多药耐药相关蛋白4在不同放射敏感性大肠癌细胞中的表达

目的通过对大肠癌放射敏感细胞株与抵抗细胞株的筛选，观察多药耐药相关蛋白4（MRP4）在2株细胞中的表达，探讨MRP4蛋白表达与放射敏感性的关系。方法用不同放射剂量（0、2、4、6、8Gy）X射线照射大肠癌细胞株LOVO、DLD-1、HT-29、HCT116、RKO并从中筛选出放射敏感和抵抗细胞株，免疫组织化学方法检测MRP4蛋白在这2株细胞中的表达差异。结果放射敏感细胞株LOVO与放射抵抗细胞株RKO在射线干预后生长抑制曲线差异有统计学意义（P〈0．01）；MRP4蛋白在RKO与LOVO中的低表达率分别为71％、17％和29％、83％，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论MRP4蛋白在放射敏感细胞株LOVO中低表达，而在放射耐受细胞株RKO中高表达，表明MRP4蛋白表达不仅和化疗抵抗相关，还与肿瘤的放射抵抗相关。

多药耐药相关蛋白4在肝癌细胞株SMMC-7721中化疗耐药的作用

目的 观察沉默多药耐药相关蛋白4（MRP4）基因对SMMC-7721耐阿霉素细胞株（SMMC-7721-ADM）的影响.方法 实验分为4组：SMMC-7721组、SMMC-7721-ADM组、SiNC-SMMC-7721-ADM阴性转染组、沉默MRP4的小干扰RNA （siMRP4）-SMMC-7721-ADM转染组;设计并筛选出抑制效率最高的siMRP4;Western blot及反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组MRP4蛋白和mRNA的表达水平;噻唑蓝（MTT）法观察各组对阿霉素（ADM）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、长春新碱（VCR）和奥沙利铂（OHP）的敏感性;流式细胞术检测各组细胞凋亡.结果 浓度为25 mol/L的4-6-MRP4抑制效率为87.60％,选其为siMRP4;SMMC-7721组中MRP4 mRNA和蛋白极少量或不表达（0.08 ±0.03,P＜0.05;0.025±0.009,P＜0.05）,SMMC-7721-ADM组显著高表达（8.76 ±0.08,P＜0.05;0.684±0.004,P＜0.05）,siMRP4-SMMC-7721-ADM转染组（1.00 ±0.01,P ＜0.05;0.180±0.003,P＜ 0.05）较SMMC-7721-ADM组明显下降但仍稍高于SMMC-7721组;siMRP4-SMMC-7721-ADM转染组与SMMC-7721-ADM组比较对ADM、5-Fu、VCR和OHP的耐药系数（RI）分别为0.40、0.85、0.32、0.05,较SMMC-7721-ADM对化疗药物敏感性增强（P＜0.05）,siMRP4转染组凋亡率3.26％较SMMC-7721-ADM组增加（P＜0.05）.结论 MRP4在SMMC-7721极少量或不表达,SMMC-7721-ADM肝癌细胞株高表达,沉默MRP4能较大程度逆转其化疗耐药性.

抑制多药耐药相关蛋白4对脓毒症大鼠肺血管内皮屏障功能的保护作用

目的探讨抑制多药耐药相关蛋白4（MRP4）对脓毒症大鼠肺血管内皮屏障功能的影响。方法60只SpragueDawley大鼠随机（随机数字法）分为假手术组、脓毒症组和MRP4抑制剂干预组，每组20只动物。脓毒症模型采用盲肠结扎穿孔法。MRP4抑制剂干预组于脓毒症模型建立前30min腹腔注射MRP4抑制剂MK571（20mg／kg）。术后24h，采用ELISA法检测血清促炎细胞因子白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平，取肺组织做病理学检查，用伊文思蓝法测定肺组织渗透性。结果与假手术组大鼠相比，脓毒症组大鼠血清IL-6和TNF-α水平显著升高，肺组织损伤明显，肺组织渗透性增强。与脓毒症大鼠组比较，MRP4抑制剂干预组大鼠血清IL-6和TNF-α水平明显降低，肺组织病理损伤减轻，肺组织渗透性减弱。结论抑制MRP4可显著改善脓毒症大鼠肺血管内皮屏障功能障碍。

多药耐药相关蛋白4对脂多糖诱导的内皮细胞通透性及细胞骨架的影响

目的探讨多药耐药相关蛋白4（MRP4）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）通透性及细胞骨架的影响。方法PMVECs细胞株培养3至6代后随机分为4组，对照组（细胞不做任何处理）、LPS组（细胞仅接受LPS刺激）、shMRP4重组腺病毒组（Ad—shMRP4，将针对大鼠MRP4基因设计的短发夹RNA构建腺病毒载体上，通过腺病毒感染细胞＋LPS刺激）、shRNA重组腺病毒组（Ad—shRNA，带绿色荧光蛋白基因空白的重组腺病毒载体感染细胞＋LPS刺激）。通过荧光显微镜观察细胞感染率，Western botting检测MRPg的表达水平，Transwell小室法检测单层细胞通透性，激光共聚焦显微镜观察细胞内纤维肌动蛋白（F—actin）形态及分布情况。多组间差异采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD—t检验，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果与对照组比较，LPS组及Ad—shRNA组MRP4的表达水平显著上调（P〈0．05）、单层细胞通透性显著增加（2、6、12、24h分别为：0．28±0．02和0．41±0．04、0．32±0．02；0．30±0．01和0．53±0．04、0．39±0．03；0．33±0．04和1．12±0．17、0．70±0．07；0．32±0．03和0．79±0．02、0．57±0．05，P〈0．05），F-actin分布紊乱、重构以及应力纤维形成。与LPS组比较，Ad．shMRP4组MRP4的表达水平明显下调（P〈0．05）、单层细胞通透性明显降低（2、6、12、24h分别为：0．41±0．04和0．32±0．02；0．53±0.04和0．39±0．03；1．12±0．17和0．70±0.07；0．79±0．02和0．57±0．05，P〈0．05），F-actin重构以及应力纤维形成显著减少。结论MRP4基因沉默显著增减轻LPS诱导的内皮细胞通透性增高及细胞骨架破坏，对内皮细胞屏障发挥保护作用。

多药耐药相关蛋白4抑制剂对脓毒症急性肺损伤大鼠的保护作用

目的探讨多药耐药相关蛋白4（MRP4）抑制剂对脓毒症急性肺损伤（ALI）大鼠的保护作用。方法将60只雄性sD大鼠按随机数字表法分为假手术（Sham）组、脓毒症组及MRP4抑制剂MK571干预组，每组20只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）建立大鼠脓毒症模型，Sham组仅开腹不进行盲肠结扎和穿刺。MK571干预组于制模前30min腹腔注射20mg／kgMRP4抑制剂MK571，Sham组和脓毒症组给予等量生理盐水。于术后24h取大鼠股动脉血进行血气分析，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；取肺组织计算湿／干质量（W／D）比值，采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测MRP4蛋白表达。结果与Sham组相比，脓毒症大鼠动脉血pH值和动脉血氧分压（PaO：）显著降低[pH值：7．18±0．03比7．40±0．03，PaO，（mmHg，1mmHg=0．133kPa）：63．15±6．24比98．05±2．58]，而动脉血二氧化碳分压（PaCO：）明显升高（mmHg：56．60±8．30比37．85±3．18），血清TNF-α水平亦显著升高（ng／L：146．24±19．99比25．77±9．83）；肺组织W／D比值明显增加（7．75±0．47比4．09±0．58），MRP4蛋白表达显著上调（灰度值：0．153±0．006比0．087±0．005，均（P〈0．05）。与脓毒症组相比，MK571预处理后大鼠动脉血pH值（7．30±0．02比7．18±0．03）和PaO2水平（mmHg：80．30±5．34比63．15±6．24）显著升高，PaC02明显降低（mmHg：29．25±3．24比56．60±8．30），血清TNF-α水平显著降低（ng／L：97．96±16．72比146．24±19．99）；肺组织W／D比值明显减少（5．89±0．51比7．75±0．47），MRP4蛋白表达显著下调（灰度值：0．124±0．006比0．153±0．006，均P〈0．05）。结论MRP4抑制剂通过下调MRP4表达可明显改善脓毒症AI大鼠肺功能，降低炎性因子水平，从而对ALl大鼠起到保护作用。

茵栀黄颗粒对雌激素诱导的胆汁瘀积大鼠肝细胞膜多药耐药相关转运体Mrp1~4的调节作用

目的考察茵栀黄颗粒对胆汁瘀积大鼠肝脏转运体多药耐药相关蛋白1~4（Mrp1~4）表达的影响。方法 Wistar雄性大鼠20只,随机分为4组,即正常组、模型组、对照组和茵栀黄组,每组5只。大鼠颈部皮下连续注射苯甲酸雌二醇[EB,5 mg/（kg·d）]造模。Western blot实验考察茵栀黄颗粒对肝脏转运体Mrp1~4的调节作用。结果与对照组相比,茵栀黄组肝细胞膜转运体Mrp1~3的表达均显著增加（P〈0.05）,而Mrp4的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论茵栀黄颗粒能明显上调胆汁瘀积模型大鼠肝细胞膜转运体Mrp1~3的表达,但对Mrp4的表达无影响。

川西獐牙菜醇提物对大鼠胆汁酸转运蛋白Mrp4、转录因子Nrf2表达的影响

目的观察川西獐牙菜醇提物对肝细胞胆汁酸转运蛋白Mrp4(multidrug resistanceassociated protein 4,Mrp4)、转录因子Nrf2的调控作用。方法将14只SD大鼠分为2组:正常对照组、川西獐牙菜醇提物组,每组7只。分别用生理盐水、川西獐牙菜醇提物处理7 d后,收集组织标本,免疫组化检测Mrp3、Mrp4在肝脏的表达变化,Western blot及RT-PCR检测胆汁酸转运蛋白Mrp3、Mrp4和转录因子Nrf2、核受体Lrh-1在蛋白及mRNA水平的变化。结果在mRNA水平,RT-q PCR结果显示川西獐牙菜醇提物组肝脏胆汁酸转运蛋白Mrp4表达较正常对照组增加2.1倍,同时,Mrp3表达增加1.7,转录因子Nrf2表达增高1.8倍,核受体Lrh-1表达增高1.4倍;在蛋白水平,Western blot结果表明川西獐牙菜醇提物组肝脏胆汁酸转运蛋白Mrp4表达较正常对照组组增加2.5倍,同时,Mrp3表达增高3.0倍,转录因子Nrf2表达增高2.3倍,核受体Lrh-1表达增高1.3倍,而免疫荧光结果则进一步证实了RT-q PCR与Western blot的结果,显示川西獐牙菜醇提物组Mrp3、Mrp4的表达较正常对照组组明显增强。结论川西獐牙菜醇提物能够刺激肝细胞表面胆汁酸转运蛋白Mrp4表达增高,这种调控作用可能与Nrf2相关。

人多药耐药相关蛋白MRP4不同状态的分子模型（英文）

ATP结合盒(ABC)转运蛋白中的多药耐药相关蛋白MRP4与多药耐药性的产生有关。多药耐药性的产生对于抗肿瘤和抗感染的治疗是一个很大的挑战。在一些MRP4高表达的肿瘤中,抑制MRP4的作用对影响肿瘤的进程和药物的耐药性都有显著效果。由于MRP4的结构信息非常有限,缺少X-射线晶体结构,同源模建是获得MRP4三维结构的一种有效的方法。我们主要基于秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的P-gp,海栖热胞菌(Thermotoga maritima)的ABC转运蛋白TM287/288及金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的ABC转运蛋白Sav1866的结构分别建立了人MRP4的底物摄取态、底物转运态和底物释放态模型。模建的结构进一步进行能量最小化和分子动力学模拟优化,经过多种工具和服务器的验证证明了模建结构的合理性和可靠性。这些MRP4的结构可以用来研究MRP4结构和功能的关系,以及设计特定的膜转运蛋白调节剂(MTMA)。

人MRP4蛋白结构与功能预测

多药耐药相关蛋白4(multidrug resistance-associated protein 4,MRP4)是一种能够利用ATP水解产生的能量转运多种物质的六重跨膜蛋白。本研究应用Expasy、Jpred4、UniProt-KB、NCBI等公共数据库和在线软件分析其理化性质、蛋白结构、结构域、亚细胞定位、互作蛋白以及功能等信息,为其在多种生理病理过程中的作用与机制研究奠定基础。MRP4蛋白含有1325个氨基酸,相对分子质量约为149526.77,理论等电点为8.41。以α-螺旋为主,占比58.42%。含有2个跨膜结构域和2个ATP结合盒以及8个保守结构域。表观遗传学修饰位点56个,其中磷酸化位点27个,泛素化位点27个,乙酰化位点2个。MRP4蛋白分布于质膜上,具有ATP酶和跨膜转运蛋白活性,参与内外源性物质运输、前列腺素分泌、纤毛组装、信号转导运输等生命过程。本研究系统性梳理并整合了MRP4蛋白结构及功能等信息,为深入研究其在机体生命活动及疾病发生中的作用与机制奠定理论依据。

ABCC4/MRP4和ABCC5/MRP5基因在NK/T细胞淋巴瘤的表达及与临床疗效的关系

背景与目的:NK/T细胞淋巴瘤(natural killer/T cell lymphoma)疗效差,多药耐药(multidrug resistance,MDR)的产生是引起肿瘤产生耐药和化疗疗效降低及失败的原因之一,本文通过研究多药耐药相关蛋白4(ABCC4 multidrug resistance associated protein,ABCC4/MRP)基因和多药耐药相关蛋白5(ABCC5 multidrug resistance associated protein,ABCC5/MRP)基因在NK/T细胞淋巴瘤SNK-6、YTS细胞株和组织中的表达情况,结合临床疗效了解其与预后的关系。方法:应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)技术和免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测ABCC4/MRP4、ABCC5/MRP5基因mRNA和蛋白表达水平。结果:与正常NK细胞相比,ABCC4/MRP4、ABCC5/MRP5基因在SNK-6、YTS细胞株中高表达(P<0.05);与鼻炎组织相比,ABCC4/MRP4、ABCC5/MRP5基因在NK/T细胞淋巴瘤患者组织中高表达(P<0.05);ABCC4/MRP4、ABCC5/MRP5基因表达量的高低和临床疗效呈负相关(P<0.05)。结论:ABCC4/MRP4、ABCC5/MRP5基因及其表达蛋白影响NK/T细胞淋巴瘤的疗效。

高原缺氧对血脑屏障中ATP-结合盒转运蛋白表达的影响

目的研究高原缺氧对血脑屏障(BBB)中ATP-结合盒(ABC)转运蛋白表达的影响,并探讨影响其表达的机制。方法将Wistar大鼠分为1500 m组(兰州实地)、4010 m组(模拟,低压氧舱,缺氧3 d)、6000 m组(模拟,低压氧舱,缺氧3 d)、苯妥英钠+1500 m组(在1500 m组基础上给予50 mg·kg^(-1)苯妥英钠)、苯妥英钠+4010 m组(在4010 m组基础上给予50 mg·kg^(-1)苯妥英钠)、苯妥英钠+6000 m组(在6000 m组基础上给予50 mg·kg^(-1)苯妥英钠)和缺氧1 d组、缺氧2 d组、缺氧3 d组、缺氧4 d组(模拟海拔4010 m,低氧氧舱,分别缺氧1、2、3和4 d)。用蛋白质印迹法检测BBB组织蛋白的表达水平,用高效液相色谱联用质谱法检测脑脊液苯妥英钠的浓度。结果1500 m、4010 m、6000 m组的P-糖蛋白(P-gp)蛋白相对表达水平分别为1.00±0.04、1.84±0.02和2.10±0.05,多药耐药相关蛋白-4(MRP4)蛋白相对表达水平分别为1.00±0.05、2.77±0.08和4.42±0.03,苯妥英钠在脑脊液中的浓度为(864.78±348.32)、(1000.22±273.90)和(1214.17±314.09)ng·mL^(-1)。1500 m组、4010 m组上述指标和6000 m组相比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。缺氧1 d组、缺氧2 d组、缺氧3 d组、缺氧4 d组P-gp蛋白相对表达水平分别为1.00±0.03、1.85±0.04、3.10±0.02和2.17±0.05,MRP4蛋白相对表达水平分别为1.00±0.05、1.79±0.10、1.60±0.08和1.31±0.06,缺氧1 d组、缺氧2 d组、缺氧3 d组上述指标和缺氧4 d组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论不同的高原缺氧环境对BBB中ABC族转运蛋白的表达产生不同的影响,并影响其底物药物在体内的药物浓度。

MRP4基因型与炎症性肠病患者6-硫鸟苷酸浓度、不良反应的相关性研究

目的考察多药耐药相关蛋白4(MRP4)的单核苷酸多态性(SNP)T-1393C和C934A与炎症性肠病(IBD)患者服用硫嘌呤类药物后的活性代谢产物6-硫鸟苷酸(6-TGNs)浓度及药物不良反应之间的相关性。方法共97名单独服用硫唑嘌呤(AZA)或6-巯基嘌呤(6-MP)的IBD患者纳入研究,收集全血提取DNA,用聚合酶链反应-直接测序法进行MRP4 T-1393C和C934A基因型分析;分析MRP4基因型与6-TGNs浓度及不良反应的相关性。结果相同剂量下,MRP4-1393突变型(TC/CC型)患者服用AZA或6-MP后发生不良反应的风险显著高于MRP4-1393野生型(TT型)患者(OR=2.55,95%CI:0.94～6.90),尤其是发生骨髓抑制的风险TC/CC型显著高于TT型(OR=11.20,95%CI:1.18～106.26)。结论 MRP4-1393 T>C突变与药物不良反应高发生率密切相关,该基因型检测将有助于指导硫嘌呤药物的个体化应用。

栀子水提物对雌激素诱导的胆汁淤积大鼠中硫酸化胆酸盐的影响及机制研究

目的考察栀子水提物对雌激素诱导的胆汁淤积大鼠肝脏、血液、粪便、尿液中硫酸化胆酸盐的影响及其机制。方法Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和栀子组。采用炔雌醇(5 mg·kg^-1)皮下连续注射5 d造肝内胆汁淤积模型,并于造模的同时灌胃给予栀子水提物(120 mg·kg^-1,每天2次)7 d。实验结束后,测定尿液、粪便、血液及肝脏组织中硫酸化胆酸盐含量并考察肝脏及肾脏中Sult2a1、Mrp2和Mrp4的表达量。结果栀子水提物能缓解肝脏病变,增加肝脏、血液、尿液、粪便硫酸化胆酸盐的含量(P<0.05)及肝脏Sult2a1、Mrp2、Mrp4和肾脏Sult2a1、Mrp4的表达(P<0.05)。结论栀子水提物通过调控肝肾Sult2a1、Mrp2和Mrp4的表达,加速胆酸盐的肝脏和肾脏硫酸化转化及排泄,缓解了雌激素诱导的大鼠肝内胆汁淤积。

茵陈蒿汤及其不同组方提取物对雌激素诱导胆汁淤积大鼠的治疗作用及机制研究

目的:基于肝细胞膜转运体多药耐药相关蛋白1~4(multidrug resistant associated protein1~4,Mrp1~4)、Na+依赖性牛磺胆酸共转运多肽(Na+-taurocholate co-transporting polypeptide,Ntcp),探讨茵陈蒿汤及其不同组方提取物对胆汁淤积大鼠的治疗作用。方法:30只Wistar雄性大鼠随机分为6组,即正常组、对照组、茵陈组、茵陈栀子组、茵陈大黄组、茵陈蒿汤组;采用皮下连续注射苯甲酸雌二醇(estradio benzoate,EB,5 mg·kg^(-1)·d^(-1))5 d制备胆汁淤积大鼠模型。茵陈组、茵陈栀子组、茵陈大黄组、茵陈蒿汤组分别灌胃给予茵陈(0.43 g·kg^(-1)·d^(-1))、茵陈栀子(1.08 g·kg^(-1)·d^(-1))、茵陈大黄(1.09 g·kg^(-1)·d^(-1))、茵陈蒿汤(1.69 g·kg^(-1)·d^(-1))提取物14 d。干预结束后,测定各组大鼠胆汁流速,血清生化及肝脏病理,并采用Western blot检测肝组织中Mrp1~4和Ntcp的表达。结果:茵陈蒿汤及不同配伍组干预14 d后,胆汁流速均显著升高,血清生化与肝脏病理较对照组均有明显改善;与对照组相比,茵陈组、茵陈栀子组、茵陈大黄组及茵陈蒿汤组Mrp2、Mrp3、Ntcp的表达均升高;Mrp4的表达均降低;此外,茵陈栀子组Mrp1的表达降低。结论:茵陈蒿汤及其不同组方提取物对雌激素诱导的大鼠胆汁淤积均有治疗作用;其疗效可能与调控转运体Mrp1-4和Ntcp的表达相关,且不同组方提取物对Mrp1~4和Ntcp的调控作用不同。