组织芯片多重免疫组织化学染色方法的优化

为提高多重免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)技术在组织芯片(tissue microarray,TMA)上的染色效果,通过对同一样本进行多种抗体染色或同种抗体多次染色的方法,探索并优化IHC技术中的多个步骤,具体包括:“滤纸夹层-蒸蛋器”抗原修复新装置的研发、抗原修复液的筛选、透明剂的优选.研究结果显示:自创的“滤纸夹层-蒸蛋器”抗原修复辅助工具,能减少高温高压修复时水分子对组织的冲击,作用温和、操作安全,有较好的组织切片完整性和较少的组织脱片率,且可减少抗原修复液使用量;柠康酐抗原修复液对多重染色具有更强的阳性效应和通用性;无毒TO(terpentine oil)透明剂可取代有毒二甲苯,具有同样的脱蜡透明效果.TMA中多重IHC技术的改良,提供了更加高效、廉价、安全的方法,可提升与扩展TMA在病理学中的应用价值.

联合p16、Ki-67免疫组织化学染色在宫颈上皮内瘤变分级诊断中的应用效果观察

[目的]探究与分析联合应用p16、Ki-67免疫组织化学染色对宫颈上皮内瘤变(CIN)分级诊断的影响.[方法]回顾性分析自2019年3月至2021年11月间收治的接受宫颈液基薄层细胞学检查(TCT)且检查结果异常的60例患者的临床资料.全部患者按照苏木精-伊红染色法(HE)结果分为慢性宫颈炎组(n=19)、CINⅠ组(n=15)、CINⅡ组(n=12)、CINⅢ组(n=10)、宫颈癌组(n=4),全部患者均进行了宫颈阴道镜活检、人乳头瘤病毒(HPV)分型检测,并配合采用P16、Ki-67免疫组织化学染色的半定量评分,以判断患者宫颈病变程度.[结果]随着宫颈CIN病变程度的升高,CINⅢ组分别与CINⅠ组、CINⅡ组相比,CINⅡ组与CINⅠ组相比,P16表达阳性程度及Ki-67表达阳性程度升高,差异有统计学意义(P<0.05).慢性宫颈炎组P16、Ki-67免疫组织化学结合半定量评分与HE染色CIN分级诊断结果相符,CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组诊断结果相符率为94.59%,差异具有统计学意义(P<0.05).P16呈阳性表达时与HPV感染呈正相关(P<0.05).HPV-16、HPV-18、HPV-35、HPV-39、HPV-51在P16表达阳性与阴性方面差异具有统计学意义(P<0.05).[结论]CIN分级与P16、Ki-67的表达呈正相关,且P16与患者HPV感染有密切的关系.

US-FNAC结合CT、CgA和TG免疫组织化学染色在甲状腺髓样癌诊断中的应用

目的探讨超声引导下细针穿刺细胞学(ultrasound-guided fine-needle aspiration cytology,US-FNAC)联合降钙素(calcitonin,CT)、嗜铬素A(chromogranin A,Cg A)、甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)诊断甲状腺髓样癌(medullary thyroid cancer,MTC)的应用价值。方法对7例US-FNAC诊断且术后组织病理学确诊的MTC临床资料和超声特点、细胞病理学特征进行综合分析。细针穿刺标本采用常规涂片1~2张自然风干后刘氏染色液快速染色,现场进行细胞病理学评判,确保取得满意的细胞量,同时将剩余标本注入液基细胞保存液中保存,采用液基薄层制片,HE染色及CT、CgA和Tg免疫组织化学染色。结果7例MTC细胞均中等量到大量,均有散在突出的大细胞、双核细胞、浆样细胞或核偏位不规则细胞;6例伴梭形细胞,细胞病理学表现与MTC细胞学诊断标准基本相符,CT、CgA胞质均弥漫强阳性表达,Tg阴性,细胞病理学诊断为MTC。结论US-FNAC技术可提高甲状腺结节细针穿刺标本满意度,结合液基薄层制片与CT、CgA免疫组织化学染色可提高MTC术前诊断准确性,对MTC治疗具有重大的临床意义。

多组织蜡块在免疫组织化学染色阳性对照中的应用

目的:目前免疫组织化学染色阳性对照的制作方法多种多样,单组织对照制作简单,但使用时由于免疫组织化学染色指标过多,容易出错。一些多组织对照使用方便,但制作方法繁琐、难度高。本研究旨在探讨一种新型、简单的多组织蜡块的制作及其在免疫组织化学染色对照中的应用。方法:依据国际特设专家委员会对常见抗体对照组织的推荐,选取包含肝、阑尾、扁桃体、肺、胰腺组织蜡块各1个为1组,共10组,进行厚度为6μm的连续切片,将切好的组织片依次卷曲叠在一起,形成一个长条形的致密组织卷,经过切割和包埋,制成多组织免疫组织化学染色阳性对照蜡块,然后用于免疫组织化学染色。结果:该阳性对照蜡块染色效果好,包含5种阳性对照组织,可适用于68种常用的免疫组织化学染色标志物。一次至少可制作对照蜡块2个,耗时约20 min,组织大小平均约为4.7 mm×4.1 mm,不同对照蜡块之间以及同一对照蜡块的不同切面之间,切片后免疫组织化学染色结果一致性较好,一个蜡块平均可切约800张有效的免疫组织化学染色对照片。结论:多组织阳性对照蜡块制作方法简单,耗时少、组织面积小、一致性好、重复性高,可以满足68种常用抗体对照组织的设置需求,对日常免疫组织化学染色检测有较好的临床应用价值。

肾组织磷脂酶A2受体抗原免疫组织化学染色方法研究

目的:探讨肾组织石蜡切片磷脂酶A2受体(PLA2R)抗原免疫组织化学染色方法。方法:选取2023年1—8月在浙江大学医学院附属第一医院肾脏病中心穿刺的269例肾活检组织石蜡切片进行PLA2R抗原免疫组织化学染色,包括特发性膜性肾病(IMN)183例、狼疮性肾炎46例、免疫球蛋白(Ig)A肾病和微小病变型肾病各20例,计算其阳性率。选取25例IMN(冷冻切片免疫荧光IgG4分型阳性且血清PLA2R抗体阳性),狼疮性肾炎、IgA肾病、微小病变型肾病各8例作为比较不同修复条件的预试验组和对照组,采用3种方法进行抗原修复,分别是乙二胺四乙酸(EDTA)碱性修复液热修复+蛋白酶K修复、EDTA碱性修复液热修复+胃蛋白酶修复、EDTA碱性修复液热修复+胰蛋白酶修复,修复后进行全自动免疫组织化学染色,比较染色效果。结果:预试验结果显示,采用EDTA碱性修复液热修复10 min+蛋白酶K 5 min做抗原修复的标本染色结果最佳,阳性染色沿肾小球毛细血管壁呈颗粒状沉积且背景清晰,对照组均为阴性。PLA2R抗原免疫组织化学染色结果显示IMN 183例阳性率为86.3%(158/183);狼疮性肾炎46例、IgA肾病20例、微小病变型肾病20例均为阴性。结论:肾组织PLA2R抗原免疫组织化学染色能为IMN的诊断提供有力依据。免疫组织化学染色时,首选EDTA碱性修复液热修复+蛋白酶K双修复。

程序性细胞死亡1-配体1在不同免疫组织化学染色方法的一致性比较

目的:比较程序性细胞死亡1-配体1(programmed cell death 1-ligand 1,PD-L1,克隆号E1L3N、22C3、SP263)在不同免疫组织化学染色方法的一致性。方法:第一步,筛选最优流程:采用PD-L1(克隆号E1L3N)抗体分别按推荐流程、自建流程①、自建流程②与自建流程③,对5例扁桃体组织完成平行免疫组织化学染色,专科病理医生对全部切片进行质量评分(0~6分),筛选出评分最高的流程;第二步,用最优流程与两种标准流程的评分结果进行一致性比较:选取近两年北京大学第一医院病理最终诊断为非小细胞肺癌的标本共32例,用筛选出的自建流程①、与SP263标准流程及22C3标准流程对32病例各自进行平行染色,全部染色片由专科病理医师行阳性肿瘤细胞比例评分(tumor proportion score,TPS)。评分结果按<1%,≥1%至<10%,≥10%至<50%,≥50%分组,分析PD-L1检测抗体克隆号E1L3N与22C3、SP263染色结果的一致性。结果:扁桃体染色切片质量评分(0~6分)如下:推荐流程为5、5、5、5、5分;自建流程①为5、6、6、5、6分;自建流程②为4、4、4、4、4分;自建流程③为3、3、3、3、3分。自建流程①的结果总体评分最高,选用自建流程①完成32例非小细胞肺癌病例的免疫组组织化学染色,TPS评分为:自建流程①,<1%共6例,≥1%至<10%共5例,≥10%至<50%共10例,≥50%共11例;22C3标准流程,<1%共5例,≥1%至<10%共3例,≥10%至<50%共13例,≥50%共11例;SP263标准流程,<1%共7例,≥1%至<10%共4例,≥10%至<50%共11例,≥50%共10例。一致性检验结果为:自建流程①和22C3标准流程,κ值为0.736(P<0.001),一致性好;自建流程①和SP263标准流程,κ值为0.914(P<0.001),一致性极好。结论:采用PD-L1(克隆号E1L3N)抗体,在罗氏Ventana Benchmark GX平台,通过自建染色流程①完成,可获得良好质量的染色切片;在非小细胞肺癌病例的检测中,自建染色流程①与22C3标准流程和SP263标准流程一致性好。

双氧水脱黑素颗粒优化免疫组织化学染色在眼球恶性黑素瘤诊断中的应用

目的探究采用双氧水去除眼球恶性黑素瘤中黑素颗粒后在免疫组织化学染色中的应用。方法收集本院2018—2021年间收治的眼球恶性黑素瘤病例10例,制作石蜡切片,采用不同浓度(3%和15%)双氧水处理,以及不同的脱黑素颗粒时间(12 h和24 h),然后进行HE染色和免疫组织化学染色检测(melan A、Ki-67、SOX10),分析不同浓度双氧水和不同作用时间对HE染色和免疫组织化学检测指标结果的影响。结果未脱黑素颗粒的HE染色和免疫组织化学染色切片中含有大量黑素颗粒,无法准确进行肿瘤良性或恶性的判读。采用3%双氧水脱黑素颗粒的HE染色和免疫组织化学染色切片中含有部分黑素颗粒,脱色不均且不彻底,细胞形态及组织结构模糊,对结果判读有一定影响。采用15%双氧水和24 h的脱黑素颗粒时间的HE染色和免疫组织化学染色切片中基本无黑素颗粒残留,染色清晰,对肿瘤的良性或恶性能够准确判读。结论高浓度双氧水长时间脱黑素颗粒的效果明显,HE染色和免疫组织化学染色结果的判读清晰且准确。

免疫组织化学染色检测肺结核组织中的Ag85B

目的:探讨结核分枝杆菌分泌性抗原Ag85B在肺结核组织中的分布特点,初步分析其在肺结核病理学诊断中的应用价值。方法:收集医院病理科手术切除的肺结核组织标本19例,以非肺结核肺组织(肺癌切除标本正常组织断端20例)为阴性对照。通过免疫组化检测Ag85B的表达情况,并与抗酸染色进行对比。结果:Ag85B免疫组化阳性信号主要沉积在结核坏死灶及周围,分布与抗酸杆菌相关、范围更广。19例肺结核标本中,10例抗酸染色阳性,抗酸染色敏感度为52.63%(10/19);10例抗酸染色阳性的标本免疫组织化学染色全部阳性,9例抗酸染色阴性的标本中免疫组化阳性的标本有6例,免疫组化敏感度为84.21%(16/19)。20例阴性对照组中,3例免疫组化呈阳性,免疫组化特异度为85.00%(17/20)。结论:Ag85B免疫组化阳性信号表达范围比抗酸杆菌分布更广,较抗酸染色具有更高的敏感性,可作为结核确诊的一种补充手段。

胸水细胞蜡块结合免疫组织化学染色技术诊断肺癌的临床意义

目的分析胸水细胞蜡块结合免疫组织化学染色技术诊断肺癌的价值。方法选取2021年5月—2023年3月睢宁县人民医院收治的疑似肺癌患者67例为研究对象,均给予液基细胞学、细胞蜡块结合免疫组化检测,以病理检查结果为金标准,比较不同检测方法诊断效能以及对不同类型肺癌的鉴别准确性。结果67例患者中经病理检查确诊肺癌47例、良性病变20例,细胞蜡块结合免疫组织化学染色检查灵敏度、特异度、准确性、阳性预测值、阴性预测值均高于液基细胞学检测结果。以病理检查为金标准,细胞蜡块结合免疫组织化学染色检测对于腺癌诊断符合率100.00%,高于液基细胞学检测的78.95%,差异有统计学意义(χ^(2)=6.846,P<0.05)。结论肺癌诊断中,以胸水细胞蜡块结合免疫组化检测技术应用价值较高,除进行肺癌检出之外,还可进行肿瘤类型鉴别。

大鼠垂体远侧部内分泌细胞的四重免疫组织化学染色方法

本文介绍一种显示大鼠垂体远侧部内分泌细胞的四重免疫组织化学染色方法。此法以PAP 法为基础,结合 DAB 银加强法和间接免疫金标记技术。方法比较简单,所需试剂容易得到。

免疫组织化学染色技术常见问题的研究与探讨

自从1941年coons首先用荧光素标记抗体,检测肺组织内的肺炎双球菌获取成功之后,后继研究者创建了免疫组织化学技术。经过几十年的不断发展,从最初的直接免疫荧光标记方法,逐渐发展为免疫荧光组织化学技术、免疫酶组织化学技术、亲和免疫组织化学技术和免疫金银组织化学技术等。

免疫组织化学染色的定量方法研究

本文提出阳性单位(PU)新概念,用于定量表达免疫组化阳性反应程度。本文将排除了切片或涂片本底因素后的纯免疫组化反应程度按灰度图像分为0(白)到100(黑)个等级,每一等级定义为1个阳性单位。导出公式如下:a.PU=100(G_α—G_β)÷G_(max);b.PU=100(G_A—G_β)÷(A_(Aα)·G_(max))。式中G_α、G_β分别为待测结α和背景β的平均灰度,G_A为含有α和β的A区域的平均灰度;G_(max)为检测仪器的最大灰度。A_(Aα)为α相在A区域中的面积密度。式a适于测算境界明显的粒子,式b则不论粒子境界如何,对各类样品均适合,包括组织学切片和细胞学涂片。PU值大小与反应强度成正比,PU最大值为100、理论最小值为0。对513个EMA染色的胸腹水腺癌细胞进行了测试,结果表明该法对EMA染色定量判断的灵敏度为94.2％,特异度为100％,准确度为95.6％。讨论了PU值的意义和有关对比染色问题。

淋巴组织免疫组织化学染色及质量控制

目的 建立淋巴组织的制片与免疫组化的标准化实验方法 ,达到临床病理检验质控要求。方法 详细介绍了淋巴组织的取材、固定、脱水、透明、石蜡包埋、切片、免疫组化和TUNEL染色方法及其质量控制环节。结果 用此法制备的免疫组化切片具有阳性结果呈颗粒状的棕黄色 ,定位准确 ,对比明显 ,背景浅 ,组织结构与细胞轮廓完整、清晰 ,适合显微照相以及染色结果稳定可靠 ,特异性强、敏感性高。结论 该方法可作为淋巴组织的制片与免疫组化的标准化实验方法应用。

免疫组化双酶双标记和组织化学复合染色方法的探讨

免疫组化双酶双标记和组织化学复合染色方法的探讨赵秀兰，孙保存，林建韶，王欣，李薇，谭郁彬随着免疫组化技术的发展，已有可能在同一张切片上标记出不同的细胞成分，若与组织化学染色相结合，则可显示更多的细胞成分，为同时观察几种细胞的分布特点、相互关系提供了新...

免疫组织化学染色在食管梭形细胞肿瘤诊断中的应用

目的:探讨免疫组织化学染色在食管梭形细胞肿瘤鉴别诊断及明确肿瘤的来源的意义。方法:应用HE染色及免疫组织化学染色法,检测18例食管梭形细胞肿瘤标本CD117、CD34、SMA、Desmin和S-100抗体的表达。结果:18例食管梭形细胞肿瘤中CD34、S-100、Desmin的阳性/阴性表达比例分别为4/14、0/18和12/6。CD117:6例阳性,其中2例局部胞膜阳性细胞,4例梭形细胞胞质阳性;12例阴性。SMA:17例肿瘤细胞呈程度不等的弥漫阳性。18例食管梭形细胞肿瘤中12例为平滑肌瘤,6例为间质瘤。结论:免疫组织化学技术能比较准确地判断食管梭形细胞肿瘤的生物学行为和预后,为术后合理选择分子靶向治疗方案提供方向。

肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色法诊断Alport综合征

目的探讨肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色方法在Alport综合征(AS)患者诊断中的应用,从而为AS的诊断提供新的技术手段。方法将对照组及已确诊的X连锁型、常染色体隐性遗传型AS及血尿患儿各2例肾组织分别进行石蜡切片Ⅳ型胶原α3和α5链免疫组织化学染色和冰冻切片的间接免疫荧光染色,比较分析染色结果。具体方法根据PV-9000试剂盒提供的实验方法,进行染色。采用高压锅加热、胃蛋白酶消化和蛋白酶消化3种抗原修复方法分别对正常肾组织切片进行抗原修复,并比较其修复效果。免疫荧光染色采用间接免疫荧光染色法。结果肾小球基底膜Ⅳ型胶原α3、α5链免疫组织化学染色在对照和血尿组为连续的线状阳性;在X连锁显性遗传型女性患儿为间断线状阳性,在男性患儿为阴性;在常染色体隐性遗传患者均为阴性,在肾小囊及部分肾小管基底膜上Ⅳ型胶原α5链为阳性。结果均与免疫荧光染色法结果一致。结论肾脏组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色法可用于诊断AS,为诊断AS提供了新的手段。

特殊标本的免疫组织化学染色体会

特殊标本的免疫组织化学染色体会１熊正文２王伯氵云３丁华野１李春光作者单位：１解放军第２５１医院病理科，张家口０７５０００２第四军医大学病理学教研室，西安７１００３２３北京军区总医院病理科，北京１００７００特殊标本的免疫组织化学染色（ｉｍｍｕｎｏｈｉｓ...

细胞角蛋白单克隆抗体免疫组织化学染色方法检测大肠癌淋巴结微转移的研究

目的为研究角蛋白克隆抗体免疫组织化学法在检测淋巴结微转移灶上的意义。方法采用三种角蛋白单克隆抗体AE1,AE3、AE1/AE3,对我院47例大肠癌术后患者331个淋巴结用免疫组织化学法重新检查。结果36个淋巴结存在微转移灶(11.9%),Duke'sC期患者微转移灶检出率高于Duke'B期患者(P<0.05)。随访显示有微转移灶Duke'B期病人肿瘤复发、远处扩散转移均较无微转移病人高(P<0.05)。结论即使是组织学检查结果为阴性的淋巴结,也很有存在微转移的可能性。免疫组织化学法栓测单克隆抗角蛋白抗体,可详细阐明临床分期,并可提供大肠癌治疗的指征。

全自动免疫组织化学染色技术的应用

目的研究探讨全自动免疫组织化学染色方法在病理技术中的应用。方法收集病理科2010年1月至2010年6月期间送检标本中常见肿瘤100例,行常规包埋、切片。选择较为常用的30种诊断用抗体,分别采用免疫组化机与手工操作两种染色方法进行对比。结果全自动免疫组化机染色下的组织穿透性强,敏感性高,定位准确,染色信号放大,表达清晰、背景非特异性染色浅,最大限度降低假阳性可能,提高了诊断的质量;而手工染色颜色深浅不一,非特异性背景染色不清晰。结论全自动免疫组织化学染色技术对免疫组化标准化程度的提高和质量控制起到了一定的推动作用。