蛋白激酶CK2及其抑制剂在肿瘤多药耐药中的研究进展

肿瘤耐药性是临床上化疗失败的主要原因之一。蛋白激酶CK2是一种高度保守、具有广泛生物学活性的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,可磷酸化数百种底物。CK2的激活及过表达在肿瘤发生、发展及耐药过程中起到重要作用,并且CK2通过多种机制和信号通路参与耐药细胞中药物的外排、DNA损伤修复以及药物逃逸反应等,并调控耐药细胞中分子伴侣的活性。本研究主要对蛋白激酶CK2的结构功能及其在肿瘤多药耐药中的作用机制进行综述,并对CK2抑制剂在血液系统肿瘤、乳腺癌、胃癌、肺癌等多种实体瘤中的应用进行了探讨,为临床上开发新的肿瘤耐药分子标志物以及肿瘤的靶向治疗提供新的思路和治疗方案。

益气解毒中药联合靶向药物治疗Her-2阳性晚期乳腺癌疗效及对免疫功能和多重耐药相关蛋白水平的影响

目的观察益气解毒中药联合靶向药物治疗Her-2阳性晚期乳腺癌术后患者疗效及对免疫功能、多重耐药相关蛋白水平的影响。方法将130例Her-2阳性晚期乳腺癌术后患者随机分为2组,对照组65例给予靶向药物治疗,观察组65例在此基础上加用益气解毒中药治疗,观察2组治疗前后中医证候积分、FACT-B量表评分、T淋巴细胞亚群水平、免疫球蛋白水平及多重耐药相关蛋白水平变化情况,统计2组近期疗效和不良反应发生情况。结果治疗后2组气短、乏力、神疲、刺痛且痛有定处、脉络瘀血、皮下瘀斑积分及FACT-B量表评分均显著低于治疗前(P均<0.05),且观察组治疗后各项积分均显著低于对照组(P均<0.05)。治疗后对照组CD4^+、CD4^+/CD8^+及免疫球蛋白水平显著降低而CD8^+和多重耐药蛋白水平显著升高(P均<0.05),观察组CD4^+、CD4^+/CD8^+及免疫球蛋白水平显著升高而CD8^+和多重耐药蛋白水平显著降低(P均<0.05),且观察组各项指标均较对照组显著改善(P均<0.05)。观察组近期治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05),不良反应发生率显著低于对照组(P<0.05)。结论益气解毒中药联合靶向药物治疗Her-2阳性晚期乳腺癌可有效缓解临床症状,提高生活质量,改善免疫系统功能,下调多重耐药相关蛋白水平,且安全。

C反应蛋白与白蛋白比值、血管生成素-2、晚期糖基化终末产物受体与碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌感染患者病情转归的相关性及意义

目的探讨C反应蛋白(CRP)与白蛋白(ALB)比值(CRP/ALB)、血管生成素-2(Ang-2)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)与碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌(CRE)感染患者病情转归的相关性及意义。方法选择2020年1月至2023年5月陕西省森林工业职工医院收治的103例重症及长时间反复住院CRE感染患者为研究对象,根据患者28 d内转归不同分为转归不良组(n=23)和转归良好组(n=80)。通过查阅电子医疗记录系统收集患者的临床资料,包括:年龄、性别、体质量指数、病史、感染菌种、体温、是否行有创机械通气、是否合并感染性休克等。应用全自动电化学发光免疫分析仪检测患者血清CRP水平,应用全自动生化分析仪检测ALB水平,计算CRP/ALB;应用多功能酶标仪检测血清Ang-2、RAGE水平。比较2组患者临床资料及治疗前、治疗3 d和治疗7 d后CRP/ALB、Ang-2、RAGE水平,应用Cox回归分析CRE感染患者病情转归的相关影响因素,受试者操作特征曲线分析治疗前CRP/ALB、Ang-2、RAGE预测CRE感染患者病情转归价值,卡普兰-迈耶曲线(K-M)分析不同CRP/ALB、Ang-2、RAGE水平患者28 d的预后情况。结果转归不良组行有创机械通气、合并感染性休克患者占比显著高于转归良好组(P<0.05)。转归良好组患者治疗3 d和7 d后CRP/ALB、Ang-2、RAGE显著低于治疗前,且治疗7 d后较治疗3 d后显著降低(P<0.05);转归不良组患者各时间点CRP/ALB、Ang-2、RAGE比较差异均无统计学意义(P>0.05);治疗3、7 d后,转归不良组患者CRP/ALB、Ang-2、RAGE显著高于转归良好组(P<0.05)。行有创机械通气、合并感染性休克、CRP/ALB升高、Ang-2升高、RAGE升高是影响CRE病情转归的独立危险因素(P<0.05)。治疗7 d后CRP/ALB+Ang-2+RAGE预测病情转归的曲线下曲积最大(0.931),敏感度为86.96%,特异度为88.75%。CRP/ALB、Ang-2、RAGE高表达组患者生存率显著低于低表达组(P<0.05)。结论CRP/ALB、Ang-2、RAGE与CRE感染患者病情转归有关,联合检测可作为患者病情转归的一个早期预测方案,为临床分层管理提供精准量化的指导信息。

肺癌组织中耐药相关蛋白和p53 bcl-2表达及其意义

目的:探讨肺癌组织中耐药相关蛋白和p53、bcl-2表达及其意义。方法:应用免疫组化技术检测治疗前73例肺癌组织标本中P-gp、MRP、LRP、GST-π、p53和bcl-2表达。结果:非小细胞肺癌组P-gp、LRP、MRP+LRP、P-gp+p53的蛋白表达明显高于小细胞肺癌组(P<0.05)。腺癌组MRP、LRP、MRP+LRP、MRP+LRP+GST-π、MRP+LRP+P-gp+GST-π蛋白阳性表达高于鳞状细胞癌组、小细胞肺癌组(P<0.05),MRP+GST-π共表达者高于鳞状细胞癌组(P<0.01),P-gp+p53共表达者高于小细胞肺癌组(P<0.05),bcl-2蛋白阳性表达低于鳞状细胞癌组、小细胞肺癌组(P<0.05)。鳞状细胞癌组P-gp、P-gp+p53、P-gp+bcl-2的蛋白表达明显高于小细胞肺癌组(P<0.05)。P-gp与p53、bcl-2蛋白阳性表达呈正相关(P<0.05)。p53与bcl-2蛋白阳性表达呈正相关(P<0.01)。MRP与GST-π蛋白阳性表达呈正相关(P<0.05)。结论:肺癌耐药为一多途径多基因参与的过程,P-gp、LRP、MRP、GST-π、p53、bcl-2表达及其共表达可作为监测肺癌细胞原发性耐药的指标。

补骨脂素对乳腺癌多药耐药细胞株Bcl-2基因蛋白表达的影响

目的 :研究补骨脂素对乳腺癌多药耐药细胞株Bcl 2基因蛋白表达的影响。方法 :选用PBS缓冲液为空白对照组 ,观察Bcl 2在MCF 7/ADR耐药细胞中的表达 ;将无明显细胞毒作用范围内 ( 1～ 2 0 μmol/L补骨脂素按浓度梯度加入MCF 7/ADR耐药细胞中计算Bcl 2阳性指数。结果 :补骨脂素在非细胞毒性剂量下能使MCF 7/ADR细胞Bcl 2表达降低 ,呈剂量依赖性。结论 :补骨脂素能抑制MCF 7多药耐药细胞株Bcl

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制——耐药株外膜蛋白OprD_2缺失

目的;研究铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法:以亚胺培南为代表,应用十二烷酸磺酸钠－聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDS-PAGE)外膜蛋白图谱、凝胶分光光度扫描分析方法,分别研究临床分离的铜绿假单胞菌亚胺培南耐药株和亚胺培南敏感株。结果:耐药组OprD2相对含量显著低于敏感组。结论:OprD2的缺失是铜绿假单胞菌对以亚胺培南为代表碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。

人参皂甙Rh_2对耐药乳腺癌细胞P-糖蛋白和基质金属蛋白酶及其诱导物表达的影响

目的观察人参皂甙Rh2对人乳腺癌MCF7/Adr细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、基质金属蛋白酶诱导物(extracel-lular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)和基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinases1,MMP1)、MMP2、MMP9表达的影响。方法采用MTT比色法检测药物对MCF7/Adr细胞的毒性作用;流式细胞仪测定细胞内阿霉素(adriamycin,ADM)的荧光强度;Real time RT-PCR和Western blot检测细胞P-gp、EMMPRIN、MMP1、MMP2和MMP9mRNA和蛋白水平的变化。结果 ADM组与对照组相比,ADM能上调细胞P-gp、EMMPRIN、MMP1、MMP2和MMP9蛋白表达;人参皂甙Rh2能抑制ADM对细胞P-gp、EMMPRIN、MMP1、MMP2和MMP9蛋白和mRNA水平的上调作用。结论人参皂甙Rh2可以有效逆转乳腺癌细胞耐药细胞系MCF7/ADM的耐药性。

维生素K2调节YAP/TAZ信号通路对胆管癌细胞化疗耐药性的影响

目的:探究维生素K2(VK2)调节Yes相关蛋白(YAP)/PDZ结合基序转录共激活子(TAZ)信号通路对胆管癌(CCA)细胞化疗耐药性的影响。方法:将QBC939细胞设为对照组(Control组,空白培养基处理),QBC939/ADM细胞随机分为5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药组、低浓度VK2组、中浓度VK2组、高浓度VK2组、高浓度VK2+YAP激活剂JASP组。CCK-8法检测细胞增殖能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。流式细胞术检测细胞凋亡。采用Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase3和YAP/TAZ信号通路相关蛋白表达。结果:与Control组相比,5-FU组细胞OD450值(48 h、72 h)、细胞迁移率、细胞侵袭数目、细胞YAP、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著上升(P<0.05),细胞凋亡率、细胞Bax、Caspase-3蛋白表达显著下降(P<0.05)。与5-FU组相比,VK2-M组、VK2-H组细胞的相应指标变化与上述相反(P<0.05)。JASP减弱了VK2逆转CCA化疗药物耐药性的作用。结论:VK2可能通过抑制YAP/TAZ信号通路,逆转CCA细胞对化疗药物的耐药性。

哈尔滨地区铜绿假单胞菌外膜蛋白D2与亚胺培南耐药关系研究

目的研究哈尔滨地区铜绿假单胞菌外膜蛋白D2(OprD2)含量改变与亚胺培南(IMP)耐药之间关系。方法采用超声破碎方法提取42株对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌OprD2,进行SDS-PAGE电泳,利用水杨酸盐抑制试验确定OprD2的位置,通过凝胶分析软件分析OprD2的相对含量,并与敏感株进行对比分析。结果42株对IMP耐药的铜绿假单胞菌中,OprD2完全缺失的有11株,减少的有17株,与敏感株相比,OprD2的相对含量明显降低。结论哈尔滨地区铜绿假单胞菌OprD2含量的减少或缺失是其对IMP耐药的主要原因之一。

白念珠菌多药耐药蛋白Cdr1p和Cdr2p的研究进展

ABC转运蛋白 (ATP- binding cassette transporter,ABCT)属于膜转运蛋白 ,存在于哺乳动物、细菌、真菌等多种细胞中 ,且与多种细胞的多药耐药 (multidrug resistance,MDR)有关。白念珠菌 (Candida albicans)含有多种 ABCT,但只有 Cdr1 p、Cdr2 p与 MDR有关 ;另外 ,Cdr1 p、Cdr2 p具有外排泵、磷脂易位等功能。

不同方式加热联合甲基莲心碱对耐药乳腺癌MCF-7/Adr细胞γH2AX及mdr-1/P-gp表达的影响

目的:检测不同模式加热联合甲基莲心碱(neferine,Nef)对耐药乳腺癌MCF-7/Adr细胞的增殖抑制及γH2AX和mdr-1/P-gp表达的影响。方法:采用MTT法检测金属模块加热、培养基加热、烤箱加热及水浴加热等不同模式加热联合10μg/mL Nef对经阿霉素培养的MCF-7/Adr细胞的增殖抑制,实时定量PCR检测mdr-1mRNA的表达,Western印迹法检测γH2AX及P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达。结果:42℃及45℃不同模式加热组较37℃培养组MCF-7/Adr细胞吸光度值明显下降,mdr-1/P-gp表达下降,γH2AX表达上调(均P<0.01)。加热联合10μg/mLNef组较单纯热疗组及单纯10μg/mLNef组MCF-7/Adr细胞吸光度值明显下降(均P<0.01),mdr-1/P-gp表达下降,γH2AX表达上调(均P<0.05)。42℃及45℃不同模式加热组比较,水浴加热组P-gp表达下降及γH2AX表达上调最为明显(P<0.05)。结论:加热能增加阿霉素对MCF-7/Adr细胞的细胞毒性反应,能明显增加MCF-7/Adr细胞DNA损伤且随温度升高而加剧;MCF-7/Adr细胞对不同模式的加热反应可能不同;热疗联合Nef能增敏阿霉素的化学治疗效果。

苦瓜蛋白逆转K562/AO2细胞多药耐药性的研究

目的:研究非细胞毒性质量浓度苦瓜蛋白对耐阿霉素的人红白血病细胞株K562/AO2多药耐药性的逆转作用和促凋亡作用。方法:采用CCK-8法测定苦瓜蛋白的细胞毒性及其对K562/AO2细胞敏感性的影响,用流式细胞仪检测K562/AO2细胞经不同药物处理后细胞的凋亡情况。结果:苦瓜蛋白对K562/AO2细胞有一定的细胞毒作用,其非细胞毒性质量浓度为5μg/mL,非细胞毒性质量浓度苦瓜蛋白对K562/AO2细胞对阿霉素、长春新碱(VCR)和柔红霉素的耐药性都有部分逆转作用(分别为5.4、6.5和4.0倍);5μg/mL苦瓜蛋白联合VCR诱导K562/AO2细胞凋亡,凋亡率为(19.38±1.06)%,而对照组为(1.64±0.27)%,单一苦瓜蛋白组为(3.79±0.82)%,单一VCR组为(9.83±0.98)%。结论:苦瓜蛋白能部分逆转人红白血病K562/AO2细胞对阿霉素、VCR和柔红霉素的耐药,一定剂量的苦瓜蛋白与VCR联合应用可增加肿瘤细胞凋亡率。

肺耐药蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达及与EGFR、HER-2的相关性

目的探讨肺耐药蛋白(lung-resistance protein,LRP)与促瘤因素表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和HER-2在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化EnVision法,检测76例乳腺癌组织中LRP、EGFR和HER-2的表达。结果1)在乳腺癌组织中,LRP、EGFR、HER-2的表达率分别为35.53%、15.79%和25%,它们相互之间表达相关性不明显。2)随着肿瘤组织恶性程度的增高,LRP的表达明显降低(P=0.039)。3)LRP、EGFR、HER-2在淋巴结非转移组与转移组中的表达差异无统计学意义。结论LRP的表达在乳腺癌的恶性进展过程中起重要作用,诊断过程中结合该指标可更准确判断肿瘤恶性程度。

多药耐药蛋白和bcl-2蛋白表达与初治急性白血病预后的关系

目的 :探讨多药耐药蛋白和bcl 2蛋白表达与初治急性白血病 (AL)患者化疗效果的关系。方法 :用流式细胞仪检测 2 9例初诊未治AL患者多药耐药蛋白和bcl 2蛋白表达。结果 :初治AL患者多药耐药蛋白和bcl 2蛋白表达率分别为 37.9%和 83% ;bcl 2蛋白阳性与阴性患者的首次完全缓解 (CR)情况经统计学分析显示差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;而多药耐药蛋白阳性与阴性患者的首次完全缓解 (CR)情况经统计学分析显示有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;多药耐药蛋白和bcl 2蛋白两者之间无相关性。结论 :多药耐药蛋白可作为预测初治AL患者化疗效果的敏感性指标。

乳腺癌耐药蛋白ABCG2对胰腺癌SW1990细胞耐药性影响的实验

目的探讨吉西他滨诱导胰腺癌细胞SW1990中ABCG2的表达及其与化疗耐药的关系。方法胰腺癌细胞SW1990用DMEM培养液常规培养,用0.82 mg/ml吉西他滨作用SW1990细胞24、48和72 h后,使用流式细胞仪测其细胞凋亡率,Western blot检测ABCG2蛋白的表达,RT-PCR检测ABCG2 mRNA的表达,并且分析ABCG2表达水平与化疗耐药的关系。结果 0.82 mg/ml吉西他滨作用SW1990细胞24、48和72 h后,细胞凋亡率分别为(21.1±0.61)%、(13.4±2.17)%、(6.4±1.34)%,不同时间点两两相比P均<0.05。0.82 mg/ml吉西他滨作用SW1990细胞24、48、72 h后与对照组相比,ABCG2 mRNA分别上升了(2.21±0.11)倍、(3.30±0.08)倍和(4.72±0.12)倍,蛋白上升了(2.17±0.14)倍、(3.61±0.09)倍和(4.98±0.13)倍,且组间比较P均<0.05,有统计学意义。结论吉西他滨能抑制胰腺癌细胞SW1990的增殖,但随着时间延长,药物抵抗逐渐增强,这可能与吉西他滨作用细胞后上调ABCG2的表达有关。

多药耐药相关蛋白2及其在肿瘤耐药中的研究进展

肿瘤对化疗药物多药耐药是肿瘤治疗失败的重要原因之一。多药耐药的主要原因是由Pgp、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药相关蛋白(LRP)、乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)等转运蛋白表达异常增高所致。MRP包含9个成员:MRP1-MRP9。多药耐药相关蛋白2(MRP2)是三磷酸腺苷(ATP)结合盒运载体蛋白家族成员之一。

熊去氧胆酸对肝内胆汁淤积大鼠多药耐药相关蛋白2的影响及意义

目的:制备大鼠肝内胆汁淤积模型,检测熊去氧胆酸干预前后多药耐药相关蛋白2(MRP2)表达的变化。方法:采用Wistar雄性大鼠灌服α-茶基异硫氰酸酯(ANIT)制备肝内胆汁淤积模型,分别以生理盐水、地塞米松、熊去氧胆酸干预大鼠5天后,检测肝功能,并取肝脏,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测肝组织MRP2基因mRNA水平,Western-blot检测肝组织内MRP2蛋白水平。结果:与生理盐水组大鼠相比,地塞米松组和熊去氧胆酸组肝功能检测总胆红素、直接胆红素显著降低(P<0.01),肝组织MRP2基因mRNA水平、蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论:地塞米松和熊去氧胆酸均能降低胆红素水平,其作用机制可能与两种药物上调MRP2基因表达有关。

环氧合酶-2、P-糖蛋白与肿瘤多药耐药

P 糖蛋白介导的肿瘤多药耐药是肿瘤细胞产生耐药性主要的机制之一。环氧合酶 2 是肿瘤发生的限制点之一,参与肿瘤发生发展的多个环节。近年来一些研究表明环氧合酶 2 系统可能参与 P 糖蛋白的表达。该文对环氧合酶 2与 P 糖蛋白的关系作一综述。

烷基化修复蛋白B同源物5调控果蝇Zeste基因增强子人类同源物2对K562/阿霉素细胞耐药的影响

目的探讨烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)对K562/阿霉素(ADM)细胞耐药的影响及其作用机制。方法以人白血病细胞系K562和ADM抗性细胞K562/ADM细胞为研究对象,利用Lipofectamine;2000将K562/ADM细胞分为对照组、si-NC组、si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组、空载体组(转染pcDNA3.1)、ALKBH5-WT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-WT)、ALKBH5-MUT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-MUT)、si-ALKBH5-2+空载体组、si-ALKBH5-2+pcDNA3.1-EZH2组。采用比色法检测细胞中N6-甲基腺苷(m6A)含量;采用CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用荧光光度计法检测ADM外排;采用Western blot检测细胞中ALKBH5、果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药基因1(MDR1)的蛋白表达;采用RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证ALKBH5与EZH2 mRNA的相互作用;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测EZH2 m6A水平。结果与K562细胞比较,K562/ADM细胞对ADM的耐药性及细胞中ALKBH5蛋白表达水平升高,m6A含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);沉默ALKBH5可增加K562/ADM细胞中m6A含量,过表达野生型ALKBH5可减少m6A含量,而过表达突变型ALKBH5(H204A)对m6A含量无明显影响。与对照组、si-NC组比较,si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组细胞在450 nm处的光密度值(OD_(450nm)值)、P-gp、MDR1蛋白表达水平降低,细胞内荧光强度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在K562/ADM细胞中,ALKBH5蛋白能与EZH2 mRNA相互作用;沉默ALKBH5可上调K562/ADM细胞中EZH2 m6A水平,下调EZH2蛋白表达水平,过表达野生型ALKBH5则呈相反趋势;EZH2过表达逆转了沉默ALKBH5对K562/ADM细胞活力及耐药性的影响。结论沉默ALKBH5通过促进EZH2的甲基化来下调EZH2的表达,进而降低K562/ADM的耐药性。