凝胶排阻色谱-多角度激光散射法测定破伤风类毒素相对分子质量分布

为更好地表征精制破伤风类毒素(精制TT)相对分子质量分布的情况,利用凝胶排阻色谱与多角度激光散射仪联用法(SEC-MALS法)对精制破伤风类毒素分子质量及其分布进行了初步探索。通过优化实验参数,确定了最佳实验条件:流动相为0.2 mol/L磷酸盐缓冲液-1%异丙醇(pH=7.0)(PBS),样品浓度为2.0 mg/mL,柱温为25℃,流速为0.5mL/min。与聚丙烯酰胺凝胶电泳法相比,SEC-MALS法能够提供准确的精制TT单体分子质量测量值。此外,SEC-MALS法能够得到质均相对分子质量Mw、数均相对分子质量Mn以及二者的比值——多分散性Mw/Mn等重要物理参数,可以更加准确地反映精制TT溶液中单聚体、二聚体、多聚体分布状态,可以量化分子大小批间差异情况,有利于评价精制TT生产过程中的工艺调整或变化对蛋白单体收率的影响,当作为多糖蛋白结合疫苗常用的载体蛋白时,有利于以准确可量化的质量参数参与结合物的关键工艺控制。

凝胶色谱-多角度激光光散射法测定聚对二氧环己酮绝对分子量及分子量分布指数

以含0.01 mol·L^(-1)三氟乙酸钠的六氟异丙醇(HFIP)溶液(流动相)为溶剂溶解聚对二氧环己酮(PPDO)样品,使其质量浓度达到4 g·L^(-1)。过0.45μm滤膜,在凝胶色谱仪的Shodex HFIP 805/Shodex HFIP 803串联色谱柱上分离。多角度激光光散射仪的角度经聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)标准溶液进行归一化校正后,用来分析色谱仪分离得到的目标物,并将示差折光仪测得的折光指数增量代入光散射法测定绝对分子量的公式,计算PPDO的重均分子量、数均分子量及分子量分布指数。结果显示,重均分子量、数均分子量及分子量分布指数的相对标准偏差(n=6)均小于5.0%;PPDO在HFIP中的分子构象为无规线团状;凝胶色谱法所得重均分子量、数均分子量和分子量分布指数远大于上述方法的,主要由PMMA(用于制作标准曲线)和PPDO分子结构差异较大所致。

Cell-DYN3700血细胞分析仪测定网织红细胞的评价

目的 :探讨CELL DYN 3 70 0血细胞分析仪测定网织红细胞与目测法的差异及影响因素 ,并对仪器测定网织红细胞性能进行评价。方法 :测定仪器在网织红细胞的批内及批间的精密度及携带污染率 ,并与目测法配对试验进行统计学分析。结果 :仪器法测定网织红细胞批内平均CV为 7 5 5 % ,批间平均CV为 7 14 % ,携带污染率为 0 3 4% ,与目测法进行比较Y =0 .967x 0 .195 ,r =0 .93 ,配对t检验P >0 .0 5 ,差异无显著性意义。结论 :CELL DYN3 70 0血细胞分析仪测定网织红细胞具有准确度高、精密度高、检测速度快的特点 。

眼用硅油重均相对分子质量及其寡聚硅氧烷含量分析

采用凝胶渗透色谱与多角度激光光散射联用仪测定眼用硅油的重均相对分子质量,用气相色谱–质谱联用仪对其低聚物(寡聚硅氧烷类物质)进行定性定量分析。以八甲基环四硅氧烷(D4)、十甲基环五硅氧烷(D5)作为寡聚硅氧烷代表进行检测研究。硅油的重均相对分子质量(Mw)为31KD,相对分子质量分布系数Mw/Mn为2.9。D4,D5的质量浓度分别在1~50μg/mL,2~60μg/mL范围内与其色谱峰面积呈良好的线性,线性相关系数(r^2)分别为0.999,0.998,检出限分别为0.10,0.23μg/mL,D4,D5的加标回收率分别为90.7%~96.7%,87.3%~94.1%。重均相对分子质量及D4,D5测定结果的相对标准偏差均小于5%(n=6)。该方法干扰少,准确度高,可用于眼用硅油质量控制。

注射用黄芪多糖相对分子质量测定方法的比较及研究

采用不同的方法对注射用黄芪多糖相对分子质量进行测定与比较。以SHODEX GS-620为色谱分离柱,右旋糖酐葡聚糖作为对照品,采用高效凝胶渗透色谱-示差检测器(GPC-RI)测定注射用黄芪多糖的重均分子量(M_w)。同时采用多角度激光光散射法(MALLS)及基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)对其相对分子质量进行测定。GPC-RI法测得注射用黄芪多糖依次呈现4个色谱峰,其M_w分别为:138万, 23.1万, 1.8万, 480; MALLS法测得3个信号较强的色谱峰,其M_w分别为:114.8万, 18万, 4.3万; MALDI-TOF-MS法测得在15.5万和1.8万有较强的信号,并获得黄芪多糖的糖残基单元为己糖。通过3种方法的测定与相互验证,初步确定了注射用黄芪多糖各分离峰的M_w,同时获取了部分黄芪多糖单元结构信息。最终经过普适校正后的GPC-RI法可应用于黄芪多糖的M_w测定。在研究中3种方法各有其优势,采用相互比较和验证的方式测定中药多糖可获得更为准确的结果。

微流体流变仪法测定不同型号聚维酮K值及K值与重均分子量关系的初步探讨

本文运用微流体流变仪和乌氏毛细管黏度计,分别测定7种型号56批次聚维酮样品的K值。采用SPSS软件,对两种方法测得的K值进行配对样本T检验,结果表明两种方法测定的K值无显著性差异(P>0.05)。以乌氏毛细管黏度计测得K值(Ku)为横坐标,微流体流变仪测得K值(Km)为纵坐标,得到方程,Km=0.8939Ku+4.6176R2=0.9862,拟合程度良好。微流体流变仪法具有耗样量少、耗时短、准确的特点,能实现高通量全自动化采集为不同型号聚维酮K值的测定提供了更便捷的手段。接着采用高效凝胶色谱-多角度激光散射仪联用法(GPC-MALLS)测得各型号聚维酮重均分子量(Mw),探究其与Km关系,得到lg Mw=-0.0004 Km2+0.0727 Km+2.791R2=0.9901,拟合情况良好,故可将Km带入上述关系式估算Mw。

霸王花不同部位粗多糖的结构组成及体外抗氧化活性

目的研究霸王花不同部位粗多糖的结构组成和体外抗氧化活性。方法利用水提醇沉法制备霸王花4个不同部位(花瓣、花萼、雌蕊、雄蕊)的粗多糖,通过苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝法、凝胶排阻色谱联用多角度激光光散射和示差折光仪法[size exclusion chromatography(SEC) coupled with multiangle laser light scattering(MALLS)and refractive index detector(RID),SEC-MALLS-RID]、高效液相色谱法、傅里叶红外光谱法(Fourier transform infrared spectrometer,FTIR)分析比较霸王花不同部位粗多糖结构特征;以对2,2-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用为指标,评价霸王花不同部位粗多糖的体外抗氧化活性。结果霸王花不同部位粗多糖中多糖含量为52.20%~61.52%,蛋白质含量为1.17%~3.21%;霸王花不同部位粗多糖均含有D-甘露糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸、葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖,但单糖的比例有差异;4个不同部位粗多糖的SEC色谱图、重均分子质量及其分布、FTIR色谱图具有相似性;霸王花不同部位粗多糖具有体外抗氧化活性。结论霸王花不同部位粗多糖结构组成具有较高的相似性,均具有良好的抗氧化活性,在保健食品和药品等领域具有良好的开发利用前景。