妊娠期肝内胆汁淤积症患者多药耐药3基因外显子8和12突变的研究

目的:研究多药耐药3(MDR3)基因外显子8和12突变与妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)的关系,探讨ICP的发生机制。方法:从29例ICP患者及32例正常孕妇的外周血中提取DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增MDR3基因外显子8和12,对PCR产物进行DNA测序分析。结果:ICP患者和对照组PCR均扩增出目的片段,且存在多态性位点G711A及A1260G,两组的8号外显子基因型频率和12号外显子基因型频率比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:云南临沧地区ICP的发生可能与MDR3外显子8和12的突变有关。

茵陈水提物对多药耐药蛋白3基因突变致新生儿肠外营养相关性胆汁淤积的保护作用

目的探讨茵陈水提物对多药耐药蛋白3(MDR3)基因突变导致的新生儿肠外营养相关性胆汁淤积(PNAC)的保护作用及可能机制。方法①将人原代培养肝细胞应用体外细胞培养、CRISPR/Cas9慢病毒感染、MDR3突变基因导入等技术处理后,比较1%脂肪乳诱导处理前(0)和处理后16、32、48 h不同时间点肝细胞上清液中肝胆生化指标〔丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、间接胆红素(IBil)、总胆汁酸(TBA)〕的水平,确定构建MDR3基因突变PNAC肝细胞模型脂肪酸诱导所需的时间。②将人原代培养肝细胞株按随机数字表法分为空白对照组、MDR3基因野生型组、MDR3基因突变组、茵陈水提物干预组。空白对照组只用培养液处理,MDR3基因野生型组应用慢病毒感染融入野生型MDR3基因和培养液培养,MDR3基因突变组应用慢病毒感染慢病毒导入MDR3(c.485T>A、c.2793insA、c.1031G>A、c.3347G>A)突变基因和培养液培养,茵陈水提物干预组应用慢病毒感染导入MDR3突变基因和培养液培养的基础上,加入100 g/L茵陈水提物预处理,然后将4组肝细胞分别加入1%脂肪乳诱导处理,处理时间为构建MDR3基因突变PNAC肝细胞模型脂肪酸诱导所需时间。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定4组肝细胞上清液中肝胆生化(ALT、AST、TBil、DBil、IBil、TBA)水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测4组肝细胞编码MDR3、胆盐输出泵(BSEP)、多药耐药相关蛋白(MRP)2~4和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的三磷酸腺苷结合盒蛋白(ABCB4、ABCB11、ABCC2、ABCC3、ABCC4)和TNF基因mRNA的表达丰度。结果与空白对照组和MDR3基因野生型组比较,MDR3基因突变组在经1%脂肪乳诱导处理前和处理后16 h肝细胞上清液中肝胆生化指标(ALT、AST、TBil、DBil、IBil、TBA)水平比较差异无统计学意义,经1%脂肪乳诱导处理32 h和48 h MDR3基因突变组肝细胞上清液肝胆生化指标(ALT、AST、TBil、DBil、IBil、TBA)水平均明显升高(均P<0.05),确定构建MDR3基因突变PNAC肝细胞模型脂肪酸诱导所需的时间为32 h。与MDR3基因突变组比较,茵陈水提物干预组肝细胞在脂肪乳处理后32 h肝细胞上清液中肝胆生化指标(ALT、AST、TBil、DBil、TBA)水平均明显降低〔ALT(ng/L):148.3±2.3比164.9±7.0,AST(ng/L):2767.4±78.8比3239.4±107.1,TBi(lμmol/L):7.6±0.2比13.6±0.3,DBi(lμmol/L):1.8±0.1比5.7±0.2,TBA(μmol/L):3.4±0.2比6.7±0.1,均P<0.05〕;空白对照组、MDR3基因野生型组、MDR3基因突变组和茵陈水提物干预组肝细胞编码MDR3、MRP2、MRP3、MRP4的ABCB4、ABCC2、ABCC3、ABCC4基因mRNA表达丰度差异无统计学意义;TNF基因mRNA在MDR3基因突变组呈高表达(2-ΔΔCt:1.258±0.200比1.001±0.052),茵陈水提物干预组呈低表达(2-ΔΔCt:0.387±0.247比1.258±0.200),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。与MDR3基因突变组比较,茵陈水提取物干预组肝细胞编码BSEP的ABCB11基因mRNA的表达丰度明显增高(2-ΔΔCt:2.955±0.479比1.333±0.529,P<0.05)。结论茵陈水提物对MDR3基因突变导致的PNAC有一定保护作用,可能与拮抗炎症反应,降低TNF基因的mRNA表达和改善编码BSEP的ABCB11基因的mRNA表达有关。

多药耐药相关蛋白-3表达与肝癌耐药的相关性

目的探讨多药耐药相关蛋白-3(MRP-3)的表达与肝癌耐药的相关性。方法应用RT-PCR方法检测正常肝细胞L-02、肝癌细胞BEL及肝癌耐药细胞HepG2/ADM中MRP-3mRNA的差异表达,再将MRP-3反义及正义寡核苷酸片段分别用脂质体转染进肝癌耐药细胞HepG2/ADM中,用MTT法、流式细胞仪及RT-PCR检测转染后细胞内阿霉素(ADM)的荧光强度、耐药指数及MRP-3mRNA的表达情况。结果肝癌耐药细胞HepG2/ADM中MRP-3mRNA的表达明显高于正常肝细胞L-02和肝癌细胞BEL(P<0.05)。MRP-3反义转染进耐药细胞后,可明显降低细胞内ADM的耐药指数,提高细胞内ADM浓度(P<0.05),细胞内MRP-3mRNA的表达较未转染细胞下降了62.5%(P<0.05)。结论 MRP-3的高表达可能是导致肝癌多药耐药的机制之一。

反义MRP3寡核苷酸对卵巢癌拓普替康耐药性的逆转作用

目的:探讨MRP3反义寡核苷酸对人卵巢癌拓普替康(TPT)耐药株SKOV3/TPT细胞的耐药逆转作用。方法:人工合成MRP3反义寡核苷酸(ASODN)及相应的正义寡核苷酸(SODN)片段,用脂质体(LF)构建成ASODN/LF、SODN/LF,分别转染SKOV3/TPT细胞,用MTT法、流式细胞仪(FCM)及半定量RT-PCR检测体外转染后细胞内TPT的荧光强度、耐药指数及MRP3mRNA表达的改变。结果:将MRP3反义及正义寡核苷酸片段分别转染进SKOV3/TPT细胞后,反义组细胞内TPT的荧光强度及耐药指数明显降低(P<0.05),细胞内MRP3mRNA的表达较未转染细胞下降了60.16%(P<0.05);正义组上述指标无明显变化。结论:转染MRP3ASODN/LF可部分逆转MRP3介导的人卵巢癌细胞对TPT耐药。

MRP3基因参与卵巢癌细胞拓扑替康耐药机制形成的研究

目的:分析人卵巢癌SKOV3/TPT多药耐药的分子机制,寻找可能参与拓扑替康(TPT)耐药机制的新基因。方法:采用大剂量间歇诱导法,对SKOV3细胞株用TPT反复冲击诱导培养,获得稳定的SKOV3/TPT;利用Affymetrix U133A基因表达谱芯片,比较SKOV3及SKOV3/TPT细胞的基因表达;从中选择高表达的MRP3基因进行RT-PCR验证。再将MRP3反义及正义寡核苷酸片段分别用脂质体转染进耐药细胞,用MTT法、流式细胞仪及半定量RT-PCR检测体外转染后细胞内TPT的荧光强度、耐药指数及MRP3 mRNA表达的改变。结果:基因芯片检测发现,有7个差异表达基因可能参与了SKOV3/TPT细胞的耐药,其中4个基因被上调,3个基因被下调,MRP3为上调最明显的基因。MRP3反义寡核苷酸转染SKOV3/TPT细胞后,可明显降低细胞内TPT的浓度及耐药指数(P<0.05),细胞内MRP3 mRNA的表达较未转染细胞下降了60.16%(P<0.05)。结论:SKOV3/TPT细胞耐药表型的形成涉及多个基因表达的改变。MRP3的高表达导致细胞内药物浓度降低,可能是卵巢癌细胞对TPT耐药的主要原因。

ABCB4基因缺陷病的临床研究进展

ABCB4基因编码的多药耐药3(MDR3)蛋白可将磷脂易位至胆汁中,与胆汁分泌和排泄密切相关。ABCB4基因缺陷病包含一组异质性疾病,主要是由于ABCB4基因突变导致MDR3蛋白功能障碍,进而导致毛细胆管堵塞,胆盐毒性去垢作用损伤肝细胞及胆管上皮细胞。ABCB4基因缺陷病的疾病谱广、遗传模式及临床表现多样,可从无症状或仅有谷氨酰转肽酶(GGT)增高到失代偿性肝硬化甚至肝衰竭,且临床表型常难以与胆道结石、原发性胆汁性肝硬化(PBC)及原发性硬化性胆管炎(PSC)等常见疾病区分,易被临床医师误诊、漏诊。近期多项研究表明ABCB4基因突变患者发生恶性肿瘤的风险增加,更增加了该疾病的复杂性。本文总结ABCB4基因缺陷病的临床特征及近年来的诊疗进展,旨在提高临床医师对ABCB4基因缺陷病的认识。

川西獐牙菜醇提物上调HepG2细胞膜转运蛋白MRP3、核转录因子SP1及核受体CPF、PXR表达

目的体外培养HepG2细胞观察川西獐牙菜醇提物(Swertia mussitii Franch)对多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3,MRP3)、核转录因子SP1(specificity protein 1 transcription factor,SP1)及核受体孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、CYP7A启动子结合因子(CYP7A promoter-binding factor,CPF)表达的影响。方法用MTT比色法检测川西獐牙菜醇提物的最佳作用浓度,再分别于0、12、24、48、72h刺激HepG2细胞,抽提细胞的RNA、总蛋白和核蛋白,采用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测膜转运蛋白MRP3、转录因子SP1及核受体PXR、CPF在转录与蛋白水平的表达变化。每个时间点设立阴性对照DMSO组和阳性对照熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)组。结果川西獐牙菜醇提物可显著诱导HepG2细胞膜转运蛋白MRP3的mRNA和蛋白水平的高表达,其作用强于UDCA(P<0.05)。川西獐牙菜醇提物也可明显上调核转录因子SP1及核受体PXR的mRNA和蛋白表达水平,作用强于UDCA。对CPF表达的上调作用与UDCA相当(P<0.05)。结论川西獐牙菜醇提物可刺激HepG2细胞膜转运蛋白MRP3上调,且有可能是通过核转录因子SP1及核受体PXR、CPF上调其表达。

多药耐药蛋白3在婴儿肝外胆道闭锁和巨细胞病毒性肝炎肝组织的表达及其意义

目的研究肝外胆道闭锁及巨细胞病毒性肝炎患儿肝组织中的多药耐药蛋白3(MDR3)的表达,探讨MDR3与胆汁淤积的关系。方法收集2000年1月至2009年10月广西医科大学第一附属医院儿童病例,分为肝外胆道闭锁(EHBA)组20例,CMV肝炎组12例,正常对照组10例,采用免疫组化法检测肝组织中MDR3的表达情况,通过图像分析技术进行定量分析。结果 MDR3在正常对照组、EHBA和CMV肝炎组患儿肝组织均有不同程度表达,以肝细胞膜表达最为明显,MDR3在肝组织的阳性表达随γ-GT的增高而增强,呈正相关(r=0.438,P=0.003),CMV肝炎组、EHBA组和正常对照组MDR3表达吸光度值分别为0.13±0.02、0.18±0.06和0.10±0.03,MDR3在EHBA肝组织中的表达强度明显高于CMV肝炎组和对照组(P<0.05)。结论 MDR3蛋白水平与胆汁淤积程度密切相关,EHBA肝组织MDR3的上调可能为机体的适应性反应,以利于增强磷脂的转运,减轻对胆管上皮的损伤。

抗MRP3单链抗体-sTRAIL融合蛋白诱导U251多形性胶质母细胞瘤凋亡

采用重组PCR技术获得抗多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3,MRP3)的单链抗体(scFv)与人源可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(soluble TNF-related apoptosis inducingligand,sTRAIL)的融合蛋白质的基因编码序列,利用原核表达载体pMAL-c2,构建含麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein,MBP)标签肽的antiMRP3(scFv)-sTRAIL融合蛋白,经亲和层析柱纯化.获得纯化的antiMRP3(scFv)-sTRAIL融合蛋白,用MRP3阳性U251多形性胶质母细胞瘤做增殖抑制实验、细胞凋亡诱导实验,结果均显示具有明显的活性,而MBP无明显作用.上述结果表明,成功表达了antiMRP3(scFv)-sTRAIL融合蛋白,该融合蛋白具有诱导U251多形性胶质母细胞瘤细胞凋亡的活性,为开发靶向性抗肿瘤药物奠定了基础.

多药耐药蛋白3和法尼醇受体在婴儿胆汁淤积性肝炎肝组织中的表达及意义

目的探讨婴儿胆汁淤积性肝炎肝组织中多药耐药蛋白3(MDR3)和法尼醇受体(FXR)的表达及意义。方法 2000年1月-2009年10月就诊于广西医科大学第一附属医院儿科的婴儿胆汁淤积性肝炎患儿21例。男14例,女7例,男女比例2:1;年龄(2.96±1.19)个月。收集其临床资料,进行肝组织活检。正常对照组10例,为肝移植供体,肝功能和病理检查正常。采用免疫组织化学法检测婴儿胆汁淤积性肝炎患儿及正常肝组织中MDR3、FXR的表达,通过图像分析技术进行定量分析。分析MDR3蛋白水平与血清γ-谷氨酰转肽酶及FXR蛋白水平的关系。结果 MDR3在正常肝组织的表达位于肝细胞膜,胆汁淤积性肝炎肝组织MDR3表达增强。胆汁淤积性肝炎组和正常对照组MDR3表达吸光度(A)值分别为0.13±0.02和0.11±0.03,二组比较差异有统计学意义(t=-2.239,P<0.05)。MDR3表达水平与γ-谷氨酰转肽酶水平无相关性(r=0.869,P>0.05)。正常对照组肝组织FXR表达位于肝细胞核,正常对照组和胆汁淤积性肝炎组肝组织FXR表达A值分别为0.07±0.02和0.08±0.02,二组比较差异无统计学意义(t=-1.539,P>0.05)。MDR3表达与FXR水平无相关性(r=-2.680,P>0.05)。结论在婴儿胆汁淤积性肝炎中,肝组织MDR3表达增强可能是机体的适应反应,以利于增强磷脂的转运,MDR3的上调可能与FXR无关。

妊娠期肝内胆汁淤积症患者与新生儿MDR3基因突变分析

目的评价中国人群中多药耐药蛋白3(MDR3)基因在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)发病机制中的遗传作用。方法对65对患有ICP的产妇与女性新生儿抽取外周血DNA进行聚合酶链反应扩增MDR3的14、15、16号外显子进行突变分析。结果65对ICP患者母女MDR3基因的14、15、16号外显子未发现新的突变。结论MDR3基因的14、15、6号外显子突变可能不是中国人群ICP发病的主要原因,但有待于寻找MDR3其他位点的突变或扩大检测样本数量的进一步研究。

以MRP2/MRP3转运体为作用靶点的何首乌中肝毒性成分筛选

目的:建立以胆红素外排转运体多药耐药相关蛋白2(MRP2)、MRP3为靶点的何首乌中潜在肝毒性成分的快速筛选方法,并评价相关化合物的肝毒性大小。方法:采用计算机分子对接方法对何首乌中的主要单体成分进行高通量筛选,以MRP2、MRP3转运体底物胆红素为参考对象,将48个目标单体与MRP2、MRP3蛋白进行分子对接,实现虚拟筛选;采用CCK-8细胞计数试剂盒法考察目标单体对肝细胞HepaRG的毒性作用;应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定目标单体对HepaRG细胞外排转运体MRP2、MRP3 mRNA相对表达量的影响。结果:MRP2对接结果显示,大黄素-6-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-(6’-O-乙酰基)-葡萄糖苷、反式二苯乙烯苷高于底物胆红素与MRP2对接打分值的80%;MRP3对接结果显示,大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-6-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-(6’-O-乙酰基)-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷及芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷高于底物胆红素与MRP3对接打分值的80%,因此上述单体可被初步推测为潜在肝毒性成分。体外细胞毒性实验结果表明,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷[半数抑制浓度(IC_(50))为21.37μg·mL^(-1)]和芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(IC_(50)为6.96μg·mL^(-1))表现出较明显的肝细胞毒性,并可显著影响外排转运体MRP2、MRP3 mRNA表达水平(P<0.05)。结论:建立的以MRP2、MRP3为靶点的分子对接法初步筛选得到了何首乌中潜在的肝毒性成分,并对其毒性大小进行了评价,为何首乌的临床安全用药提供了参考。

AntiMRP3(scFv)-sTRAIL靶向诱导多形性成胶质细胞瘤的凋亡

目的:观察抗人类多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3,MRP3)的单链抗体与可溶性坏死因子相关凋亡诱导配体(soluble TNF-related apoptosis inducing ligand,sTRAIL)的融合蛋白antiMRP3(scFv)-sTRAIL对多形性成胶质细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)U251细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法:MTT法检测不同浓度antiMRP3(scFv)-sTRAIL(3.9063～250 nmol/L)作用后U251细胞的存活率。给予亲代antiMRP3(scFv)或TRAIL活性中和抗体mAb 2E5预孵育,应用IC50剂量的antiMRP3(scFv)-sTRAIL作用U251细胞,流式细胞仪检测U251细胞的凋亡率,Western blotting检测U251细胞中caspase-3的激活及其关键底物DNA裂解因子(DNA fragmentation factor,DFF)的降解。结果:随着antiMRP3(scFv)-sTRAIL浓度的增加,U251细胞的存活率逐渐降低[(84.84±0.2)%～(19.93±1.8)%];IC50剂量(62.5 nmol/L)的antiMRP3(scFv)-sTRAIL单独或给予antiMRP3(scFv)、mAb 2E5预孵育后处理,致U251细胞的凋亡率分别为(58.0±1.3)%、(14.9±1.7)%和(17.4±3.0)%;antiMRP3(scFv)或mAb 2E5预孵育均可阻断U251细胞中antiMRP3(scFv)-sTRAIL诱导的caspase-3的激活及DFF的裂解。结论:AntiMRP3(scFv)-sTRAIL促进sTRAIL靶向识别并诱导GBM细胞凋亡,为开发靶向性抗肿瘤药物奠定了基础。

川西獐牙菜单体齐墩果酸上调阻塞性胆汁淤积大鼠肝脏核受体Lrh-1和胆酸转运蛋白Mrp3的表达

目的建立胆道结扎的大鼠模型,观察川西獐牙菜活性单体齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对胆道结扎所致的肝外胆汁淤积的保护作用,及其对多药耐药相关蛋白3(multidrug resistanceassociated protein 3,Mrp3)、核受体Lrh-1的调控作用。方法采用随机数字表法将15只SD大鼠分为3组:假结扎组(Sham组)、胆道结扎组(BDL组)、齐墩果酸组(BDL+OA组),每组5只。分别用生理盐水、齐墩果酸处理7 d后,收集组织标本,HE染色检测肝脏损伤程度,Western blot及RT-PCR检测Mrp3和Lrh-1在蛋白及mRNA水平的变化。结果 HE染色结果显示BDL+OA组肝脏损伤程度较胆道结扎组明显减轻;Western blot结果表明BDL+OA组Mrp3表达较Sham组增加2.4倍,Lrh-1表达增加1.8倍;RT-PCR结果显示BDL+OA组Mrp3表达较Sham组增加3.2倍,Lrh-1表达升高2.2倍。结论川西獐牙菜单体齐墩果酸对胆道结扎所致大鼠胆汁淤积性肝损伤具有保护作用,而这种保护作用可能与Lrh-1、Mrp3有关。

BSEP、MRP2及MDR3在胆管消失综合征患者肝组织表达及与病理形态相关性研究

目的探讨胆汁酸盐输出泵(BSEP)、多药耐药相关蛋白2(MRP2)、多药耐药蛋白3(MDR3)在胆管消失综合征(VBDS)患者肝组织中的表达特点及与病理形态的相关性。方法收集2010年1月—2019年12月在石家庄市藁城中西医结合医院和石家庄市第五医院经肝穿组织病理诊断为VBDS患者85例,根据引起VBDS病因不同分为药物性肝损伤引起的VBDS(D-VBDS)组和原发性胆汁性胆管炎引起的VBDS(P-VBDS)组,另选择15例无胆管消失的乙肝携带者作为对照组。收集D-VBDS组和P-VBDS组患者临床资料,对所有入选者肝穿组织进行病理观察,记录肝细胞淤胆、毛细胆管淤胆、小叶内炎症、小胆管损伤、细胆管增生、汇管区炎症6项病理形态特点并进行半定量评分,观察3组肝组织中BSEP、MRP2、MDR3免疫组化阳性表达特点,分析D-VBDS组和P-VBDS组间不同病理形态评分与BSEP、MRP2、MDR3评分之间的相关性。结果D-VBDS组和P-VBDS组性别构成及年龄比较差异均无统计学意义(P均>0.05),且均是女性多于男性,并均以40~50岁年龄段最多见;D-VBDS组和P-VBDS组中BSEP、MRP2、MDR3在肝细胞胆管膜侧阳性表达均明显增强,BSEP、MRP2、MDR3评分均明显高于对照组(P均<0.05),D-VBDS组和P-VBDS组间BSEP、MRP2、MDR3评分比较差异均无统计学意义(P均>0.05);D-VBDS组和P-VBDS组中BSEP、MRP2、MDR3评分均与小胆管损伤及细胆管增生呈正相关性,表现为小胆管损伤越重、细胆管增生越明显,则转运蛋白阳性表达越强;其他病理形态特征与BSEP、MRP2、MDR3评分间均无相关性(P均>0.05)。结论BSEP、MRP2、MDR3在不同病因引起的VBDS肝组织中均表达增强,细胆管增生及小胆管变性损伤病理形态改变是启动3种转运蛋白过表达的病理组织学基础。

靶向肝癌抗肿瘤疫苗临床研究进展

抗肿瘤疫苗是癌症免疫疗法的一种。由于癌细胞表面高表达多种癌症相关抗原分子,利用这类分子可激活树突状细胞抗原呈递,激活辅助性T细胞和细胞毒性T细胞的免疫响应,从而清除相应的癌细胞。抗肿瘤疫苗在黑色素瘤、白血病等癌症的临床研究中取得了很好的效果。现就基于常见肝癌相关抗原如甲胎蛋白(AFP)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、多药耐药相关蛋白3(MRP3)、癌症-睾丸抗原(CTA)设计的靶向肝癌的抗肿瘤疫苗的临床研究进行综述。

茵栀黄注射液基于FXR调控MDR3治疗肝内胆汁淤积的作用机制

目的:通过研究茵栀黄注射液(Yinzhihuang injection,YZH)对人正常肝细胞系HL-7702细胞的法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR),多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance associated protein 3,MDR3)基因表达的影响,探讨茵栀黄注射液调控肝脏胆汁酸代谢的作用靶点及机制,为茵栀黄注射液治疗肝内胆汁淤积的临床应用提供实验依据。方法:不同浓度茵栀黄注射液干预HL-7702,采用细胞活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)探索茵栀黄注射液对HL-7702的活性影响,结合实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法确定茵栀黄注射液的理想干预浓度和时间;用GW4064(FXR激动剂)促进FXR基因的表达,分为茵栀黄注射液组,GW4064组,GW4064+茵栀黄注射液组,正常组,DMSO组;小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默FXR基因,分为siRNA组,siRNA+茵栀黄注射液组,正常组,阴性组。Real-time PCR法、蛋白质免疫印迹(Western blot)法分别检测FXR,MDR3 mRNA及蛋白质的相对表达量,免疫荧光(IF)检测FXR蛋白的表达。结果:研究结果表明茵栀黄注射液对HL-7702的理想干预浓度1.08%,理想干预时间为15.47 h;茵栀黄注射液对HL-7702活性影响呈剂量依赖性;与正常组比较,GW4064组促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P<0.01);与正常组比较,siRNA组抑制FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P<0.01);与GW4064组比较,GW4064组+茵栀黄注射液组促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P<0.01);与siRNA组比较,siRNA+茵栀黄注射液组促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。结论:茵栀黄注射液促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达,茵栀黄注射液通过FXR促进MDR3 mRNA和蛋白的表达来调控肝脏胆汁酸的代谢,本实验为其临床应用于治疗肝内胆汁淤积提供实验依据。

进行性家族性肝内胆汁淤积症3型

进行性家族性肝内胆汁淤积症3型（progressive familial intrahepatic cholestasis type3，PFIC3）是一种常染色体隐性遗传性疾病，由编码多药耐药蛋白3（multidrug resistance protein 3，MDR3）的ABCB4（ATP binding cassette，subfamily B，member4）基因突变引起。PFIC3临床上可表现为反复瘙痒、黄疸、白陶土样便、肝脾肿大及胃肠道出血等，常在成年前进展为肝硬化和肝衰竭。

MDR3、FXR基因在肝内胆汁淤积的遗传学研究进展

肝内胆汁淤积的发病机制复杂,目前仍不十分清楚。有研究认为遗传因素扮演着重要的角色,进行性家族性肝内胆汁淤积已证实由基因突变引起,胆汁的分泌过程由多个胆汁相关性基因调控。而法尼醇受体基因(FXR)对胆汁分泌的间接调控及其所形成的复杂网络,使其成为近几年胆汁淤积方面的研究热点之一。

MRP3在胰腺癌及胰腺癌细胞系的表达及意义

目的探讨多药耐药相关蛋白3（MRP3）在胰腺癌标本及多种肿瘤细胞中的表达及意义。方法利用免疫组织化学的方法检测30例胰腺癌与癌旁组织中MRP3的表达，同时通过RT—PCR检测7种肿瘤细胞及人胚肾293T细胞在mRNA水平的表达情况，采用抗MRP3的单克隆抗体通过流式细胞仪检测MRP3蛋白的表达。结果在各种胰腺癌标本中，MRP3在细胞核中的表达阳性细胞较正常组织明显增多（尸=0．03），表达强度明显增强（P=0．015），而在胞浆上二者表达差异无统计学意义（P=0．472）；MRP3mRNA在3种人胰腺癌细胞中皆有表达，在其他5种细胞无表达，MRP3蛋白在胰腺癌细胞系BxPC-3及AsPC-1中阳性率较高（分别为68．5％和33．6％），而在PANC-1细胞中仅有5．4％表现为MRP3阳性。结论MRP3在胰腺癌中的表达与正常胰腺组织的差别主要在细胞核，而在培养细胞中可能以组织特异性的方式表达不同，BxPC-3细胞系是体外胰腺癌耐药研究的一种选择。