多重基因遗传表达分析系统及其应用研究进展

核酸检测技术广泛用于生命科学、微生物学及医学领域。随着分子生物学的发展,在经典技术的基础上研究人员又开发出多种新型检测技术。其中多重基因遗传表达分析系统(gene expression profiler genetic analysis system,Ge XP)技术作为聚合酶链式反应和芯片的换代技术,具有特异性好、灵敏度高的特点,能够同时检测多个目的基因,真正意义上实现了高通量检测。本文详细介绍了Ge XP技术的原理以及优缺点,并对Ge XP技术在畜牧兽医研究、转基因食品检测、微生物检测及医学研究中的应用进行阐述,以期为该技术将来在食品检测方面的推广提供参考。

Bio-Plex悬浮芯片系统检测两种实验兔白介素基因的差异表达

目的采用液相悬浮芯片系统同时测定实验兔圆小囊中IL-1β、IL-1R1、IL-8、IL-8RA和IL-15各基因的表达情况,并对该方法进行评价。方法利用Affymetrix的Panomics QuantiGene Plex 2.0 Assay中bDNA信号放大和多磁珠分析技术,来同时检测两种实验兔圆小囊中多重mRNA并定量。建立实验兔免疫相关白介素基因的液相悬浮芯片检测方法。结果可同时检测IL-1β、IL-1R1、IL-8、IL-8RA和IL-15各基因的含量,并发现WHBE兔IL-15基因的相对表达量显著高于JW兔(P<0.05),IL-1R1基因的相对表达量显著高于JW兔(P<0.01),IL-8RA基因在WHBE兔中的相对表达量也高于JW兔(P<0.05)。结论建立了实验兔白介素基因的液相悬浮芯片检测方法,WHBE兔的IL-15、IL-1R1和IL-8RA基因表达量较高,可能与WHBE兔独特的免疫学特性有关。

一种新型多重PCR技术在肿瘤研究中的应用

多重基因表达遗传分析系统(GenomeLab gene expression profiler genetic analysis system,GeXP)是一种全新的基因表达谱定量分析平台。它能够在同一反应中对多至35个基因进行定量检测和分析,并将通用引物与特异引物相结合。它采用荧光毛细电泳分离技术对多重PCR产物进行定量检测和分析。本文重点综述了多重基因表达遗传分析系统的技术原理及其在肿瘤研究中的应用。

7种假丝酵母菌耐药相关基因GeXP检测方法的建立

目的:利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立一种可同时检测7种假丝酵母菌耐药相关基因RNA表达水平的方法。方法:设计7种(MDR1、FlU1、CDR1、CDR2、ADH1、ERG3、ERG11)已知与白假丝酵母耐药相关基因的特异性引物及假丝酵母ITS基因参照引物,优化多重反应体系及反应条件,用热带假丝酵母标准株来验证多重反应体系的特异性,通过比较标准株和临床敏感株,剂量依赖株及耐药株各基因表达峰图,分析不同菌株各基因表达差异。结果:经过优化反应条件,可同时扩增出假丝酵母耐药相关的7种基因特异片段,耐药株和剂量依赖株的ERG11、CDR2、CDR1、MDR1和ERG3基因的相对表达量与敏感株相比均有不同程度的增高。结论:建立了多重基因表达检测体系,GeXP多重基因表达检测方法具有高通量、特异性强、灵敏度高和快速等优点。

呼吸道病毒感染患儿外周血淋巴细胞亚群测定及临床意义

目的分析呼吸道合胞病毒（humanrespiratorysyncytialvirus，HRSV）、副流感病毒3型（humanparainfluenza virus Ⅲ，HPIV3）和鼻病毒（humanrhinovirus，HRV）感染患儿外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞及NK细胞的变化，并探讨其临床意义。方法病例对照研究。收集2014年2月-2014年11月河北省儿童医院146例急性呼吸道感染患儿标本，应用GeXP多重基因表达系统及RT—PCR扩增技术检测20种常见呼吸道病毒，选择呼吸道合胞病毒感染50例，副流感病毒III型感染46例，鼻病毒感染50例。50名健康儿童作为对照组。采用流式细胞仪检测病毒感染患儿及健康对照组儿童外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞和NK细胞值。病毒感染组与正常对照组的比较采用两独立样本比较的Mann-WhitneyU检验，不同病毒感染组间的比较采用多个独立样本比较的Kruskal-WallisH检验。结果HRSV组、HPIV3组和HRV组患儿外周血CD3＋、CD8＋、CD3＋CD4＋CD8＋、CD56＋水平均明显低于健康对照组（PI均分别为〈0．001，〈0．001，〈0．001，和0．002；P2分别为〈0．001，〈0．001，0．002和0．043；P3分别为〈0．001，〈0．001，0．001和〈0．001），CDl9＋水平及CD4＋／CD8＋比值较对照组均显著升高（P1为0．004和〈0．001；P2、P3均〈0．001）。HRSV组和HPIV3组患儿的外周血CD4＋水平较对照组明显升高（P分别为〈0．001和0．001），但HRV组患儿外周血CD4＋水平与对照组相比，差异无统计学意义（P=0．319）；三组病毒感染组分别比较，HRSV组和HRV组CD4＋水平（P=0．034）和CD4＋／CD8＋比值（P=0．018）差异有统计学意义，其他均无统计学意义。结论HRSV、HPIV3及HRV感染均可导致机体细胞免疫功能明显紊乱，且三种病毒感染后外周血淋巴细胞亚群变化趋势一致，均可使病情恶化或病程延长。及时准确的了解病毒感染患儿外周血淋巴细胞亚群的变化能更好地认识疾病的转归，且有助于指导临床的治疗。