蛋白激酶CK2及其抑制剂在肿瘤多药耐药中的研究进展

肿瘤耐药性是临床上化疗失败的主要原因之一。蛋白激酶CK2是一种高度保守、具有广泛生物学活性的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,可磷酸化数百种底物。CK2的激活及过表达在肿瘤发生、发展及耐药过程中起到重要作用,并且CK2通过多种机制和信号通路参与耐药细胞中药物的外排、DNA损伤修复以及药物逃逸反应等,并调控耐药细胞中分子伴侣的活性。本研究主要对蛋白激酶CK2的结构功能及其在肿瘤多药耐药中的作用机制进行综述,并对CK2抑制剂在血液系统肿瘤、乳腺癌、胃癌、肺癌等多种实体瘤中的应用进行了探讨,为临床上开发新的肿瘤耐药分子标志物以及肿瘤的靶向治疗提供新的思路和治疗方案。

尿蛋白酶抑制剂治疗耐多药肺结核效果及对患者免疫状态、氧化应激的影响

目的:探讨尿蛋白酶抑制剂治疗耐多药肺结核(MDR-TB)的临床效果。方法:对两组MDR-TB患者(观察组及对照组各47例)实施个体化背景治疗方案,观察组在此基础上予以乌司他丁静脉滴注,每次10万U,每日3次,连续用药7d。治疗6个月比较两组痰菌转阴率、病灶吸收情况、空洞变化情况,并比较两组治疗前后外周血CD3+、CD4+含量、CD4+/CD8+、血清白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、降钙素原(PCT)、血清总氧化态(TOS)、总抗氧化态(TAS)水平和氧化应激指数(OSI),比较两组不良反应发生情况。结果:治疗后观察组痰菌转阴率高于对照组(P<0.05),病灶吸收情况和空洞变化情况均优于对照组(均P<0.05);外周血CD3+、CD4+含量、CD4+/CD8+高于对照组(均P<0.01),血清IL-10、TGF-β1、PCT、TOS水平、OSI均低于对照组(均P<0.01),血清TAS水平高于对照组(P<0.01),两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:尿蛋白酶抑制剂可改善机体免疫功能,减轻氧化应激损伤,提高痰菌清除率,促进病灶吸收,治疗MDR-TB效果确切,安全性好。

热休克蛋白90抑制剂17-AAG对K562/ADR耐药细胞株生长和凋亡的影响

目的研究热休克蛋白90抑制剂17-AAG对耐药白血病细胞生长的影响及其诱导的细胞凋亡作用,为白血病的治疗提供新的研究思路。方法采用MTT法检测17-AAG对细胞增殖抑制的剂量-时间-效应关系;激光共聚焦DA-PI染色法观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡、周期及P-糖蛋白(P-gp)的变化,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的变化。结果 17-AAG能够明显抑制K562/ADR细胞的生长,大量细胞的核内DNA发生断裂,细胞核边缘化,加药组细胞凋亡率与对照组相比明显增高;加药后细胞被阻滞在G1期,procaspase-3和cleaved Caspase-3表达升高。结论 17-AAG可以通过诱导耐药细胞株K562/ADR的凋亡而抑制细胞生长。P-gp和Caspase-3的表达与凋亡事件的发生具有一定的相关性。

酪氨酸激酶抑制剂在分子靶向治疗中对耐药非小细胞肺癌患者角蛋白、PAX-8及DNA EGFR基因T790M突变的影响

目的探讨表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)在分子靶向治疗中对耐药非小细胞肺癌(NSCLC)患者角蛋白、配对盒基因8(PAX-8)及对血浆中EGFR基因耐药位点T790M突变的影响。方法回顾性选取2018年1月至2019年1月延安市人民医院收治的52例耐药NSCLC患者作为研究对象,均予以EGFR-TKIs治疗。分析两组患者的近期疗效;分析患者治疗前后临床特征和CK、PAX-8阳性表达的分布;复发转移及CK、PAX-8表达的关系;比较治疗前后的EGFR基因耐药位点T790M突变情况;比较CK、PAX-8表达及T790M突变与术后生存时间。结果NSCLC患者治疗4周时的有效率、稳定率分别为59.62%、88.46%,高于治疗1周时(26.92%、75.00%),差异均有统计学意义(P<0.05)。NSCLC患者治疗4周时的CK、PAX-8阳性表达率分别为17.31%、21.15%,显著低于治疗前(40.38%、63.46%),差异均有统计学意义(P<0.05)。淋巴结上的CK、PAX-8阳性表发复发转移率分别为61.90%、72.73%,较阴性表达(35.48%、36.84%)均显著偏高,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗4周时血浆中的EGFR基因耐药位点T790M突变率为13.46%,显著低于治疗前(69.23%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后5年总生存率为65.38%(34/52),CK、PAX-8及T790M阳性表达者的生存率均显著低于阴性者。结论耐药NSCLC患者的CK、PAX-8及DNA EGFR基因耐药位点T790M阳性表达越高预后效果越差,针对这3项指标的具体阳性表达情况科学、合理的予以EGFR-TKIs治疗可有效地降低CK、PAX-8阳性表达及DNA EGFR基因耐药位点T790M变异,有较好的临床应用与推广价值。

CDK4/6抑制剂在HR^(+)晚期乳腺癌治疗中的耐药机制及进展后治疗策略

细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(CDK4/6)抑制剂联合内分泌治疗已成为激素受体阳性(HR^(+))、人类表皮生长因子受体-2阴性(HER2^(-))乳腺癌患者的晚期一线及二线标准治疗方案。尽管CDK4/6抑制剂可实现有效的疾病控制,但对于晚期乳腺癌患者最终仍会因耐药出现疾病进展。目前CDK4/6抑制剂相关耐药机制尚不完全清楚,同时治疗失败后的最佳治疗策略仍是一个亟待解决的问题。本文就CDK4/6抑制剂的潜在耐药机制和后续治疗策略的最新研究进展做一综述。

P-糖蛋白抑制剂HZ08对裸鼠体内肿瘤多药耐药逆转以及对大鼠肝P450酶影响(英文)

目的:考察P-糖蛋白抑制剂HZ08对K562/ADM接种裸鼠体内肿瘤多药耐药的逆转作用及HZ08对大鼠肝P450酶亚型的影响。方法:K562/ADM接种的裸鼠尾静脉注射HZ08和阿霉素4周,与对照组和阳性药组比较瘤重;HZ08与CYP450亚型特异性底物在大鼠肝微粒体中温孵,与对照组比较测定HZ08对于CYP450亚型的影响。结果:HZ08可显著减小裸鼠体内的瘤重,并对大鼠肝微粒体CYP3A4有较弱的抑制作用,对其他P450酶亚型无显著抑制作用。结论:HZ08在裸鼠体内具有较好的逆转P-糖蛋白介导的肿瘤多药耐药的作用,并且在体外实验中对P450酶具有较小的影响。

慢性丙型肝炎患者NS3/4A蛋白酶抑制剂预存耐药的临床研究

【目的】了解我国华南地区从未接受任何抗病毒治疗的慢性丙型肝炎(慢丙肝)患者NS3/4A蛋白酶抑制剂相关耐药位点的流行情况、临床特点包括其对干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗的影响。【方法】在接受抗病毒治疗前对183例慢丙肝患者的NS3/4A蛋白酶抑制剂相关的耐药位点采用自行设计型别特异性引物行巢式PCR,PCR产物纯化后直接测序法鉴定,有变异的患者为变异组(125例),无变异的患者为野生组(37例),对两组患者的临床资料包括干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗后的持续病毒应答率等进行分析。【结果】183例患者中162例患者样本的NS3区扩增成功,其中125例(77.16%)患者检出耐药相关的变异位点266个,其中HCV 1b型A156S变异率为18.33%(11/60),T54S为5.00%(3/60);HCV 2a型V36L变异率为100.00%(14/14),A156S为64.29%(9/14);HCV 6a型Q80K变异率为95.45%(84/88),V36L为4.55%(4/88),D168E为2.27%(2/88),变异组患者经干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗后的持续病毒性应答率为81.60%(102/125),而野生组的为81.03%(30/37),两者比较无明显差异(P=0.943)。【结论】我国不同基因型的慢丙肝患者对NS3/4A蛋白酶抑制剂存在不同的预存耐药,耐药变异对慢丙肝患者疾病状态包括干扰素联合利巴韦林的疗效无影响。预存耐药的存在警示我们未来在使用此类药物时需分析病毒基因型及预存耐药变异情况,从而为患者提供最好的病毒学监测及最优的治疗方案。

泛素-蛋白酶体系统在非小细胞肺癌表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂继发性耐药中的作用

目的探讨泛素-蛋白酶体系统(UPS)在非小细胞肺癌表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)继发性耐药中的作用及机制。方法选取经病理证实肺腺癌患者98例,其中49例患者存在EGFR基因敏感突变且EGFR-TKI治疗敏感,采集其组织标本作为EGFR-TKI敏感组(n=49),另49例患者行EGFR-TKI治疗出现获得性耐药,采集其组织标本作为EGFR-TKI耐药组(n=49)。应用连续荧光监测法检测两组组织标本中UPS标志物CT-L的活性;分别从基因及蛋白水平检测UPS标志物-蛋白酶体亚基蛋白酶体亚基C2及mTOR的表达。结果 EGFR-TKI耐药组CT-L活性显著高于EGFR-TKI敏感组,差异有显著性(P<0.05);免疫组化检测蛋白酶体亚基C2在EGFR-TKI耐药组的阳性率为73.5%,显著高于EGFR-TK1敏感组的19.7%(P<0.05);mTOR的表达在EGFR-TKI耐药组的阳性率为77.6%,显著高于EGFR-TKI敏感组的25.6%(P<0.05);蛋白酶体亚基C2与mTOR的表达呈正相关(r_s=0.8)。结论 UPS在肺腺癌EGFR-TKI耐药过程中发挥重要作用,其作用与mTOR的增高相关,为逆转耐药和个体化治疗提供了新思路。

神经钙调蛋白抑制剂、环磷酰胺治疗儿童激素耐药型肾病综合征疗效差异的系统评价

目的系统评价神经钙调蛋白抑制剂(CNI)、环磷酰胺(CTX)治疗儿童激素耐药型肾病综合征疗效的差异。方法检索Pubmed数据库和CNKI、万方数据库、维普数据库中有关CNI(环孢素A或者他克莫司)、CTX治疗儿童激素耐药型肾病综合征疗效差异的随机对照研究。由两位独立的研究者对入选的文献按纳入标准和排除标准进行筛选,并评价文献质量。提取纳入文献中儿童激素耐药型肾病综合征患者的治疗方案、治疗6个月时的有效(完全缓解+部分缓解)率和完全缓解率。其中采用CNI治疗者为CNI组,CTX治疗者为CTX组。采用Reviewer Manager5.2软件比较CNI、CTX组治疗6个月时的有效率、完全缓解率。对纳入研究的文献数据进行异质性检验,I^2<40%表示各研究之间无显著异质性。结果共检索到67篇文献,根据纳入和排除标准最终11篇文献纳入本研究,共912例患者,其中CNI组497例、CTX组415例。随访6个月时,CNI组56例、CTX组49例失访。治疗6个月时CNI组、CTX组有效率分别为81.2%(358/441)、41.3%(151/366),CNI组有效率高于CTX组(RR为2.13,95%CI为1.64~2.78,I^2=32%,P<0.05);治疗6个月时CNI组、CTX组完全缓解率分别为45.1%(199/441)、13.1%(48/366),CNI组完全缓解率高于CTX组(RR为2.63,95%CI为1.47~3.80,I^2=17%,P<0.05)。结论 CNI治疗儿童激素耐药型肾病综合征的疗效优于CTX。

埃博霉素类药物在治疗非小细胞肺癌方面研究进展:抗紫杉醇耐药有效的新颖微管蛋白抑制剂

治疗非小细胞肺癌需要引进新型的药物来提高现有疗法，有针对性的治疗为患者带来收益。埃博霉素类药物是由纤维堆囊菌衍生的新颖药物，具有抗微管蛋白机制，阻断肿瘤细胞的正常分裂，

胰岛素样生长因子1受体抑制剂对甲磺酸伊马替尼继发耐药性胃肠道间质瘤细胞增殖及蛋白激酶B蛋白磷酸化的影响

目的探讨胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)抑制剂AG-1024对甲磺酸伊马替尼继发耐药性胃肠道间质瘤(GIST)细胞增殖及蛋白激酶B(Akt)蛋白磷酸化的影响。方法采用甲磺酸伊马替尼诱导GIST-T1细胞以建立继发耐药性细胞系。将继发耐药性GIST-T1细胞分为对照组(0μmol/L AG-1024)以及5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L AG-1024组,给予相应浓度AG-1024干预12 h、24 h、48 h后,检测细胞增殖情况。将继发耐药性GIST-T1细胞分为AG-102412 h组、AG-102424 h组、AG-102448 h组和对照组,各AG-1024组加入10μmol/L AG-1024干预相应的时间,对照组加入等体积的二甲亚砜(干预即刻收集细胞),检测各组细胞Akt蛋白、磷酸化Akt蛋白表达水平。结果(1)各浓度AG-1024组的吸光度值呈下降趋势;同一时间点,各浓度AG-1024组的吸光度值均低于对照组,且10μmol/L AG-1024组与20μmol/L AG-1024组的吸光度值低于5μmol/L AG-1024组(均P<0.05),但10μmol/L AG-1024组与20μmol/L AG-1024组差异无统计学意义(P>0.05)。(2)AG-102412 h组、AG-102424 h组、AG-102448 h组和对照组Akt蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);对照组、AG-102412 h组、AG-102424 h组、AG-102448 h组细胞磷酸化Akt蛋白表达水平依次降低(均P<0.05)。结论IGF-1R抑制剂AG-1024可抑制甲磺酸伊马替尼继发耐药性GIST-T1细胞的增殖,且呈一定的时间依赖性,抑制磷脂酰肌醇3-激酶/Akt信号通路中Akt的磷酸化可能是其作用机制之一。

蛋白酶体抑制剂逆转肿瘤多药耐药的研究进展

肿瘤多药耐药是肿瘤治愈的主要障碍之一。肿瘤细胞对抗癌药物诱导的凋亡的耐受是多药耐药形成的重要原因。蛋白酶体抑制剂可选择性地促进肿瘤细胞凋亡,逆转多药耐药。蛋白酶体被认为是肿瘤治疗的新靶点。

多药耐药糖蛋白p-glycoprotein及其抑制剂的研究进展

多药耐药是肿瘤化疗失败的主要原因之一,以p-glycoprotein(p-gp)的过度表达为主要特征,可将肿瘤细胞内的化疗药物排出胞外,导致化疗效果降低,从而使肿瘤细胞产生耐药性。抑制p-gp外排药物可以提高化疗药物杀伤肿瘤细胞的作用,对提高化疗效果具有重要意义。多药耐药糖蛋白抑制剂的发展经历了三代,并日趋完善,在化疗中起着重要作用,但仍需改进。本文对多药耐药糖蛋白p-gp及其抑制剂的研究进展作一综述。

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398抑制多药耐药细胞株P-糖蛋白表达

目的:探讨选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂NS-398对多药耐药细胞株K562/ADM细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响。方法:K562/ADM细胞经浓度分别为10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L的NS-398处理,24h、48h、72h后用RT-PCR法检测MDR1mRNA的表达、用流式细胞仪检测mdr1蛋白表达。结果:随着NS-398浓度的升高以及作用时间延长,MDR1mRNA、p-gp表达降低,不同浓度的药物与测量时间之间存在着交互作用(P<0.05)。结论:选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398可抑制K562/ADM细胞的MDR1/P-gp表达。

姜黄素乳剂对联合化疗诱导的小鼠S_(180)肿瘤细胞多药耐药相关耐药蛋白表达的影响

目的:探讨姜黄素对化疗诱导的肿瘤多药耐药干预的分子生物学基础。方法:对S180荷瘤小鼠以亚于治疗剂量的联合化疗,同时给予姜黄素乳剂4周,流式细胞仪荧光检测肿瘤细胞耐药蛋白P170、LRP和TOPOII。结果:姜黄素乳剂明显降低化疗诱导后耐药细胞P170、LRP的表达率和TOPOII活性。结论:姜黄素是通过对于相关耐药蛋白的调节,干预化疗诱发的肿瘤细胞多药耐药的产生。

Src酪氨酸激酶抑制剂逆转人胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP的作用及机制

目的探讨Src酪氨酸激酶抑制剂逆转人胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP的作用及机制。方法以Src酪氨酸激酶抑制剂逆转前后的人胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP为研究对象,应用Western blot观察细胞内p-Src表达的变化,MTS法检测细胞的药物敏感性,流式细胞仪检测细胞Rh123外排及P-gp表达的水平。结果 Src酪氨酸激酶抑制剂可下调SGC7901/DDP细胞中p-Src表达,在5μmol/L及10μmol/L Src酪氨酸激酶抑制剂作用下,SGC7901/DDP细胞对顺铂的药物敏感性分别提高了1.52倍和3.96倍,细胞中Rh123含量分别提高了1.24倍和2.64倍,P-gp表达水平分别降低了65.8%和47.4%。结论 Src酪氨酸激酶抑制剂可逆转SGC7901/DDP细胞多药耐药性,其耐药表型的逆转可能与降低细胞Rh123外排及P-gp表达水平有关。

多药耐药蛋白1和多药耐药相关蛋白5、7在糖尿病小鼠视网膜中表达的变化

目的观察多药耐药蛋白1(multidrug resistance 1,MDR1)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)5和MRP7在不同时期糖尿病小鼠视网膜中的表达变化。方法通过腹腔注射链脲佐菌素诱导C57BL/6小鼠建立糖尿病模型,伊文思蓝灌注检测血-视网膜内屏障变化。分别于糖尿病造模成功后的4周、12周和24周取小鼠视网膜,进行实时定量-PCR、免疫荧光、Western blotting等实验,检测各组小鼠视网膜中MDR1、MRP5和MRP7的表达变化。结果伊文思蓝灌注结果显示在糖尿病12周就出现视网膜渗漏;实时定量-PCR结果发现与对照组相比,随糖尿病进展,MDR1、MRP5和MRP7在4周、12周和24周的表达均呈下降趋势(MDR1:P_(4周)=0.028,P_(12周)=0.003,P_(24周)<0.001;MRP5:P_(4周)=0.045,P_(12周)=0.009,P_(24周)<0.001;MRP7:P_(4周)=0.019,P12周<0.001,P24周=0.001),在糖尿病不同时期其变化也呈下降趋势(均为P<0.05);免疫荧光观察到MDR1、MRP5和MRP7的荧光强度随糖尿病发展逐渐减弱;Western blotting检测可见在4周、12周、24周糖尿病小鼠视网膜中MDR1、MRP5和MRP7的表达均呈下降趋势。结论在DR早期血-视网膜内屏障会受到破坏,视网膜中外排转运蛋白的表达也会受糖尿病的影响导致不同程度的下降。