含人脂肪来源蛋白复合物的三维生物打印墨水的创面修复效应初探

目的探讨人脂肪来源蛋白复合物(ADPC)对人皮肤成纤维细胞(HSF)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和迁移能力的影响,以及含ADPC的三维生物打印墨水(Bioink)在裸鼠全层皮肤缺损创面中的修复效应。方法采用实验研究方法。收集解放军总医院2020年10月—2021年3月收治的3例行腹部皮瓣转移修补术的女性慢性创面患者(年龄29~34岁)的废弃皮下脂肪组织和同期收治的3名行腹部抽脂术的健康女性(年龄24~36岁)的废弃抽脂术脂肪组织,分别制备正常ADPC(nADPC)及抽脂术ADPC(lADPC)。采用二辛丁酸法测定2种ADPC的蛋白浓度,计算2种ADPC的提取效率,样本数均为3。取对数生长期HSF和HUVEC进行后续实验。取2种细胞均按随机数字表法(分组方法下同)分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、4μg/mL nADPC组、20μg/mL nADPC组、100μg/mL nADPC组和200μg/mL nADPC组,每组5孔。PBS对照组细胞采用PBS培养,余4组分别采用含相应终质量浓度的nADPC培养。常规培养24 h,采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖活力。取HSF和HUVEC,分为PBS对照组、单纯nADPC组、单纯lADPC组、单纯肿瘤坏死因子α(TNF-α)组、TNF-α+nADPC组、TNF-α+lADPC组。PBS对照组与单纯TNF-α组细胞分别加入PBS,单纯nADPC组、单纯lADPC组、TNF-α+nADPC组及TNF-α+lADPC组中分别加入终质量浓度100μg/mL的nADPC或lADPC,单纯TNF-α组、TNF-α+nADPC组及TNF-α+lADPC组再加入终质量浓度20 ng/mL的TNF-α。进行细胞划痕试验后计算划痕后24 h细胞迁移率(样本数为3),同前检测培养24 h细胞增殖活力(样本数为5)。取明胶-海藻酸钠复合Bioink(Bioink AG),制备含100μg/mL lADPC的Bioink AG(lADPC-Bioink AG),观察二者在室温下及冷凝后的形态和三维生物打印且交联后的形态,采用流变仪检测流变性能时记录低温成胶时间(样本数为3)。取20只8~10周龄雌性BALB/c-NU裸鼠,建立背部全层皮肤缺损创面模型后,分为常规换药组、单纯lADPC组、单纯Bioink AG组和lADPC-Bioink AG组,每组5只。常规换药组裸鼠创面仅覆盖水胶体敷料和常规换药,其余3组裸鼠创面另予相应lADPC、Bioink AG、lADPC-Bioink AG处理。从治疗0 d起,行大体观察,计算治疗2、6、10 d的创面愈合率。治疗10 d,采用苏木精-伊红染色行创面组织病理学观察。对数据行独立样本t检验、单因素方差分析、重复测量方差分析、SNK-q检验及LSD-t检验。结果lADPC的蛋白浓度、提取效率分别为(1.306±0.011)mg/mL、(11.1±1.5)%,明显低于nADPC的(2.039±0.042)mg/mL、(22.2±2.0)%(t=23.83、6.38,P<0.05或P<0.01)。培养24 h,与PBS对照组比较,100μg/mL nADPC组和200μg/mL nADPC组HSF(q=6.943、6.375,P<0.01)和HUVEC(q=6.301、6.496,P<0.01)增殖活力均明显下降;与100μg/mL nADPC组比较,200μg/mL nADPC组HSF和HUVEC增殖活力无明显变化(P>0.05)。划痕后24 h,与PBS对照组比较,单纯nADPC组、单纯lADPC组、单纯TNF-α组HSF和HUVEC迁移率均明显降低(q=5.642、6.645、11.480,4.772、6.298、10.420,P<0.05或P<0.01);与单纯nADPC组比较,单纯lADPC组HSF和HUVEC迁移率无明显变化(P>0.05);与单纯TNF-α组比较,TNF-α+nADPC组、TNF-α+lADPC组HSF迁移率无明显变化(P>0.05),HUVEC迁移率均明显升高(q=8.585、7.253,P<0.01);与TNF-α+nADPC组比较,TNF-α+lADPC组HSF和HUVEC迁移率无明显变化(P>0.05)。培养24 h,与PBS对照组比较,单纯nADPC组、单纯lADPC组、单纯TNF-α组HSF和HUVEC增殖活力均明显降低(q=5.803、5.371、9.136,11.580、9.493、13.510,P<0.05或P<0.01);与单纯nADPC组比较,单纯lADPC组HSF和HUVEC增殖活力均无明显变化(P>0.05);与单纯TNF-α组比较,TNF-α+nADPC组、TNF-α+lADPC组HSF(q=14.990、10.850,P<0.01)和HUVEC(q=7.066、8.942,P<0.01)增殖活力均明显升高;与TNF-α+nADPC组比较,TNF-α+lADPC组HSF和HUVEC增殖活力均无明显变化(P>0.05)。室温及冷凝状态下,lADPC-Bioink AG比Bioink AG外观稍显浑浊;三维生物打印且交联后lADPC-Bioink AG与Bioink AG形态类似。在10℃时,lADPC-Bioink AG的凝固时间为(76.6±0.4)s,明显慢于Bioink AG的(74.4±0.6)s(t=4.64,P<0.01)。治疗2 d,常规换药组裸鼠创面渗出较多,其余3组无明显渗出;治疗8 d,lADPC-Bioink AG组裸鼠残余创面面积最小,有明显上皮覆盖。治疗2 d,lADPC-Bioink AG组裸鼠创面愈合率明显高于单纯lADPC组(t=3.59,P<0.05),与常规换药组、单纯Bioink AG组相近(P>0.05);治疗6 d,lADPC-Bioink AG组裸鼠创面愈合率明显高于常规换药组、单纯lADPC组、单纯Bioink AG组(t=18.70、15.70、3.15,P<0.05或P<0.01);治疗10 d,lADPC-Bioink AG组裸鼠创面愈合率明显高于常规换药组、单纯lADPC组(t=12.51、4.84,P<0.01),与单纯Bioink AG组相近(P>0.05)。治疗10 d,lADPC-Bioink AG组裸鼠创面组织血管化程度适中,上皮化充分,愈合效果最好。结论抽脂术相关操作会降低ADPC蛋白浓度、提取效率等表征,但lADPC与nADPC具有相同的生物学作用,可在非炎症环境中抑制HSF与HUVEC的增殖与迁移能力,在炎症环境中提高HSF与HUVEC的增殖活力,同时提高HUVEC的迁移能力;将lADPC加入Bioink AG中后,不会明显影响Bioink AG的物理性质及打印性能,并可以提升裸鼠全层皮肤缺损创面的修复效果。

炎性体抗病毒信号通路与宫颈癌

炎性体是存在于免疫活性细胞内的大分子、多蛋白复合体,能够感受细菌、病毒等外在病原体的刺激激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1),促进白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18前体的加工成熟,参与机体炎性反应与免疫应答,诱导一种特殊的细胞死亡,即细胞焦亡(pyroptosis)。细胞焦亡是一种不同于凋亡和坏死的程序性细胞死亡形式,其特点为细胞在死亡过程中发生渗透性崩解,释放大量的炎性细胞因子,对邻近细胞产生促炎效应,快速启动天然免疫,能够对抗肿瘤的形成。综述近年炎性体抗病毒信号通路与宫颈癌相关的研究进展。

基于NLRP3炎性小体通路探讨金樱子乙醇提取物对系膜增生性急性肾小球肾炎大鼠的保护作用

目的:基于NLRP3炎性小体通路探讨金樱子乙醇提取物对系膜增生性急性肾小球肾炎大鼠的保护作用。方法:SD大鼠80只分为对照组、模型组、贝那普利组、金樱子组,系膜增生性急性肾小球肾炎模型建模成功后,贝那普利组、金樱子组给予相应药物灌胃,对照组、模型组给予生理盐水,持续7周。试验结束后处死大鼠,测定肾/体比值、24 h尿蛋白、血清肌酐(SCr)、血尿素氨(BUN)、肾小球系膜细胞(GMC)计数、细胞外基质(ECM)阳性面积比值、核因子κB(NF-κB)、Nod样受体家族组成的多蛋白复合物样受体家族3(NLRP3)mRNA以及蛋白水平、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白水平。结果:与对照组比较,模型组肾/体比值、24 h尿蛋白、SCr、BUN、GMC计数、ECM阳性面积比值、NF-κB、NLRP3 mRNA、蛋白、IL-2、IL-6、TNF-α水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,贝那普利组、金樱子组肾/体比值、24 h尿蛋白、SCr、BUN、GMC计数、ECM阳性面积比值、NF-κB、NLRP3 mRNA、蛋白、IL-2、IL-6、TNF-α水平明显降低(P<0.05);金樱子组各指标与贝那普利组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:金樱子对大鼠系膜增生性急性肾小球肾炎具有保护作用,能明显降低肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质沉积;其机制与金樱子能抑制NLRP3炎性小体通路NF-κB、NLRP3 mRNA、蛋白表达水平进而抑制炎症因子IL-2、IL-6、TNF-α的表达有关。

NLRP3炎症小体与儿童自身炎症性疾病研究进展

儿童自身炎症性疾病(AID)是难治性疾病之一,发病机制尚未完全明确。近年来大量研究表明,NLRP3炎症小体失调在儿童AID的发生、发展中具有重要作用。NLRP3炎症小体是细胞内的一种多蛋白复合物,它能激活半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶1(caspase-1),进一步促进炎症因子IL-1β和IL-18的成熟和分泌,从而促进细胞凋亡,调节固有免疫应答。IL-1受体拮抗剂(Anakinra)和IL-1β单克隆抗体(Canakinumab)治疗儿童AID取得了较好的疗效。本文就NLRP3炎症小体在该类疾病发病机制中的研究进展作一综述。

免疫共沉淀技术的应用研究

免疫共沉淀技术是研究蛋白质.蛋白质之间相互作用的重要方法之一,可以确定在生理状态下细胞内相互作用的蛋白质。在蛋白复合物的研究中,不仅可以用于验证其存在,还可以发现新的蛋白复合物。近来,中医药科研工作者应用此技术来揭示中医药的作用机制,取得了一些成绩。就近几年免疫共沉淀技术的应用研究做文献综述。

紫杉醇化疗后卵巢上皮性癌组织中COP9、JAK2、HSP、NADH基因表达的变化及其意义

目的探讨卵巢上皮性癌（卵巢癌）紫杉醇化疗后癌组织中COP9、JAK2、HSP、NADH基因表达的变化及其意义。方法采用RT-PCR技术及实时定量PCR技术检测54份卵巢癌组织中JAK2、HSP、NADH和COP9基因的表达，并分析其临床意义。其中，接受紫杉醇化疗者33份（接受2—4、6—10个疗程化疗者分别为15、18份），未接受化疗者21份；病理分级：G1-G2 24份，G3，30份；病理类型：浆液性囊腺癌26份，黏液性囊腺癌21份，子宫内膜样腺癌7份；手术病理分期：Ⅲ期49份，Ⅳ期5份。结果RT-PCR技术检测显示，COP9基因过度表达率化疗者为39％，明显低于未化疗者的95％（P〈0．01）；而JAK2、HSP、NADH基因过度表达率化疗者分别为91％、97％及94％，明显高于未化疗者的29％、48％及43％（P〈0．05）。除JAK2基因过度表达率在不同病理分级的癌组织中比较，差异有统计学意义（P〈0．01）外，其他基因在不同病理分级、病理类型、手术病理分期及不同疗程化疗者间比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。进一步行实时定量PCR技术检测显示，化疗者COP9、JAK2、HSP和NADH基因的拷贝数分别为568、7653、5766和3200，未化疗者分别为1886、3094、3341和1522，两者分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。除COP9基因的拷贝数在不同疗程化疗患者的癌组织中比较，差异无统计学意义（P〉0．05）外，其他基因在不同疗程化疗、病理分级的癌组织中比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；上述4个基因拷贝数在不同病理类型间比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。Ⅳ期患者癌组织中HSP、NADH基因拷贝数明显高于Ⅲ期（P值分别为〈0．01、〈0．05）；但COP9及JAK2基因拷贝数在两者间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。JAK2、HSP、NADH基因表达3者间均呈明显正相关关系（r=0．56、0．44、0．57，P均〈0．01）；COP9与JAK2基因表达呈明显负相关关系（r=-0．48，P〈0．01），但与HSP、NADH基因表达无明显相关性（r=-0．18、-0．06，P均〉0．05）。结论COP9基因表达的下调和JAK2、HSP、NADH基因表达的上调可能与卵巢癌紫杉醇化疗耐药有一定的关系。

PAR6基因在肿瘤发生发展中的作用及机制

细胞极性是多种不同种类细胞的共同特征，对细胞的正常分化和功能是必须的。分离缺陷基因6（PAR6）编码的 PAR6蛋白对于细胞的不对称分裂和细胞极化生长至关重要。PAR6蛋白是PAR6极性复合体的重要组成部分，其影响细胞中心体的合成及中心体蛋白的补给。细胞中心体数目异常、细胞极性的丧失，最终可能导致肿瘤的发生。