禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒灵敏性试验

为了确定深圳出入境检验检疫局和深圳太太基因工程有限公司联合研制的禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒对H5和H9亚型禽流感的灵敏度,通过测定已知鸡胚半数致死量(ELD_(50))的标准毒株的进行了定量。

金黄色葡萄球菌及毒素多重实时荧光PCR检测技术及其试剂盒性能测试

[目的]本文基于自筛的金黄色葡萄球菌特异性靶基因ASL18_04625(sa19)以及2种重要的毒素基因(A型和U型肠毒素,sea344和seu222),建立一种同时检测金黄色葡萄球菌及其肠毒素的多重实时荧光PCR检测方法。[方法]通过优化引物浓度等因素,确定最适多重实时荧光PCR反应体系,并将此检测体系组装成试剂盒,对人工污染样品和实际样品进行检测。[结果]选用1.5×Syto9 Green作为荧光染料,优化后的反应体系为0.015 U·μL^(-1)Taq酶,0.10 mmol·L^(-1)dNTP,终浓度分别为0.05、0.10和0.20μmol·L^(-1)的3对引物。sa19的基因组灵敏度为40.7 pg·μL^(-1),sea344、seu222的基因组灵敏度均为4.07 pg·μL^(-1);sa19的菌液浓度灵敏度为1.19×10^(3)CFU·mL^(-1),sea344、seu222的菌液浓度灵敏度均为1.19×10^(4)CFU·mL^(-1)。构建的试剂盒组内和组间重复率均为100%。在经历60次反复冻融、72 h泡沫箱储藏、-20℃储藏90 d、4℃储藏45 d后,试剂盒检测结果仍没有显著变化,同时具有良好的特异性与抗干扰能力。[结论]本研究针对食源性金黄色葡萄球菌建立的多重实时荧光PCR法,具有快速、特异性强、灵敏度高的优点,并组建成适用于实际检测应用的商品化试剂盒,在食品安全检测方面具有广阔的应用前景。

大肠杆菌O157:H7实时荧光定量PCR快速检测试剂盒的组建及活菌检测

该研究组建了基于高分辨熔解曲线分析的大肠杆菌O157:H7实时荧光定量PCR快速检测试剂盒,对试剂盒的灵敏度、特异性、抗干扰能力和检测人工污染样品的情况进行了评估,并在组建试剂盒的基础上,利用叠氮溴化丙锭(PMAxx)对活/死细胞的选择性,构建了大肠杆菌O157:H7活菌定量检测技术。结果显示,试剂盒特异性强,仅大肠杆菌O157:H7血清型有阳性扩增;最低检测限为84CFU/m L;在四种常见食源性致病菌干扰下能准确检测出大肠杆菌O157:H7;在人工污染食品样品的实际检测中,可检测到初始污染量为7.97×10^(0)CFU/m L的样品;通过单因素变化试验对PMAxx处理的各项参数进行优化,确立了曝光时间11 min、暗孵育时间20min、PMAxx浓度30μmol/L的最优反应体系,并与本研究组建的实时荧光定量PCR试剂盒相结合,建立了在3.4×10^(7)-3.4×10^(2)CFU/m L浓度范围内Ct值与菌液浓度线性关系良好的大肠杆菌O157:H7活菌定量检测方法,为食源性致病菌快速定量检测提供技术支持。

珠海检验检疫局成功研发H7N9亚型禽流感病毒双重荧光RT-PCR检测试剂盒

不久前，珠海检验检疫局成功研发了H7N9亚型禽流感病毒双重荧光RT-PCR检测试剂盒，并应用于活禽的H7N9禽流感病毒检测和监控，取得了良好的防控效果。该H7N9禽流感诊断试剂盒可为H7N9禽流感病毒监测和疫情排查提供快速、准确的病原学检测方法，为加强供港澳活禽检验检疫，做好供港澳家禽注册养殖场H7N9禽流感防控工作提供技术支持。

国家三类新兽药禽流感病毒H7亚型荧光RT-PCR检测试剂盒

一、兽药名称通用名:禽流感病毒H7亚型荧光RT-PCR检测试剂盒。英文名:Avian Influenza Virus Subtype H7 Real-time RT-PCR Detection Kit商品名:无。

两种H7N9流感病毒荧光RT-PCR试剂盒的敏感性和特异性评价

为评价两种(A、B)H7N9流感病毒荧光RT-PCR试剂盒的检测性能,对50份疑似感染H7N9流感病毒的禽拭子样品进行H7N9流感病毒核酸检测,使用TG-ROC分析方法筛选荧光RT-PCR最适Ct值(阈值),通过2×2列联表分析两种试剂盒的敏感性和特异性,并用Kappa检验评估其一致性。结果显示:以国家禽流感参考实验室的鸡胚病毒分离鉴定结果为“金标准”,A和B两种试剂盒的敏感性、特异性分别为90.9%(10/11)、56.4%(22/39)和54.5%(6/11)、94.9%(37/39);两种试剂盒检测结果差异较大,Kappa值为0.28。TG-ROC分析得出:A试剂盒的检测阳性最适阈值为33,对应的敏感性和特异性为90.91%和92.31%;B试剂盒的检测阳性最佳阈值为37,对应的敏感性和特异性分别为81.82%和87.18%。通过调整阈值,A试剂盒的敏感性和特异性均达到90%以上,B试剂盒均达到81%以上,Kappa值为0.85,检测结果一致。结果表明,虽然不同H7N9流感病毒荧光RT-PCR试剂盒的检测性能有差别,但通过调整阈值,可以达到检测所需的最适敏感性和特异性,从而增加临床检测结果的可靠性。本研究为H7N9流感病毒检测试剂盒的应用提供了指导。

基于实时荧光定量PCR的番木瓜多重PCR高效检测方法

以pCaMV35S基因核酸检测试剂盒反应体系为基础,添加多重PCR反应所需的目标基因引物和番木瓜(Carica papaya L.)DNA,进行多重PCR反应,同时考察不合成荧光探针的情况下对目标基因进行实时荧光定量检测。结果表明,在实时荧光定量PCR反应体系中,多重PCR扩增的基因条带比常规PCR扩增的基因条带更亮,在不合成荧光探针的情况下实现目标基因的实时荧光定量PCR反应,以期建立一种基于实时荧光定量PCR的多重PCR检测方法。

利用比色卡黄龙病快速检测试剂盒对柑橘黄龙病的田间检测试验结果初报

黄龙病是柑橘生产上的一种毁灭性病害,由韧皮部限制性细菌Candidatus Liberibacter导致。感染黄龙病的柑橘树的叶片有异常高淀粉积累,因此开发出了基于碘-淀粉显色法的黄龙病快速检测试剂盒。将不同浓度的可溶性淀粉溶液进行碘-淀粉显色反应,制作成快速检测试剂盒配套的比色卡,用来快速确认叶片淀粉值区间。根据不同采样时间的健康树和黄龙病树的叶片淀粉值差异进行统计数据分析,确定了7—10月为黄龙病快速检测试剂盒的适宜采样检测时间。根据显色易辨性和检测准确率将淀粉质量浓度3000 ppm确定为适宜的黄龙病阳性叶片淀粉值界限,即检测叶片淀粉值≥3000 ppm判定为黄龙病阳性。通过田间随机取样发现,快速检测试剂盒与实时荧光定量PCR检测方法的一致性约为80%。该黄龙病快速检测试剂盒对田间黄龙病的快速筛查具有重要意义,可作为实时荧光定量PCR检测方法的前序筛查辅助手段。

肉及肉制品牛源性成分核酸检测试剂盒评价技术的研究

目的探索适合评价核酸检测试剂盒的评价方法。方法本研究采用室内技术参数验证的方法对某公司的肉及肉制品牛源性成分核酸检测试剂盒(实时荧光PCR法)进行评价。对检测的灵敏度特异性、假阳性/假阴性、检测限、耐受性及与标准方法的一致性共6个方面的参数分析评价。结果评价结果表明,对生鲜肉、酱卤肉、熏烤肉、速冻调理肉制品4类共40种肉制品,试剂盒检测结果与标准检测方法检测结果无显著差异,即试剂盒可以满足肉及肉制品牛源性成分核酸检测的需求。结论本文为检测机构筛选合适的牛源性成分检测试剂盒有一定的借鉴意义,并对建立核酸检测试剂盒的评价方法提供一定的技术帮助。

新型H7N9型流感病毒多重荧光RT—PCR检测方法建立

为研制新型H7N9亚型流感病毒快速检测试剂盒，珠海出入境检验检疫局的工作人员根据GenBank中公布的新型H7N9亚型（2013年）流感病毒血凝素抗原（HA）和神经氨酸酶抗原（NA）的基因序列，设计两套特异性的引物和探针，建立基于TaqMan探针的多重荧光RT—PCR快速检测新型H7N9亚型流感病毒方法。

ReEBOV抗原快速检测试剂盒用于检测埃博拉病毒感染:现场验证研究

目前,埃博拉病毒感染的诊断需将静脉血样运送至生物安全实验室,用实时RT-PCR进行检测,检测周期过长,导致病人病情恶化,感染加剧。因此,对于该病毒感染的诊断迫切需要床前快速检测测试剂盒现场验证的结果。

不同禽流感病毒实时荧光RT-PCR试剂盒的比较

禽流感（AI）是禽类的病毒性流行性感冒,是由A型流感病毒引起禽类的一种从呼吸系统到严重全身败血症等多种症状的传染病。由于禽流感病毒（AIV）高度的变异性以及新亚型病毒的出现,禽流感的防控面临着严峻考验[1]。地市级动物疫病防控部门实验室已把荧光RTPCR方法作为初步监测禽流感病毒的首选方法,但市场上禽流感病毒荧光RT-PCR试剂盒众多,不同厂家的试剂盒的特异性、

RT-PCR法微量加样操作优化

目的比较3种不同的内标加样方式对多重实时荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测新型冠状病毒核酸的试验结果及内标异常率的影响,评价3种微量液体加样操作方式对试验结果监控的有效性,以便选择合适的微量液体加样操作方案。方法针对核酸提取环节中试剂和内标的加样,采取3种不同的方式把试验分成3组,每组各检测30批次标本,每批次检测的标本量为42~94份,分别计算3组内标正常和内标异常的标本数,对各组因内标异常而导致的复检进行统计学分析。结果在各组的30个批次检测结果中,A组共检测2644份标本,其中20个批次共62份标本出现内标异常,总复检率为2.24%,B组共检测2641份标本,其中21个批次共83份标本出现内标异常,总复检率为3.14%;C组共检测2723份标本,其中9个批次共11份标本出现内标异常,总复检率为0.40%。C组内标异常的标本数较A、B组明显减少,复检率较A、B组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于内标多重实时荧光RT-PCR法进行核酸检测,对于微量的内标加样,使用合适的稀释液进行倍数稀释,放大加样量,可减少微量加样的操作误差,提高检测结果的有效性。

博尔纳病病毒实时荧光定量PCR诊断试剂盒的评价与应用

目的评价博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)实时荧光定量PCR(FQ RT-PCR)试剂盒的各项指标,并了解其实际应用效果。方法使用BDVOL持续感染细胞株、非BDV病毒序列转染的OL细胞、正常的OL细胞,对BDV RT-PCR试剂盒的敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评估,同时检测部分临床病人和动物外周血液RNA。结果试剂盒可以检测出的病毒RNA最低浓度为102,相当于1.5个病毒拷贝数。特异性好,无非特异检出。不同批次的试剂盒的检测结果变异系数接近1。加速破坏的试剂盒和正常试剂盒检测结果之间变异系数在2以内。对临床病人检测阳性率为3.6%,对动物检测阳性率为4.4%。结论试剂盒敏感性、特异性、重复性和稳定性均佳,是BDV基础研究、流行病学调查、临床检测的良好工具。

从21天缩短到4小时 我禽流感快速检测技术获突破

从2月3日举行的国家科技攻关课题“疯牛病、禽流感病原检测技术研究”专家验收会上获悉，我国禽流感快速检测技术获重大突破：研制的禽流感荧光RT-PCR检测试剂盒，使禽流感检测时间从过去的21天缩短到4小时，还通过了禽流感病毒检测的4项国家标准。该成果已在全国16个检验检疫局、24个出1：3养禽企业、11个省级动检站得到了应用。

我国已初步建立食品安全检测技术体系

我国已初步建立了食品安全检测技术体系，为保障我国百姓“从农田到餐桌”的食品安全提供了有力保障。截至目前，我国食品安全检测技术体系建立了219项实验室检测方法，其中农药多残留检测方法可检测150种农药，兽药多残留检测方法可检测122种兽药，并研制出了81个检测技术相关试剂（盒）和现场快速检测技术。此外，针对H5、H7、H9等不同亚型禽流感病毒的荧光RT-PCR检测试剂盒的研制成功，在保证我国禽肉进出口贸易安全中发挥了重要作用。