HPV16 E6、E7多表位DNA疫苗的构建及免疫效果评估

目的构建和评价HPV16 E6、E7多表位DNA疫苗诱导的特异性CTL细胞应答及其对肿瘤生长的干预作用,从而揭示其作为候选HPV治疗性疫苗的潜能。方法首先通过IEDB网站中的MHC I Processing Predictions和MHC I Binding Predictions方法,分别预测人类HLA-A^(*)02:01、HLA-A^(*)11:01、HLA-A^(*)24:02和C57BL/6小鼠H-2b的限制性CTL表位,然后根据评分以及ELISPOT实验筛选出二者共同呈递的CTL表位,并将其构建成多表位DNA疫苗(pVAX1-10P)。从预防性和治疗性二个方面研究pVAX1-10P对小鼠移植TC-1异位癌的免疫干预作用,流式细胞术检测特异性CTL应答。结果获得10条可被人与鼠MHC分子共呈递的CTL表位,ELISPOT结果表明这10条CTL表位均能诱导小鼠淋巴细胞产生特异性免疫应答;由此构建的多表位DNA疫苗pVAX1-10P无论在预防性实验还是治疗性实验中,均能诱导特异性的细胞免疫并抑制肿瘤的生长。结论构建的HPV16 E6、E7多表位DNA疫苗pVAX1-10P能够诱导特异性CTL应答,显著抑制肿瘤生长,有望作为候选HPV治疗性DNA疫苗。

结核分枝杆菌Hsp70,Ag85A和ESAT-6多表位DNA疫苗的免疫效果观察

目的探讨新型结核分枝杆菌Hsp70,Ag85A和ES-AT-6多表位DNA疫苗的免疫效果,为结核病防治探索新途径。方法健康BALB/c小鼠90只,随机分成阴性对照组、多表位DNA疫苗组和卡介苗对照组,经3次免疫后4,8和12周分别分离血清测定特异性IgG水平,同时分离小鼠脾细胞,体外经TB-PPD刺激后用MTT法测定T淋巴细胞增殖,并以ELISA法测定脾细胞培养上清液中IFN-γ和IL-4水平。结果多表位DNA疫苗组和BCG组小鼠血清特异性IgG抗体均在4周后明显增高,第8周达最高水平,多表位DNA疫苗组的抗体效价明显高于BCG组;小鼠脾细胞体外经TB-PPD刺激后,多表位DNA疫苗组T淋巴细胞增殖明显高于BCG组,且能诱生较强的IFN-γ反应(P<0.05),IL-4水平与BCG组及阴性对照组相比均无显著差异(P>0.05)。结论结核分枝杆菌Hsp70,Ag85A和ESAT-6多表位DNA疫苗在小鼠体内诱导较强的特异性免疫反应,产生高水平的特异性IgG抗体、诱导特异性淋巴细胞增殖和IFN-γ分泌。

多表位DNA壳聚糖微球疫苗的体液免疫应答

目的研究多表位DNA壳聚糖微球疫苗的体液免疫应答。方法制备多表位DNA壳聚糖微球疫苗pcD-NA3.1-HME-3C3d,经鼻腔免疫小鼠,蛋白检测微孔试剂盒检测小鼠特异性IgG抗体水平。结果经免疫的小鼠均能产生针对各表位的特异性IgG抗体,DNA壳聚糖微球疫苗的抗体水平明显高于DNA疫苗。结论壳聚糖微球疫苗投递系统可提高多表位DNA疫苗的免疫应答效果。