质粒AmpC β-内酰胺酶及其多重聚合酶链反应检测

质粒AmpC酶属BushⅠ型β-内酰胺酶,可分为6个不同的群(ACC、FOX、MOX、DHA、CIT和EBC)。Perez和Nancy等设计用6组特异性AmpC引物的多重聚合酶链反应来检测质粒ampC基因,一次聚合酶链反应即可分析多个ampC基因,并能排除诱导型AmpC β-内酰胺酶干扰,还可进行多重耐药机制的检测和多重AmpC β-内酰胺酶的鉴别,对细菌耐药性监测和流行病学的研究有重要意义。

QuEChERS-UPLC-MRM-IDA-EPI法测定巴比妥类药物的临床监测

目的 :建立检测生物样本(全血、尿液、唾液)中所含巴比妥、苯巴比妥、异戊巴比妥药物成分的QuEChERS-超高效液相色谱(UPLC)-多重反应监测(MRM)-条件触发(IDA Criteria)-增强子离子扫描(EPI)检测方法。方法 :色谱柱为Waters Atlantis T3 C_(18),100 mm×2.1 mm,3μm;柱温为40℃;流动相为含0.1%甲酸的5 mmol/L甲酸铵水溶液及乙腈,梯度洗脱15 min;流速为0.2 mL/min;以优化后的质谱参数采集信号。结果 :检出限浓度为0.5 ng/mL;定量限浓度为1.0 ng/mL;线性范围为定量限浓度～200 ng/mL;在线性范围内相关系数在0.999以上;加标回收率为88.0%～96.8%。结论 :本方法准确,灵敏度高,专属性好;能用于生物样本(全血、尿液、唾液)中巴比妥、苯巴比妥、异戊巴比妥化学成分的同时定性及定量检测。

质谱MRM技术在蛋白质组学研究中的应用

质谱多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)技术是一种基于已知信息或假定信息有针对性地获取数据,进行质谱信号采集的技术,具有灵敏、准确和特异等优点。在基于蛋白组学的生物标志物研究、蛋白质翻译后修饰、定量蛋白质组和蛋白质相互作用等研究领域的应用逐渐受到重视。该文概述了该技术在蛋白质组学研究中的应用特点及其最新应用进展。

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定野生菌中的15种蘑菇毒素

目的基于线性离子阱质谱的多重反应监测-信息依赖采集-增强子离子扫描(multiple reaction monitoring-information dependent acquisition-enhanced product ion scan,MRM-IDA-EPI)二级谱图筛查方法,建立超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)定量检测和定性筛查野生菌中15种蘑菇毒素。方法野生菌样本通过甲酸-甲醇-水-乙腈(1:40:40:19,V:V:V:V)混合溶液超声提取,QuEChERS试剂提取净化,采用UPLC-MS/MS和MRM-IDA-EPI方法对15种蘑菇毒素进行定量分析和定性筛查。结果通过野生菌样本前处理方法和色谱条件优化,对15种蘑菇毒素进行0.04、0.10和0.40 mg/kg三水平加标回收实验,方法准确度为76.6%~109.2%,精密度为0.3%~7.6%;15种蘑菇毒素的线性范围为10~1000μg/L,线性相关系数(r)在0.9980~0.9994之间;其中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、光盖伞素和鹅膏蕈氨酸的方法检出限(limits of detection,LODs)和定量限(limits of quantification,LOQs)分别为10μg/kg和30μg/kg,二羟鬼笔毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽、羧基三羟鬼笔毒肽、毒蝇碱、蝇蕈醇、甲基裸盖菇素、鹿花菌素、脱磷酸裸盖菇素、奥来毒素和鬼伞菌素的LODs和LOQs分别为20μg/kg和60μg/kg,采用QuEChERS前处理方法对野生菌样本进行处理,样本基质效应系数K值在0.91~1.08之间。结论所建立的野生菌样本前处理方法对15种蘑菇毒素的定量测定无基质干扰,15种蘑菇毒素的UPLC-MS/MS和MRM-IDA-EPI分析方法结果准确、重现性好、灵敏度高,该方法适用于有毒野生菌引起的食源性中毒定量分析和定性筛查。

基于稳定同位素内标的高效液相色谱串联质谱法测定乳制品中L-岩藻糖的含量

基于稳定同位素内标(SIIS),构建了一种简单的乳制品前处理方法,将乳制品中的L-岩藻糖(L-Fuc)高效地游离出来,利用高效液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)建立了乳制品中L-岩藻糖含量的定量测定方法.首次引入SIIS来定量乳制品中的L-岩藻糖,采用电喷雾离子源(ESI)负离子扫描模式和多重反应监测(MRM)模式进行定量分析.研究过程中对质谱鉴定、色谱条件、样品前处理过程都进行了方法的比较优化,并检测了纯牛奶、酸奶等5种乳制品中L-岩藻糖的含量.L-岩藻糖在0.001~1.000μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,相关系数为0.99999,样品加标回收率在71.67%~117.27%之间,相对标准偏差(RSD)在2.00%~9.64%之间,检出限为0.1 ng·mL^(-1),定量限为0.5 ng·mL^(-1).该方法样品前处理简单,灵敏度高,检测结果准确,可定量不同乳制品中L-岩藻糖的含量,为其他领域中L-岩藻糖含量的测定提供了可借鉴的方法.

QuEChERS结合液相色谱质谱联用技术测定动物源性食品中N-二甲基亚硝胺

目的:建立高效液相色谱质谱联用技术定量检测动物源性食品中的N-二甲基亚硝胺。方法:样品前处理粉碎后经乙腈提取,低温离心除去油脂,QuEChERS净化,采用多反应监测模式测定。结果:N-二甲基亚硝胺校准曲线在2.0~200.0 ng·mL^(-1)线性关系良好,相关系数为0.998 5,方法检出限和定量限分别为0.5μg·kg^(-1)和3.0μg·kg^(-1),回收率为86.8%~90.8%,相对标准偏差在2.2%~3.1%。结论:该方法取样量少,试剂消耗量少,提取和净化流程简便,定性和定量准确度好,可用于检测动源性食品中N-二甲基亚硝胺。

高效液相色谱质谱联用仪测定饮用水及水源水中的乙草胺

采用高效液相色谱质谱法对水中的乙草胺进行定量、定性测定,首先用0.22μm的微孔滤膜对样品进行前处理,进样量为2μL,以乙腈-水(5 mmol甲酸铵,1%冰醋酸)为流动相进行梯度洗脱,通过多重反应监测(MRM)模式对目标化合进行定量,结果表明该方法适用于饮用水及其水源水中乙草胺的检测。

QuEChERS-UPLC-MRM-IDA Criteria-EPI测定红曲米中洛伐他汀

目的：针对红曲米,建立其中所含洛伐他汀化学成分的QuEChERS-超高效液相色谱-MRM扫描（多重反应监测）-IDA Criteria-增强子离子扫描（EPI）的检测方法。方法：色谱柱为Phenomenex Luna C18（2）100A（150 mm×2.00 mm,3μm）;柱温为35℃;流动相为10 mmol/L乙酸铵以乙酸调节p H值至3.0及乙腈,梯度洗脱;流速为0.2 m L/min;以优化后的质谱参数采集信号。结果：检出限浓度为0.5 ng/m L;定量限浓度为1.0 ng/m L;线性范围为定量限浓度~500 ng/m L;在线性范围内相关系数在0.99以上;加样回收率为99.0%~99.9%。结论：本方法准确,灵敏度高,专属性好;能用于红曲米中洛伐他汀化学成分的同时定性及定量检测。

基于LC-MS/MS法检测水痘减毒活疫苗中的红霉素残留

目的:采用液质联用(LC-MS/MS)技术检测水痘减毒活疫苗中的红霉素残留。方法:以乙腈为蛋白沉淀剂提取水痘减毒活疫苗中的红霉素;液相分离采用Shiseido CAPCELL PAK C18 MG(150 mm×2.0 mm,5μm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),进样量为10μL;质谱检测采用电喷雾(ESI)正离子模式和多重反应监测(MRM)扫描方式。结果:红霉素在水痘减毒活疫苗中的检出限(LOD)为0.02 ng·mL^(-1),定量限(LOQ)为0.04 ng·mL^(-1),在0.04~40 ng·mL^(-1)的浓度范围内线性回归方程为Y=1.46×10^(5)X+1.12×10^(4)(r=0.9996);方法的日内和日间精密度均小于5%,准确度在95%~115.1%范围内;回收率在96.5%~100.0%范围内;基质效应在-20%~20%范围内。结论:本研究应用LC-MS/MS技术建立的水痘减毒活疫苗中残留红霉素的检测方法专属性好、灵敏度高且重现性好,可用于该疫苗中红霉素残留量的检测。

复方丹参滴丸的体内代谢产物分析

目的快速分析复方丹参滴丸中原儿茶醛、原儿茶酸、丹参素3种成分在大鼠尿和粪中的代谢产物。方法大鼠灌胃给予复方丹参滴丸,收集12 h内的尿和粪,采用LC-MS/MS法,以多反应监测(MRM)和二级全扫描质谱(full scan MS2)方式,对大鼠尿和粪中复方丹参滴丸3种成分的代谢产物进行分析和鉴定。结果在大鼠尿中检测到2种原形和6种代谢物,在粪中检测到1种原形和1种代谢物。结论本方法简便、快速,适用于复方丹参滴丸体内代谢产物的分析。

气相色谱-串联质谱法快速测定调味品中3种糠醛类物质

建立了同时测定调味品中糠醛、5-甲基糠醛和5-羟甲基糠醛的气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)。对样品的前处理方法及GC-MS/MS分析条件进行优化,样品经乙酸乙酯萃取,GC-MS/MS多反应监测模式(MRM)进行测定。3种糠醛类物质在0.001～20 mg/L范围内均呈良好的线性关系,相关系数为0.999 0～0.999 5;检出限(S/N=3)均为0.005 mg/kg,加标回收率为86%～95%。该法简便、快速、溶剂用量少,可消除调味品中复杂基质的干扰,结果准确可靠、灵敏度高,适用于调味品中3种糠醛类物质的同时测定。

液相色谱-串联质谱法同时检测花生油中4种黄曲霉毒素

建立同时测定花生油中4种黄曲霉毒素(包括黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2)的液相色谱-串联质谱法(liquidchromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)。该方法经甲醇-水、三氯甲烷依次提取样品,以C18柱分离,流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(梯度洗脱),采用电喷雾正离子多反应监测(multiple reaction monitor,MRM)模式检测。结果表明:标准曲线在0.0～20.0μg/kg进样范围内线性良好;用本法测定4种黄曲霉毒素的回收率在70.8%～108.0%(低加标水平)、82.4%～104.5%(中和高加标水平)之间,相对标准偏差在5.7%～9.7%之间。运用所建立的方法对市售19种不同品牌和批次的花生油中的黄曲霉毒素进行分析,结果显示该方法选择性强、灵敏度高,适用于花生油中4种黄曲霉毒素的定性、定量测定。

HPLC-MS/MS检测中药保健品中非法添加成分的研究

目的采用高效液相色谱-串联质谱技术（HPLC-MS/MS）,建立同时测定某“中药保健品”中非法添加的4种降糖药二甲双胍、苯乙双胍、罗格列酮、格列苯脲的方法。方法采用Thermo BDS Hypersil C8（2.1mm×100 mm,2.4μm）色谱柱,0.2%甲酸水溶液（A）和乙腈-甲醇（6∶4,v/v）（B）为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,在电喷雾正离子模式下,以多反应监测（MRM）模式测定,定量离子对为m/z 129.9→70.9（二甲双胍）、m/z 205.9→59.9（苯乙双胍）、m/z 357.9→134.9（罗格列酮）、m/z 494.0→169.0（格列苯脲）。结果同时检出了4种降血糖化学药物。检出限为0.06～0.5 ng·mL^-1,定量限为0.21～1.62 ng·mL^-1,在3个不同浓度的添加水平下,4种化学药物的平均回收率为66.3%～110.2%,相对标准偏差（RSD）为2.3%～12.2%。结论该方法可快速、准确地检测保健食品中非法添加二甲双胍、苯乙双胍、罗格列酮、格列苯脲4种降血糖化学药,具有专属性强、灵敏度高的特点。

茶叶中高氯酸盐的液相色谱-串联质谱测定方法研究

针对茶叶中出现的高氯酸盐污染问题,建立液相色谱-串联质谱联用仪测定方法。样品经100 m L热水提取,于10 000 r/min下离心10 min,上清液经C18固相萃取柱净化,ZORBAX SAX色谱柱分离,以100 mmol/L乙酸铵溶液-甲醇-乙腈为流动相进行梯度洗脱,多重反应监测（MRM）,外标法定量。结果表明,高氯酸盐质量浓度在0.5~200.0μg/L范围内与峰面积呈现良好线性关系,方法的加标回收率为98.9%~101.9%,相对标准偏差均〈6%,检出限为0.004 mg/kg,定量限为0.01 mg/kg,具有操作简单、灵敏度高、稳定性好等优点,可很好地满足茶叶中高氯酸盐的检测和质量监管需要。

LC-MS/MS测定尿液中的11种多环芳烃生物标志物

为评估烟气环境中人体对多环芳烃的暴露状态,考察了固相萃取柱、色谱柱和质谱条件对分析结果的影响,建立了测定尿液中1-羟基萘（1-OHNap）、2-羟基萘（2-OHNap）、1-羟基芘（1-OHPyr）、6-羟基（6-OHChr）、3-羟基芴（3-OHFlu）、1-羟基菲（1-OHPhe）、2-羟基菲（2-OHPhe）、3-羟基菲（3-OHPhe）、4-羟基菲（4-OHPhe）、9-羟基菲（9-OHPhe）、2-羟基芴（2-OHFlu）等11种多环芳烃生物标志物的固相萃取-液相色谱-串联质谱方法（LC-MS/MS）。以1-羟基芘-d9（1-OHPyr-d9）、3-羟基菲-d9（3-OHPhe-d9）和1-羟基萘-d8（1-OHNap-d8）为内标,通过β-葡糖苷酸/芳基硫酸酯酶酶解、Bond Elut C18小柱固相萃取、Agilent ZORBAX Eclipse PAH色谱柱分离和多反应监测模式（MRM）质谱检测了尿液中多环芳烃的羟基代谢物（OHPAHs）。结果表明,OHPAHs的定量限为6~130 pg/mL,r为0.9991~1.0000,加标回收率为72.45%~124.50%,日内精密度为1.49%~7.35%,日间精密度为2.90%~12.00%。该方法适用于尿液中多环芳烃生物标志物的分析。

气相色谱-串联质谱法快速测定乳制品中三聚氰胺及其3种类似物

建立了气相色谱-串联质谱（GC-MS/MS）快速测定乳制品中三聚氰胺、三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸二酰胺的方法.样品用混合溶剂提取后,取少量提取液氮气吹干,硅烷化试剂衍生化后,采用GC-MS/MS多反应监测模式（MRM）测定.三聚氰胺及其3种类似物在0.01～1.0 mg/L浓度范围内均呈现良好的线性关系,线性相关系数分别为0.999 8、0.998 2、0.999 9、0.999 8;检出限均为0.05 mg/kg （S/N=3）,加标回收率为92.5％～102.5％.该方法操作简便、快速,能消除乳制品中复杂基质的干扰,结果准确可靠、灵敏度高,适用于乳制品中三聚氰胺及其3种类似物的同时测定.

高效液相色谱-三重四级杆/复合线性离子阱质谱测定鼠脑组织中神经甾体类化合物

建立了高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定鼠脑组织中6种神经甾体类激素（别孕烯醇酮、孕烯醇酮、孕酮、脱氧皮质酮、四氢脱氧皮质酮、去氢表雄酮）的方法。采用Agilent XDB-C18色谱柱,以5 mmol/L乙酸铵-甲醇为流动相,梯度洗脱分离,在电喷雾正离子模式下,以多反应监测（MRM）扫描模式采集数据,基质匹配内标法定量。孕酮和脱氧皮质酮在0.10~10 ng/m L范围内呈良好的线性关系,别孕烯醇酮、孕烯醇酮、四氢脱氧皮质酮、去氢表雄酮在0.50~10 ng/m L范围内呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99;在0.4,4.0和8.0 ng/m L加标水平下的平均回收率为91.2%~115.5%;相对标准偏差（RSD,n=6）为0.87%~8.8%;检出限为0.04~0.20 ng/m L,定量限为0.10~0.50 ng/m L。

同位素编码衍生-分散液液微萃取/超高效液相色谱-串联质谱检测大鼠脑微透析液中儿茶酚胺

为实现微量大鼠脑微透析液中3种儿茶酚胺化合物的高灵敏检测,采用d0/d3-10-甲基-吖啶酮-2-磺酰氯（d0/d3-MASC）为同位素编码衍生化试剂,联合使用超声辅助分散液液微萃取技术,建立了超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）快速测定多巴胺（DA）、肾上腺素（EP）和去甲肾上腺素（NE）的分析方法。分别以d0-MASC和d3-MASC衍生微透析液样品和对照品,混合后采用分散液液微萃取技术富集净化,再进行UHPLC-MS/MS检测,以d3-MASC衍生物作为相应d0-MASC衍生物的内标物进行定量。结果表明,在p H 10.8乙腈水溶液中于37℃衍生反应3 min,即可实现待测物的完全分离与检测,3种儿茶酚胺化合物的线性范围为0.02~10.0 nmol/L,相关系数大于0.995,检出限为0.005~0.010 nmol/L,定量下限为0.018~0.040 nmol/L。该方法与已报道方法相比具有显著优势,能够满足大鼠脑微透析液中儿茶酚胺的检测要求。

UPLC-MS/MS法同时测定地表水中6种双酚类化合物残留

为了准确地检测双酚类化合物在地表水中的残留水平,建立了固相萃取-超高效液相色谱-电喷雾串联质谱(SPE-UPLC-ESI-MS/MS)法分析水中包括双酚A在内的6种双酚类化合物残留。样品经HLB固相萃取柱富集和净化后,采用Waters Acquity UPLC BEH T3色谱柱,以2mmol/L乙酸铵-甲醇溶液和2mmol/L乙酸铵-水溶液作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源电离,负离子多反应监测模式进行定性和定量分析。结果表明:6种双酚类化合物在0.10~50.0μg/L或0.50~100μg/L浓度范围内的线性关系良好,相关系数在0.997~0.999之间,方法的检出限为0.05~0.31ng/L;高、中、低三个添加水平的回收率为74.8%~122%,相对标准偏差在3.33%~12.4%之间。采用该方法对杭州市部分河流和水库的地表水样品进行分析,共检出5种污染物。该方法灵敏、准确、检测范围广、分析速度快,适用于实际水样中6种双酚类化合物的同时测定。