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采用GFP标记筛选抑制多血清型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA
1
作者
张志彬
张健
+3 位作者
贺明
高倍瑶
贾琪
张立春
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2023年第8期1-5,共5页
为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融...
为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融合表达载体;将化学合成的siRNA与融合表达载体共转染,通过GFP观察、Western blot和实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)方法检验目标siRNA对融合基因的抑制效率。生物信息分析发现,多血清型口蹄疫病毒3C基因高度保守并存在潜在siRNA作用靶位,GFP-3C融合表达载体成功构建,与化学合成的siRNA1-3C共转染293T细胞,GFP观察发现,siRNA1-3C可有效抑制来源于A型、O型和Asia I型3C基因的GFP-3C荧光信号且持续时间达72 h,Western blot检测证实此结果。qRT-PCR检测发现,siRNA1-3C对3个GFP-3C融合基因转录水平抑制效率超85%,且作用可维持72 h。本试验利用GFP作为筛选标记成功筛选出1个作用于FMDV 3C基因的siRNA,为开发多血清型口蹄疫抑制剂提供参考依据。
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关键词
小干扰RNA(siRNA)
口蹄疫(FMD)
绿色荧光蛋白(GFP)
多血清型
3C基因
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职称材料
引起食物中毒的多血清型副溶血性弧菌PFGE溯源分析
被引量:
1
2
作者
罗淑华
金玉娟
+2 位作者
杨慧
黄鹏飞
李燕
《职业与健康》
CAS
2013年第15期1870-1872,共3页
目的用传统培养方法与脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术对多血清型副溶血性弧菌食物中毒分离菌株,进行血清型、毒力、药敏及同源性比对分析。方法对分离的副溶血性弧菌进行常规鉴定、血清分型、毒力及药敏分析后,进行PFGE分析并确定分子分...
目的用传统培养方法与脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术对多血清型副溶血性弧菌食物中毒分离菌株,进行血清型、毒力、药敏及同源性比对分析。方法对分离的副溶血性弧菌进行常规鉴定、血清分型、毒力及药敏分析后,进行PFGE分析并确定分子分型。结果食物中毒患者分离出8株副溶血性弧菌,血清型O3:K6有4株、O4:K8有3株、未有血清分型1株,经PFGE聚类溯源分析分属于5种不同的PFGE条带型,分离菌株耐热直接溶血素基因(TDH)均为阳性,均对氨苄西林耐药。结论此起食物中毒经PFGE聚类分析认为是由不同副溶血性弧菌引起,TDH均为阳性,PFCE分型更适用于菌株同源性的分析和传染源溯源追踪。
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关键词
PFGE分析
多血清型
副溶血性弧菌
食物中毒
原文传递
鸭疫里氏杆菌多种血清型间接ELISA检测方法的建立
被引量:
5
3
作者
季慕寅
王晴
+5 位作者
翟志鹏
陈绵绵
马彩凤
姚火春
陆承平
张炜
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第11期2260-2269,共10页
【目的】鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)是一种重要的禽病病原,分为21个血清型。但一直缺乏一种针对多种血清型广泛适用的抗体检测方法。前期的研究表明,外膜蛋白A(Outer membrane protein A,Omp A)广泛存在于多种血清型的R...
【目的】鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)是一种重要的禽病病原,分为21个血清型。但一直缺乏一种针对多种血清型广泛适用的抗体检测方法。前期的研究表明,外膜蛋白A(Outer membrane protein A,Omp A)广泛存在于多种血清型的RA菌株中,是一种重要的免疫原性蛋白,并且其基因序列在RA血清型之间具有高度的保守性,提示其可以作为RA感染血清抗体检测的靶点分子。以重组蛋白Omp A建立间接酶联免疫吸附试验检测RA的抗体。【方法】通过诱导表达条件的摸索及蛋白纯化,获得适用于ELISA包被的重组Omp A抗原。通过Western-blot证明重组蛋白Omp A是否与RA多种血清型发生免疫学反应。进行方阵试验以确定ELISA抗原的最佳包被浓度、被检测血清的反应浓度。重复性、特异性和敏感性试验检查该方法的实用性。【结果】实验证实加入1%乙醇的诱导培养基有利于重组蛋白的可溶性表达。Western-blot结果表明,重组蛋白Omp A可以与1、2、6、10、11、13、14和17型多种RA主要流行血清型有良好的免疫反应性。经方阵试验确定抗原的最佳包被浓度为8 mg/L,待检血清的最佳稀释度为1:160。所建立检测方法具有良好的重复性、特异性和敏感性。【结论】实验建立的鸭疫里氏杆菌多种血清型间接ELISA检测方法可以用于免疫后抗体消长以及感染性抗体的检测。
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关键词
鸭疫里氏杆菌
外膜蛋白A
多血清型
间接酶联免疫吸附试验
原文传递
题名
采用GFP标记筛选抑制多血清型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA
1
作者
张志彬
张健
贺明
高倍瑶
贾琪
张立春
机构
吉林省农业科学院
吉林农业大学动物科技学院
延边大学农学院
出处
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2023年第8期1-5,共5页
基金
转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08007-005B)
吉林省自然科学基金(20101590)。
文摘
为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融合表达载体;将化学合成的siRNA与融合表达载体共转染,通过GFP观察、Western blot和实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)方法检验目标siRNA对融合基因的抑制效率。生物信息分析发现,多血清型口蹄疫病毒3C基因高度保守并存在潜在siRNA作用靶位,GFP-3C融合表达载体成功构建,与化学合成的siRNA1-3C共转染293T细胞,GFP观察发现,siRNA1-3C可有效抑制来源于A型、O型和Asia I型3C基因的GFP-3C荧光信号且持续时间达72 h,Western blot检测证实此结果。qRT-PCR检测发现,siRNA1-3C对3个GFP-3C融合基因转录水平抑制效率超85%,且作用可维持72 h。本试验利用GFP作为筛选标记成功筛选出1个作用于FMDV 3C基因的siRNA,为开发多血清型口蹄疫抑制剂提供参考依据。
关键词
小干扰RNA(siRNA)
口蹄疫(FMD)
绿色荧光蛋白(GFP)
多血清型
3C基因
Keywords
small interfering RNA(siRNA)
foot and mouth disease(FMD)
green fluorescence protein(GFP)
multiple serotypes
3 C gene
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
引起食物中毒的多血清型副溶血性弧菌PFGE溯源分析
被引量:
1
2
作者
罗淑华
金玉娟
杨慧
黄鹏飞
李燕
机构
广东省深圳市光明新区疾病预防控制中心
深圳市龙岗区疾病预防控制中心
深圳市光明新区卫生监督所
出处
《职业与健康》
CAS
2013年第15期1870-1872,共3页
基金
深圳市龙岗区科技计划医疗卫生项目(项目编号:ys2012031)
文摘
目的用传统培养方法与脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术对多血清型副溶血性弧菌食物中毒分离菌株,进行血清型、毒力、药敏及同源性比对分析。方法对分离的副溶血性弧菌进行常规鉴定、血清分型、毒力及药敏分析后,进行PFGE分析并确定分子分型。结果食物中毒患者分离出8株副溶血性弧菌,血清型O3:K6有4株、O4:K8有3株、未有血清分型1株,经PFGE聚类溯源分析分属于5种不同的PFGE条带型,分离菌株耐热直接溶血素基因(TDH)均为阳性,均对氨苄西林耐药。结论此起食物中毒经PFGE聚类分析认为是由不同副溶血性弧菌引起,TDH均为阳性,PFCE分型更适用于菌株同源性的分析和传染源溯源追踪。
关键词
PFGE分析
多血清型
副溶血性弧菌
食物中毒
Keywords
PFGE analysis
Multiple serotypes
Vibrio parahaemolyticus
Food poisoning
分类号
R155.3 [医药卫生—营养与食品卫生学]
原文传递
题名
鸭疫里氏杆菌多种血清型间接ELISA检测方法的建立
被引量:
5
3
作者
季慕寅
王晴
翟志鹏
陈绵绵
马彩凤
姚火春
陆承平
张炜
机构
南京农业大学动物医学院
芜湖职业技术学院生物工程学院
出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第11期2260-2269,共10页
基金
江苏省自然科学基金项目(No.BK20141363)
国家自然基金优秀青年基金项目(No.31322054)
文摘
【目的】鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)是一种重要的禽病病原,分为21个血清型。但一直缺乏一种针对多种血清型广泛适用的抗体检测方法。前期的研究表明,外膜蛋白A(Outer membrane protein A,Omp A)广泛存在于多种血清型的RA菌株中,是一种重要的免疫原性蛋白,并且其基因序列在RA血清型之间具有高度的保守性,提示其可以作为RA感染血清抗体检测的靶点分子。以重组蛋白Omp A建立间接酶联免疫吸附试验检测RA的抗体。【方法】通过诱导表达条件的摸索及蛋白纯化,获得适用于ELISA包被的重组Omp A抗原。通过Western-blot证明重组蛋白Omp A是否与RA多种血清型发生免疫学反应。进行方阵试验以确定ELISA抗原的最佳包被浓度、被检测血清的反应浓度。重复性、特异性和敏感性试验检查该方法的实用性。【结果】实验证实加入1%乙醇的诱导培养基有利于重组蛋白的可溶性表达。Western-blot结果表明,重组蛋白Omp A可以与1、2、6、10、11、13、14和17型多种RA主要流行血清型有良好的免疫反应性。经方阵试验确定抗原的最佳包被浓度为8 mg/L,待检血清的最佳稀释度为1:160。所建立检测方法具有良好的重复性、特异性和敏感性。【结论】实验建立的鸭疫里氏杆菌多种血清型间接ELISA检测方法可以用于免疫后抗体消长以及感染性抗体的检测。
关键词
鸭疫里氏杆菌
外膜蛋白A
多血清型
间接酶联免疫吸附试验
Keywords
Riemerella anatipestifer
Omp A
Multi-serotypes
Indirect ELISA
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
采用GFP标记筛选抑制多血清型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA
张志彬
张健
贺明
高倍瑶
贾琪
张立春
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2023
0
下载PDF
职称材料
2
引起食物中毒的多血清型副溶血性弧菌PFGE溯源分析
罗淑华
金玉娟
杨慧
黄鹏飞
李燕
《职业与健康》
CAS
2013
1
原文传递
3
鸭疫里氏杆菌多种血清型间接ELISA检测方法的建立
季慕寅
王晴
翟志鹏
陈绵绵
马彩凤
姚火春
陆承平
张炜
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
5
原文传递
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