柞蚕NPV多角体膜蛋白类似基因的克隆和序列分析

为探明柞蚕核型多角体病毒(Anthraea pernyi nucleopolyhedrovirus,ApNPV)基因组信息,从柞蚕尸体中分离纯化ApNPV,提取其基因组DNA,分别建立ApNPV DNA的HindⅢ和SalⅠ酶切片段文库。对插入片段进行测序,经过同源性分析发现,在2．9kb的SalⅠ片段上包含1个多角体膜蛋白类似基因,其读码框编码289个氨基酸,是一个晚期表达基因。氨基酸同源性比较的结果表明,ApNPV的多角体膜蛋白基因与云杉卷叶蛾(Choristioneure fumiferana)NPV的同源性较高,达91．7%,而与家蚕(Bombyx mori)NPV及苜蓿尺蠖(Autographa califorlica)MNPV的同源性较低,分别为65．1%和63．0%。该结果说明ApNPV与CfNPV在进化关系上较近,而与BmNPV和AcNPV在进化关系上较远。比较多种核型多角体病毒的多角体膜蛋白和多角体蛋白的氨基酸序列发现,这两种多角体结构蛋白的同源性具有相似的变化趋势。

PrGV多角体膜蛋白(PEP)的分析

【目的】对菜粉蝶颗粒体病毒(Pieris rapae Granulovirus,PrGV)多角体膜蛋白(polyhedron envelope protein,PEP)进行研究,为揭示PEP的功能及其在病毒生命过程中的作用提供参考。【方法】以PrGV PEP为对象,通过序列分析、原核表达、抗体制备、Western blotting、胶体金免疫定位、实时荧光定量PCR等方法初步确认该基因定位和表达时相。【结果】PrGV PEP与其他鳞翅目昆虫颗粒体病毒的PEP同源性达到50%左右,但未在核型多角体病毒(Nucleo polyhedro virus,NPV)中发现同源序列。定量PCR分析表明,菜青虫感染PrGV后24h可检测到PEP的存在,随后该基因的表达水平逐渐升高,并在72h达到峰值。通过Western blotting可以在感染PrGV的菜青虫体内检测到大小分别为23ku和15ku的清晰条带,说明制备的多克隆抗体具有较好的特异性。免疫金标记将PEP定位于椭圆型的颗粒体,证明PEP是GV包涵体的重要组成部分。【结论】PrGV PEP在颗粒体病毒中较为保守,可能是PrGV晚期表达的重要基因,参与病毒侵染后期颗粒体结构的形成。