81%,明显低于MAPK高表达患者的70.97%,差异均有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier分析结果显示,血清miR-532-3p低表达非小细胞肺癌患者5年累积生存率为84.4%,明显高于血清miR-532-3p高表达者的50.0%,差异有统计学意义(P<0.05);血清MAPK低表达非小细胞肺癌患者5年累积生存率为61.3%,略低于血清MAPK高表达者的74.2%,差异无统计学意义(P>0.05);经多因素Cox回归模型分析结果显示,miR-532-3p高表达、MAPK低表达是非小细胞肺癌患者发生靶向治疗耐药的独立危险因素(P<0.05)。结论 miR-532-3p、MAPK与非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药有关,检测两者表达可能为非小细胞肺癌的治疗提供新思路。

肺癌组织中耐药相关蛋白和p53 bcl-2表达及其意义

目的:探讨肺癌组织中耐药相关蛋白和p53、bcl-2表达及其意义。方法:应用免疫组化技术检测治疗前73例肺癌组织标本中P-gp、MRP、LRP、GST-π、p53和bcl-2表达。结果:非小细胞肺癌组P-gp、LRP、MRP+LRP、P-gp+p53的蛋白表达明显高于小细胞肺癌组(P<0.05)。腺癌组MRP、LRP、MRP+LRP、MRP+LRP+GST-π、MRP+LRP+P-gp+GST-π蛋白阳性表达高于鳞状细胞癌组、小细胞肺癌组(P<0.05),MRP+GST-π共表达者高于鳞状细胞癌组(P<0.01),P-gp+p53共表达者高于小细胞肺癌组(P<0.05),bcl-2蛋白阳性表达低于鳞状细胞癌组、小细胞肺癌组(P<0.05)。鳞状细胞癌组P-gp、P-gp+p53、P-gp+bcl-2的蛋白表达明显高于小细胞肺癌组(P<0.05)。P-gp与p53、bcl-2蛋白阳性表达呈正相关(P<0.05)。p53与bcl-2蛋白阳性表达呈正相关(P<0.01)。MRP与GST-π蛋白阳性表达呈正相关(P<0.05)。结论:肺癌耐药为一多途径多基因参与的过程,P-gp、LRP、MRP、GST-π、p53、bcl-2表达及其共表达可作为监测肺癌细胞原发性耐药的指标。

REST/TUBB3轴对卵巢癌紫杉醇化疗耐药性的影响及作用机制

目的 探究PE1沉默转录因子(REST)/微管蛋白β(TUBB)3对卵巢癌紫杉醇耐药性影响及作用机制。方法 免疫组织化学法检测卵巢癌紫杉醇敏感及耐药肿瘤组织中REST、TUBB3表达,Western印迹检测卵巢癌紫杉醇敏感及耐药细胞中REST、TUBB3蛋白表达,定量聚合酶链反应(qPCR)检测卵巢癌组织中REST、TUBB3 mRNA表达。不同浓度紫杉醇作用于SKOV3、OVCAR3和SKOV3/tax、OVCAR3/tax细胞后,分析细胞凋亡与周期变化,CCK8检测细胞活力,Western印迹检测REST、TUBB3蛋白表达。过表达或敲低REST后,qPCR和Western印迹分别检测TUBB3 mRNA和蛋白表达,检测细胞凋亡水平和周期阻滞。染色质免疫沉淀法检测H3-ac、H4-ac、HADC1与TUBB3基因第2个CpG位点的结合。结果 REST在卵巢癌紫杉醇耐药肿瘤组织及细胞系中低表达,TUBB3异常高表达于卵巢癌紫杉醇化疗耐药肿瘤组织及细胞系,两者mRNA表达呈显著负相关(P<0.05)。不同浓度紫杉醇作用下,REST蛋白表达逐渐明显降低,TUBB3蛋白表达逐渐明显升高,SKOV3/tax、OVCAR3/tax细胞凋亡水平和细胞周期阻滞显著低于SKOV3、OVCAR3(P<0.05)。过表达REST后,TUBB3表达明显降低,细胞对紫杉醇敏感性明显提高,细胞凋亡水平和细胞周期阻滞显著提高(P<0.05)。敲低REST后H3-ac、H4-ac与TUBB3基因第2个CpG位点的结合增强,促进TUBB3基因转录。结论 在卵巢癌紫杉醇化疗耐药组织及细胞系中,REST低表达,而TUBB3异常高表达,REST和TUBB3的RE-1序列结合调控其转录,在紫杉醇化疗耐药中发挥负调控作用。

基于网络药理学技术探讨化痰散结方对阿霉素耐药乳腺癌PI3K-Akt-mTOR信号通路相关蛋白的影响

目的：基于网络药理学建立多柔比星/阿霉素耐药相关的蛋白质相互作用网络并通体外实验研究探究化痰散结方逆转耐药的相关分子学机制。方法：筛选pubmed中人类OMMIM遗传数据库的乳腺癌多柔比星/阿霉素耐药相关基因,应用STRING软件进行文本挖掘并建立蛋白质相互作用网络;将互作数据读入Cytoscape3.4.0,分别应用插件JEPETTO 1.3.1和MCODE1.4.2实现拓扑分析和聚类分析;使用Cytoscape中的插件Clusterviz进一步挖掘网络中可能包含的分子复合物;将所得复合物导入DAVID,富集其中的分子复合物通路。针采用MTT法、Western Blot法对细胞及关键通路进行体外实验研究,进而观察化痰散结方对MCF-7/ADR细胞增殖及相关信号通路表达的影响。结果：乳腺癌多柔比星/阿霉素耐药蛋白质网络是一个多基因构成的网络并且由多信号通路协同发挥调节作用,并非简单由单基因或信号通路调控;在所得相互作用网络中,PI3K-Akt-mTOR很可能作为＂关键节点＂发挥调控作用;化痰散结方含药血清能够抑制MCF-7/ADR细胞的增值,其内在分子学机制可能与抑制PI3K-Akt-mTOR通路的表达有关。结论：化痰散结方能够逆转人乳腺癌多柔比星/阿霉素耐药,其耐药相关蛋白质相互作用网络复杂,其中PI3K-Akt-mTOR很可能是其中的关键调控点,而化痰散结方抑制MCF-7/ADR细胞增殖的作用机制之一是抑制PI3K-Akt-mTOR通路的表达。

下调富含脯氨酸蛋白11表达对食管癌耐药细胞EC9706/DDP耐药性的影响及其机制

目的:探讨下调富含脯氨酸蛋白11(PRR11)表达对食管癌耐药细胞耐药性的影响,阐明其相关机制。方法:采用顺铂(DDP)浓度递增间断刺激人食管癌EC9706细胞建立DDP耐药细胞株EC9706/DDP,MTT法检测EC9706/DDP细胞药敏性,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测EC9706/DDP细胞及其亲本EC9706细胞中PRR11 mRNA和蛋白表达水平。将EC9706/DDP细胞分为对照组、sh-NC组(转染sh-NC)、sh-PRR11组(转染sh-PRR11)、sh-NC+DDP组(转染sh-NC后用4 mg·L^(-1)DDP处理)和sh-PRR11+DDP组(转染sh-PRR11后用4 mg·L^(-1)DDP处理),RT-qPCR法检测各组细胞中PRR11 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中PRR11、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)p110α、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)蛋白表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果:成功获得DDP耐药细胞株EC9706/DDP,耐药指数为7.23±0.86。与EC9706细胞比较,EC9706/DDP细胞中PRR11 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。分别与对照组和sh-NC组比较,sh-PRR11组细胞中PRR11 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞的DDP半数抑制浓度(IC50)降低(P<0.05)。与sh-NC组比较,sh-NC+DDP组和sh-PRR11组细胞中PI3K p110α、p-AKT、P-gp和MRP1蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);分别与sh-NC+DDP组和sh-PRR11组比较,sh-PRR11+DDP组细胞中PI3Kp110α、p-AKT、P-gp和MRP1蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论:下调EC9706/DDP耐药细胞中PRR11基因的表达,可抑制耐药相关蛋白的表达,逆转对DDP耐药,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路激活有关。

膜联蛋白A3、天冬氨酸β-羟化酶与乳腺癌患者紫杉醇耐药的相关性分析

目 的探讨膜联蛋白A3(annexin A3,ANXA3)、天冬氨酸β-羟化酶(aspartateβ-hydroxylase,ASPH)与乳腺癌患者紫杉醇(paclitaxel,PTX)耐药的相关性。方法 选取2020年2月至2021年2月中国人民解放军联勤保障部队第九六○医院淄博医疗区收治的74例女性乳腺癌患者作为研究对象,根据是否发生PTX耐药将其分为PTX耐药组(23例)和无PTX耐药组(51例),检测其乳腺癌组织中ANXA3、ASPH的表达水平。比较两组患者的临床资料并分析影响乳腺癌PTX耐药的因素。结果 单因素分析结果显示,T分期、N分期以及细胞周期调节蛋白D1(cell cycle regulatory protein D1,Cyclin D1)、ANXA3、ASPH阳性表达是影响乳腺癌患者PTX耐药的因素(P<0.05);多因素logistic回归分析结果显示,ANXA3阳性表达(OR=3.077,95%CI 1.104~8.577)、ASPH阳性表达(OR=1.548,95%CI1.149~2.085)是乳腺癌患者PTX耐药的独立影响因素(P<0.05);ANXA3、ASPH表达与Cyclin-D1的表达有关(P<0.05)。结论 ANXA3、ASPH高表达是乳腺癌患者PTX耐药的独立影响因素,可作为乳腺癌患者PTX耐药的重要评估指标之一。

UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究

目的探讨尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)/miR-122-5p/pcDNA-胞质多聚腺苷酸元件结合蛋白1(CPEB1)轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究。方法通过实时荧光反转录定量PCR(RT-qPCR)检测UCA1相关miRNA分子,并通过细胞转染获得miR-122-5p和CPEB1相关细胞株。通过双荧光素酶报告实验分别验证UCA1与miR-122-5p、CPEB1与miR-122-5p的结合。药物敏感性实验获得顺铂药物半抑制浓度(IC50);通过肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析CPEB1在肺腺癌中的表达情况以及与免疫细胞功能的关系。结果miR-122-5p在肺腺癌细胞中的表达水平明显升高,并通过双荧光素酶报告实验以验证UCA1与miR-122-5p结合,构建miR-122-5p抑制物和模拟物转染肺腺癌细胞株,发现miR-122-5p抑制后,顺铂IC50浓度下降,而miR-122-5p过表达后,顺铂IC50浓度升高。CPEB1在肺腺癌细胞中的表达水平明显降低,双荧光素酶报告实验证实CPEB1是与miR-122-5p结合,CPEB1过表达后,顺铂IC50浓度减低;对TCGA数据库分析显示肺腺癌组织CPEB1 mRNA明显低于癌旁组织,ROC曲线分析显示CPEB1表达水平能较好地用于诊断肺腺癌(AUC=0.849),进一步分析显示CPEB1表达水平与肺腺癌患者的细胞功能如T细胞、B细胞、CD8+T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞、肥大细胞存在密切关联。结论UCA1与miR-122-5p存在结合位点,后者可影响肺腺癌的顺铂耐药,并与靶基因CPEB1结合;肺腺癌中CPEB1呈低表达,降低肺腺癌顺铂药物的敏感性。UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴有望为干预肺腺癌顺铂耐药的靶点。

基于cBD3的衍生肽对犬皮肤源多药耐药菌的抑菌活性

[目的]筛选犬皮肤源多药耐药菌,同时基于犬防御素设计衍生肽并探究其抗菌作用。[方法]通过K-B药敏纸片法对临床分离的菌株进行筛选,随后以犬β-防御素3(cBD3)的氨基酸序列为模板,采用氨基酸替换的方式对序列进行设计,选取优化肽cBD3-ABU进行化学合成,利用微量肉汤稀释法检测cBD3-ABU对多药耐药菌的抑菌活性。[结果]筛选获得8株犬皮肤源多药耐药菌;通过固相合成法获得纯度达95.61%的cBD3-ABU;cBD3对大肠杆菌、表皮葡萄球菌、伪中间型葡萄球菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为32、64、64、128μg/mL,高浓度cBD3-ABU对犬皮肤源大肠杆菌、表皮葡萄球菌、伪中间型葡萄球菌、金黄色葡萄球菌的抑菌率分别为96.02%、81.85%、87.25%、98.91%。[结论]cBD3-ABU在体外具有良好的抑菌活性,具有进一步开发为治疗性药物的潜力。

LHFPL3-AS1靶向miR-515-5p对胃癌顺铂耐药细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨LHFPL3-AS1靶向miR-515-5p对胃癌顺铂耐药细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时定量聚合酶链反应分析胃黏膜上皮细胞GES-1、亲本细胞HGC-27、顺铂耐药细胞HGC-27/DDP中LHFPL3-AS1和miR-515-5p表达。将HGC-27/DDP细胞分为对照(Con)组、si-NC组、si-LHFPL3-AS1组、miR-NC组、miR-515-5p mimic组、si-LHFPL3-AS1+miR-515-5pinhibitor组。双荧光素酶报告实验确定LHFPL3-AS1和miR-515-5p的靶向关系。CCK-8法检测细胞存活率,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成数,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭数,蛋白质印迹法检测E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果随着顺铂浓度的增加,HGC-27和HGC-27/DDP细胞的存活率逐渐降低,HGC-27/DDP细胞的IC50(236.20μmol/L)高于HGC-27细胞(5.83μmol/L)。与GES-1细胞比较,HGC-27和HGC-27/DDP细胞中LHFPL3-AS1相对水平显著升高,miR-515-5p相对水平显著降低(P<0.05)。LHFPL3-AS1和miR-515-5p直接特异性结合。与Con组、si-NC组比较,si-LHFPL3-AS1组HGC-27/DDP细胞miR-515-5p相对水平、E-cadherin蛋白表达显著升高,克隆形成数、迁移数、侵袭数、细胞存活率、N-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-515-5pmimic组HGC-27/DDP细胞E-cadherin蛋白表达显著升高,克隆形成数、迁移数、侵袭数、细胞存活率、N-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05);与si-LHFPL3-AS1组比较,si-LHFPL3-AS1+miR-515-5p inhibitor组HGC-27/DDP细胞E-cadherin蛋白表达显著降低,克隆形成数、迁移数、侵袭数、细胞存活率、N-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论干扰LHFPL3-AS1通过上调miR-515-5p可抑制胃癌细胞HGC-27/DDP增殖、迁移和侵袭。

血管内皮生长因子对胃癌BGC-823细胞多药耐药相关蛋白1启动子活性的影响

目的:检测血管内皮生长因子(VEGF)对多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因启动子转录活性的影响并初步探讨其作用机制。方法:合成MRP1启动子片段,克隆到荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic中;用脂质体2000将重组的报告基因载体与内参质粒β-半乳糖苷酶(β-gal)瞬时共同转染人胃癌BGC-823细胞,检测VEGF作用后MRP1启动子活性的改变;继之,采用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002预处理转染的细胞,再检测VEGF对MRP1启动子转录活性的影响。结果:酶切鉴定和DNA序列分析表明成功地构建了重组PGL3-Basic-MRP1载体;荧光素酶活性分析表明重组PGL3-Basic-MRP1在BGC-823细胞中具有启动子活性(144±3.0),与空载体PGL3-Basic(60±4.910)相比,转录活性增高2.4倍,差异有统计学意义(P<0.01);VEGF能以剂量依赖的方式上调MRP1启动子区的转录活性,与无VEGF作用组(171±6.083)相比,最大活性(924±19.975)增高5.4倍(P<0.05);LY294002能够显著抑制VEGF对MRP1启动子区的转录激活,当LY294002浓度为50μmol/ml时,MRP1启动子活性(392±25.541)与无LY294002作用组(1001±11.533)相比下降2.5倍(P<0.05)。结论:VEGF对MRP1启动子活性具有上调作用,PI3K/AKT信号通路在这一过程中发挥了重要作用。