多重巢式RT-PCR对骨髓增殖性肿瘤中PDGFRα融合基因的快速检测

本研究旨在探讨多重巢式RT-PCR在骨髓增殖性肿瘤(MPN)中快速检测血小板衍生生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptor alpha,PDGFRα)融合基因的应用价值。利用多重巢式RT-PCR方法对146例MPN患者的骨髓或外周血标本进行PDGFRα融合基因的快速检测。结果表明,146例MPN患者的骨髓或外周血标本中,有6例出现PDGFRα融合基因,其阳性率为4.11%,其中4例患者服用酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼治疗,均获疗效。结论:本研究建立的多重巢式RT-PCR方法具有灵敏度高、特异性好、检测快速等优点,可以准确快速确定MPN的分子类型,并为该病提供诊断和治疗的理论依据。

阿胶的半巢式-多重PCR鉴别方法研究

采用半巢式-多重PCR(聚合酶链式反应)法鉴别阿胶中是否掺杂有马、猪和牛源性成分。首先采用液氮研磨法从阿胶中提取高质量的DNA(脱氧核糖核酸),以通用引物P1和P2进行第一轮扩增,并将扩增产物作为第二轮PCR的模板;再以包含通用引物P1和4种物种(驴、马、猪和牛)特异性引物A、B、C和D的混合引物进行第二轮多重PCR扩增;最后电泳检测第二轮扩增产物,根据电泳条带的分子量大小,判断阿胶产品的动物原材料是否掺假。结果表明,采用本方法可观察到不同动物DNA分子量之间的明显差异,通过DNA电泳结果直接判断阿胶产品中是否掺假。

RT-PCR法微量加样操作优化

目的比较3种不同的内标加样方式对多重实时荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测新型冠状病毒核酸的试验结果及内标异常率的影响,评价3种微量液体加样操作方式对试验结果监控的有效性,以便选择合适的微量液体加样操作方案。方法针对核酸提取环节中试剂和内标的加样,采取3种不同的方式把试验分成3组,每组各检测30批次标本,每批次检测的标本量为42~94份,分别计算3组内标正常和内标异常的标本数,对各组因内标异常而导致的复检进行统计学分析。结果在各组的30个批次检测结果中,A组共检测2644份标本,其中20个批次共62份标本出现内标异常,总复检率为2.24%,B组共检测2641份标本,其中21个批次共83份标本出现内标异常,总复检率为3.14%;C组共检测2723份标本,其中9个批次共11份标本出现内标异常,总复检率为0.40%。C组内标异常的标本数较A、B组明显减少,复检率较A、B组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于内标多重实时荧光RT-PCR法进行核酸检测,对于微量的内标加样,使用合适的稀释液进行倍数稀释,放大加样量,可减少微量加样的操作误差,提高检测结果的有效性。

HIV-1结构基因多重巢式RT-PCR方法检测

目的建立一种简便、可靠的可用于诊断人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染的多重巢式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法。方法针对广西壮族自治区HIV-1主要流行毒株pol、gag和env基因区设计PCR引物,建立同时扩增3个基因的多重巢式RT-PCR方法,检测118例HIV-1阳性样本和48例HIV-1阴性样本,并与免疫印迹法检测结果比较,对多重巢式PCR方法进行评价。结果多重巢式RT-PCR方法的检测下限为250 copies/mL,灵敏度和特异度分别为96.6%,97.9%,重复性为98.3%,与免疫印迹法的一致性为97.6%。结论本研究建立的多重巢式RT-PCR检测方法具有高灵敏度、高特异度、重复性好、快速等优点,可作为一种快速、简便、可靠的HIV-1感染辅助诊断方法。

多重RT-PCR方法同时检测29种白血病融合基因

目的 探讨同时检测白血病 2 9种染色体结构畸变形成的融合基因与MIC分型的关系。方法 采用多重巢式RT PCR方法对 191例儿童白血病 2 9种染色体结构畸变形成的融合基因进行分析。结果 191例白血病患者骨髓或外周血标本中 ,86例 ( 45 .0 %)具有 14种染色体结构畸变产生的融合基因 ,包括SIL/TAL1、MLL/AF1q、E2A/PBX1、MLL/AF6、AML1/ETO、MLL/AF9、TEL/ABL、BCR/ABL、MLL/AF10、dupMLL、MLL/ENL、TEL/AML1、PML/RARα、CBFβ/MYH11。在 31例患者中检出HOX11原癌基因活化 ,其中 15例 ( 7.8%)伴有其它染色体结构畸变产生的融合基因 ,16例 ( 8.4%)只检出HOX11原癌基因的活化 ,未伴有其它融合基因。结论 采用多重巢式RT PCR方法 ,可快速分析 2 9种染色体结构畸变产生的融合基因 ,可同时筛选出 2 9种急性白血病的常见染色体易位 ,帮助化疗和骨髓移植后微量残留病的检测。

基于多重RT-PCR检测法的儿童呼吸道病原体流行特征

目的:了解宁波市儿童呼吸道感染病原体的流行特征,为临床防控和诊治提供参考依据。方法:收集2019年7~10月份间宁波市妇女儿童医院就诊急性呼吸道感染患儿的标本共3103例,通过基于毛细电泳的多重RT-PCR法检测常见的13种呼吸道病原体,并对结果进行统计分析。结果:3103例患儿中2053例呼吸道病原体检测阳性,总阳性率为66.16%。检出率前3位分别为肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)33.19%(1030/3103)、鼻病毒(human rhinovirus,HRV)24.20%(751/3103)和腺病毒(human adenovirus,HADV)8.77%(272/3103)。病原体在男性患儿和女性患儿中的检出率分别为65.70%(1157/1761)和66.77%(896/1342),差异无统计学意义(χ^(2)=0.386,P=0.535);在年龄≤1岁组、1~≤3岁组、3~≤6岁组和6~≤16岁组检出率分别为58.02%(626/1079)、74.37%(589/792)、73.78%(543/736)和59.48%(295/496),组间差异具有统计学意义(χ^(2)=84.770,P=0.000);7~10月份检出率依次为71.64%(341/476)、68.81%(536/779)、67.01%(648/967)和59.93%(528/881),差异具有统计学意义(χ^(2)=24.395,P=0.000);单一感染率为52.30%(1623/3103),2种及以上病原体混合感染率为13.86%(430/3103),其中以2种病原体混合感染多见。结论:宁波市儿童呼吸道病原体检出以Mp和HRV为主,病原体检出率在不同年龄阶段和不同月份间存在一定差异。

乳癌前哨淋巴结中mammaglobin检测的临床意义

目的 探讨乳癌前哨淋巴结中mammaglobin检测的临床意义。方法 3 2例乳癌患者术中注射亚甲蓝定位前哨淋巴结 (SLN ) ,巢式RT -PCR法检测腋淋巴结中mammaglobinmRNA的表达。结果 SLN定位成功率为 93 .8% (3 0 /3 2 ) ,SLN与非SLN组微转移检出率有显著统计学差异 (P <0 .0 1) ;在常规病检阴性的淋巴结中 ,巢式RT PCR法的微转移的检出率为 14 .4% (3 8/2 63 )。结论 mamma globin巢式RT PCR法是较常规病理检查更为敏感的检出淋巴结转移的方法。联合SLN定位和巢式RT PCR的检测 ,可明显提高乳癌腋淋巴结微转移的检出效率。

成人急性髓系白血病患者AML1融合基因的快速检测及其临床意义(英文)

本研究旨在检测AML1相关融合基因在成人急性髓系白血病(AML)患者中的发生率,并初步分析AML1融合基因与AML发生、发展及预后的相关性。利用多重巢式RT-PCR方法对168例初治AML患者的骨髓标本进行AML1融合基因(AML1-ETO,AML1-EVI1,AML1-MDS1,AML1-MTG16,AML1-PRDM16,AML1-LRP16,AML1-CLCA2和AML1-PRDX4)的快速检测。结果表明,168例AML初治患者的骨髓标本中,有18例出现AML1融合基因,其阳性率为10.7%,其中12例AML1-ETO阳性(7.14%),2例AML1-EVI1阳性(1.19%),1例AML1-MDS1阳性(0.6%),1例AML1-MTG16阳性(0.6%),1例AML1-PRDM16阳性(0.6%),1例AML1-CLCA2阳性(0.6%)。在AML1-ETO阳性患者中,有10例经过初次化疗达到完全缓解,2例经过了第二次化疗达到完全缓解;2例AML1-EVI1阳性患者经过初次化疗后并没有达到完全缓解;AML1-MDS1,AML1-MTG16,AML1-PRDM16及AML1-CACL2阳性患者经过初次化疗后均未达到完全缓解。结论:AML1融合基因在AML中较为常见,可以作为急性白血病诊断和预后标志,同时也为微小残留病(MRD)的检测提供了分子标志。

胃癌患者外周血中CEA mRNA的检测及其临床意义

目的 探讨胃癌患者外周血中CEAmRNA表达的临床意义。方法 采用巢式RT -PCR法 ,检测 42例胃癌患者外周血中的CEAmRNA表达情况。采用化学发光法检测血清中CEA水平。以胃腺癌细胞株SGC -790 1作为阳性对照 ,以 2 0例正常人外周血作为阴性对照。结果 42例胃癌患者CEAmRNA阳性率为 45 .2 % (19/ 42 ) ,其中 2 5例行根治术的胃癌患者肿瘤切除术后血CEAmRNA阳性率明显高于术前 (5 6.0 %V .s 2 8.0 % ,P =0 .0 3 9)。胃癌患者外周血中CEAmRNA表达与肝转移相关 ,但与血清CEA值、肿瘤部位、UICC分期及分化程度无关。胃腺癌细胞株SGC -790 1中CEAmRNA均呈阳性表达 ;2 0例正常人外周血中CEAmRNA均呈阴性表达。结论 胃癌患者外周血中CEAmRNA表达可作为癌细胞血道播散的标志 ,对判断其预后及指导临床治疗具有重要意义。胃癌手术中应采用“不接触技术”

儿童急性淋巴细胞白血病分子遗传学与临床特征分析

目的分析儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的分子遗传学改变与临床特征的关系。方法收集并分析初诊ALL患儿的临床及实验室资料,所有患儿均完善骨髓细胞学、免疫分型、染色体核型分析并利用多重巢式RT-PCR检测29种白血病基因,检测为阳性者采用split-out RT-PCR验证。结果纳入255例ALL,其中男性153例,女性102例,平均年龄(63.07±2.67)月。共104例检出白血病基因(阳性率40.78%),包括ETV6/RUNX1基因42例、E2A/PBX1基因17例、BCR/ABL基因15例、MLL基因16例、SIL/TAL1基因5例、HOX11基因6例、EVI1基因4例、FLT3/ITD基因1例及SET/CAN基因1例。T-ALL基因检出率低于B-ALL(32.26%vs.41.96%,P<0.05);ETV6/RUNX1、BCR/ABL基因C-B-ALL多见,E2A/PBX1和MLL基因分别多见于pre-B-ALL和pro-B-ALL。B-ALL中,BCR/ABL基因阳性患儿白细胞计数最高(P<0.05);白血病融合基因在各个年龄组中的阳性率不同:<1岁组MLL基因阳性率(62.50%)最高(P<0.05);1~10岁组ETV6/RUNX1基因阳性率(21.13%)最高(P<0.05);>10岁组BCR/ABL基因阳性率(22.73%)最高(P<0.05);>10岁组E2A/PBX1基因阳性率(18.18%)最高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 T-ALL基因检出率较低,提示T-ALL可能需要其它方法进行分子遗传学分型。B-ALL不同年龄组分子遗传学改变存在差异,可能是不同年龄儿童B-ALL化疗效果存在差异的原因之一。