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多重PCR检测猪瘟病毒、猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒的研究——猪瘟病毒、猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒多重PCR引物设计 被引量:14
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作者 余丽芸 刘建柱 +2 位作者 侯喜林 崔玉东 朴范泽 《动物医学进展》 CSCD 2004年第6期75-77,共3页
在GeneBank中查出CSFV、PPV、PRV的所有已知序列。对病毒各基因区进行同源性分析 ,确定CSFV的E2 基因 ,PPV的VP2 基因和PRV的 gⅡ基因为各病毒扩增的靶序列。利用DNAsis对上述保守区进行引物设计 ,对设计出来的 3种病毒引物利用DNAstar... 在GeneBank中查出CSFV、PPV、PRV的所有已知序列。对病毒各基因区进行同源性分析 ,确定CSFV的E2 基因 ,PPV的VP2 基因和PRV的 gⅡ基因为各病毒扩增的靶序列。利用DNAsis对上述保守区进行引物设计 ,对设计出来的 3种病毒引物利用DNAstar进行引物二聚体分析 ,以避免引物之间形成稳定的引物二聚体。选出扩增序列为CSFV 2 88bp、PPV575bp和PRV 70 0bp的 3对引物 ,并对每对引物扩增序列的同源性或互补性进行分析。避免它们之间有较高的同源性或互补性 ,从而确定了 展开更多
关键词 多重pcr检测 猪瘟病毒 猪细小病毒 猪伪狂犬病病毒 多重pcr引物设计
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多重引物等位特异PCR法快速检测ApoE基因型的研究 被引量:1
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作者 李冬梅 王玉明 +2 位作者 刘华 詹淑芬 韩林 《昆明医学院学报》 2008年第1期69-72,94,共5页
目的建立多重引物等位特异PCR方法结合内参照基因对ApoE基因型进行分析,并与PCR-RFLP法和直接测序结果进行比较.方法以基因组DNA为模板,用多重引物等位特异PCR法、PCR-RFLP检测了158例体检者的APOE基因型,典型基因型用直接测序法检测并... 目的建立多重引物等位特异PCR方法结合内参照基因对ApoE基因型进行分析,并与PCR-RFLP法和直接测序结果进行比较.方法以基因组DNA为模板,用多重引物等位特异PCR法、PCR-RFLP检测了158例体检者的APOE基因型,典型基因型用直接测序法检测并通过GeneBank对比.结果共检测出5种常见的基因型:ε2/2(0%),ε3/3(77.2%),ε4/4(0.6%),ε3/2(13.3%),ε4/3(7.0%),ε4/2(1.9%),两种方法结果一致,测序结果与GeneBank对比一致.结论多重ASP-PCR检测ApoE基因型具有快速简便、准确可靠和经济、适用的特点,有一定的推广价值. 展开更多
关键词 APO E基因型 多重引物特异pcr pcr-RFLP
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多价抗虫水稻外源Bt基因的多引物多重PCR检测方法 被引量:2
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作者 方欣怡 阳菁 +1 位作者 王井章 李阳生 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期175-183,共9页
旨在研究多价Bt抗虫转基因水稻的简便有效的检测方法。根据3个Bt转基因事件的插入位置,设计引物,通过多重引物PCR技术,利用9条引物得到6条大小存在明显差异的条带,同时检测3个Bt基因的转基因情况。水稻3个Bt抗虫基因(cry1Ab/Ac、cry2A、... 旨在研究多价Bt抗虫转基因水稻的简便有效的检测方法。根据3个Bt转基因事件的插入位置,设计引物,通过多重引物PCR技术,利用9条引物得到6条大小存在明显差异的条带,同时检测3个Bt基因的转基因情况。水稻3个Bt抗虫基因(cry1Ab/Ac、cry2A、cry1C)分别来源TT51-1、T2A-1和T1C-19,其中代表TT51-1事件插入的阳性、阴性条带大小分别为937 bp、718 bp;代表T2A-1事件插入的阳性、阴性条带大小分别为600 bp、434 bp;代表T1C-19事件插入的阳性、阴性条带大小分别为495 bp、792 bp;通过琼脂糖凝胶电泳能快速对转Bt基因插入事件水稻的纯合、杂合、阴性进行检测。该技术克服了多重引物之间可能存在的引物间的相互干扰的技术难度,对不同的PCR试剂有很好的兼容性,可配合水稻DNA的快速提取,迅速对大量选育后代进行分析。该方法的建立为利用多价Bt基因进行抗螟虫水稻分子育种提供了一个简便高效的基因检测技术,有助于提高Bt基因检测效率,加快抗螟虫水稻的育种进程。 展开更多
关键词 Bt抗性基因 转基因 引物多重pcr 分子检测
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基于PrimerHunter的多重PCR引物设计系统的构建与应用
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作者 李美婧 施江程 李建伟 《唐山学院学报》 2017年第6期14-17,共4页
PrimerHunter是一款多重PCR引物设计软件,该软件能够高效地设计出具有特异性的多重引物,但是只能在Linux系统的命令行中运行,而且没有考虑引物二聚体的问题。针对这些问题,文章建立了基于PrimerHunter的多重PCR引物设计系统,实现了Prime... PrimerHunter是一款多重PCR引物设计软件,该软件能够高效地设计出具有特异性的多重引物,但是只能在Linux系统的命令行中运行,而且没有考虑引物二聚体的问题。针对这些问题,文章建立了基于PrimerHunter的多重PCR引物设计系统,实现了PrimerHunter的界面化,完成了C/S模式向B/S模式的转换,同时增加了原软件不具备的引物二聚体检测模块,能够有效检测引物对之间的二聚体情况,为相关生物学领域研究提供了一种高效的多重PCR引物设计工具。 展开更多
关键词 多重pcr引物设计系统 PrimerHunter软件 二聚体检测
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淋巴瘤克隆性TCRγ基因重排的多重引物分析
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作者 韩西群 胡海 +1 位作者 齐宗利 赵彤 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期956-957,共2页
目的探讨TCRγ多重引物检测淋巴瘤克隆性基因重排的功效及意义。方法引物分为两组扩增淋巴瘤DNA,PCR产物用于琼脂糖电泳和单链构象多态性分析(SSCP)检测。结果两组多重引物PCR的阳性率高于通用引物阳性率;B细胞淋巴瘤组织中存在一定比... 目的探讨TCRγ多重引物检测淋巴瘤克隆性基因重排的功效及意义。方法引物分为两组扩增淋巴瘤DNA,PCR产物用于琼脂糖电泳和单链构象多态性分析(SSCP)检测。结果两组多重引物PCR的阳性率高于通用引物阳性率;B细胞淋巴瘤组织中存在一定比例克隆性TCRγ基因生重排;部分淋巴瘤中存在两种TCRγ基因重排。结论多重引物和降落式PCR适于淋巴瘤TCRγ基因重排研究,可提高检出率、判断淋巴瘸组织中不同TCRγ基因重排情况;SSCP可排除假阳性。 展开更多
关键词 淋巴瘤 TCRΓ基因重排 多重引物pcr
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Jurkat细胞株TCRγ基因重排及多重引物扩增分析
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作者 韩西群 齐宗利 赵彤 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期738-741,共4页
目的分析Jurkat细胞株TCRγ基因重排特点,观察多重引物PCR扩增Jurkat细胞株TCRγ基因重排的效果。方法 TCRγ基因重排正向、反向引物配对组合,分别扩增Jurkat细胞株DNA,阳性PCR产物测序并比对分析;多重引物组合、降落式PCR扩增Jurkat细... 目的分析Jurkat细胞株TCRγ基因重排特点,观察多重引物PCR扩增Jurkat细胞株TCRγ基因重排的效果。方法 TCRγ基因重排正向、反向引物配对组合,分别扩增Jurkat细胞株DNA,阳性PCR产物测序并比对分析;多重引物组合、降落式PCR扩增Jurkat细胞株TCRγ基因重排,比较多重引物与单对引物扩增效果。结果两组单对引物扩增产物电泳出现强阳性条带,测序并比对证实为TCRγ基因重排;与胚系基因比对发现,重排后TCRγ基因存在删除和增加的碱基序列;多重引物扩增产物中出现阳性条带的组合,其引物与单对引物组合一致。结论 Jurkat细胞中存在两种不同的TCRγ基因重排,重排序列体现了基因重排多样性。多重引物结合降落式PCR扩增TCRγ基因重排,扩增效果与单对引物一致。 展开更多
关键词 JURKAT细胞株 TCRγ基因 基因重排 多重引物pcr
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多重引物SSR技术鉴定玉米杂交种子纯度的研究 被引量:14
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作者 吴明生 贾希海 +1 位作者 律宝春 田雷 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期38-40,共3页
采用热碱法提取玉米种子DNA,并且运用多重引物(3对SSR引物)PCR对其进行SSR扩增,进行种子纯度鉴定。结果表明:①利用热碱法可以实现玉米种子的DNA快速提取,同时降低了检测成本;②利用三重引物PCR技术降低了检测结果的误差,提高了检测结... 采用热碱法提取玉米种子DNA,并且运用多重引物(3对SSR引物)PCR对其进行SSR扩增,进行种子纯度鉴定。结果表明:①利用热碱法可以实现玉米种子的DNA快速提取,同时降低了检测成本;②利用三重引物PCR技术降低了检测结果的误差,提高了检测结果的准确性。因此,将这两种技术结合起来,将极大地推动SSR技术在玉米种子纯度鉴定中的推广和应用。 展开更多
关键词 玉米杂交种 纯度 SSR标记 DNA提取 多重引物pcr
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套式/多重PCR检测疟疾感染的应用研究 被引量:7
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作者 唐莉娜 徐建军 +3 位作者 王世海 卢丽丹 李松平 黄天谊 《热带医学杂志》 CAS 2007年第8期813-815,共3页
目的了解标签引物-套式/多重PCR技术在检测疟疾感染中的现场应用价值。方法随机采取我省疟疾流行区有发热症状的居民及家庭成员的耳垂血79份,同时制作厚血片和滤纸血样本各1份,用标签引物-套式/多重PCR检测所采集滤纸血样本中的疟原虫,... 目的了解标签引物-套式/多重PCR技术在检测疟疾感染中的现场应用价值。方法随机采取我省疟疾流行区有发热症状的居民及家庭成员的耳垂血79份,同时制作厚血片和滤纸血样本各1份,用标签引物-套式/多重PCR检测所采集滤纸血样本中的疟原虫,并与镜检法进行比较。结果79份样本中,用标签引物-套式/多重PCR技术检出间日疟原虫阳性6例,镜检初检出10例间日疟原虫阳性,经复查血片后有4例排除了疟疾感染。镜检复核阳性的6例样本PCR均为阳性。以镜检复核为标准,两法阳性和阴性符合率为100%。结论标签引物-套式/多重PCR检测疟疾感染具高度敏感性和特异性,对疟疾鉴别诊断和明确诊断具有重要价值。 展开更多
关键词 疟疾 标签引物-套式/多重pcr 诊断
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Optimization of Multiplex PCR and Multiplex Gel Electrophoresis in Sunflower SSR Analysis Using Infrared Fluorescence and Tailed Primers 被引量:3
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作者 张潞生 Vanessa BECQUET +1 位作者 李绍华 David ZHANG 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2003年第11期1312-1318,共7页
In an effort to simplify the procedure and to reduce the cost of fluorescence SSR analysis, the conditions of the multiplex PCR and the multiplex gel electrophoresis were optimized in the genetic analysis of sunflower... In an effort to simplify the procedure and to reduce the cost of fluorescence SSR analysis, the conditions of the multiplex PCR and the multiplex gel electrophoresis were optimized in the genetic analysis of sunflower (Helianthus annuus L.) inbred lines. Results indicated that factors for a successful multiplex PCR assay were related to the cycling touchdown annealing temperature, the balance of primer concentration at the various loci, the concentration of PCR buffer and the Taq DNA polymerase. Based on the optimization, a tailed primer strategy was outlined, and the effective ways were proposed to overcome the troubleshootings commonly encountered in the multiplex PCR and the multiplex gel electrophoresis. 展开更多
关键词 simple sequence repeat (SSR) tailed primer multiplex pcr multiplex gel electrophoresis SUNFLOWER
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Development of Three Multiplex PCR Primer Sets for Ark Shell(Scapharca broughtonii)and Their Validation in Parentage Assignment 被引量:1
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作者 LINing LI Qi +1 位作者 KONG Lingfeng YU Hong 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS 2016年第2期311-317,共7页
Scapharca broughtonii is a commercially important and over-exploited species.In order to investigate its genetic diversity and population structure,43 novel polymorphic microsatellites were isolated and characterized.... Scapharca broughtonii is a commercially important and over-exploited species.In order to investigate its genetic diversity and population structure,43 novel polymorphic microsatellites were isolated and characterized.The number of alleles per locus ranged from 3 to 22 with an average of 6.93,and the observed and expected heterozygosities varied between 0.233 and 1.000,and 0.250 and 0.953,with an average of 0.614 and 0.707,respectively.Three highly informative multiplex PCRs were developed from nine of those microsatellites for S.broughtonii.We evaluated and validated these multiplex PCRs in 8 full-sib families.The average polymorphism information content(PIC) was 0.539.The frequency of null alleles was estimated as 3.13% of all the alleles segregation based on a within-family analysis of Mendelian segregation patterns.Parentage analysis of real offspring demonstrated that 100% of all offspring were unambiguously allocated to a pair of parents based on 3 multiplex sets.Those 43 microsatellite loci with high variability will be helpful for the analysis of population genetics and conservation of wild stock of S.broughtonii.The 3 sets of multiplex PCRs could be an important tool of pedigree reconstruction,population genetic analysis and brood stock management. 展开更多
关键词 Seapharca broughtonii microsatellites multiplex pcr parentage assignment
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浙江省2005年鼠疫病原和血清学检测结果分析 被引量:4
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作者 石国祥 孟真 程苏云 《浙江预防医学》 2007年第4期1-3,共3页
目的了解我省鼠疫历史流行区是否存在动物鼠疫的流行。方法在监测区内捕获活鼠并收集死鼠,活鼠采血用放免、血凝、酶标及胶体金方法检测鼠疫F1抗体;鼠脏器用压印法分离鼠疫菌,用多重引物PCR的方法检测鼠疫的基因片段。结果我省首次用间... 目的了解我省鼠疫历史流行区是否存在动物鼠疫的流行。方法在监测区内捕获活鼠并收集死鼠,活鼠采血用放免、血凝、酶标及胶体金方法检测鼠疫F1抗体;鼠脏器用压印法分离鼠疫菌,用多重引物PCR的方法检测鼠疫的基因片段。结果我省首次用间接血凝试验(微量法)从3份鼠血清中检出鼠疫F1抗体,用多重引物PCR的方法从3头鼠脏器中检出鼠疫菌caf 1基因片段。结论我省的部分鼠疫历史流行区存在动物鼠疫复燃的可能,要加强鼠疫的监控工作。 展开更多
关键词 鼠疫 监测 间接血凝试验 多重引物pcr
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利用M-RAPD技术绘制不同病原微生物基因指纹图 被引量:2
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作者 刘刚 陶传敏 翟朝阳 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期563-567,共5页
目的 探讨一种多重随机引物 PCR方法 (M- RAPD)对不同种株病原微生物进行鉴定的可能性。方法 将 1 0个碱基的随机引物进行随机组合 ,利用三条组合的随机引物在较高的退火温度下对不同种株病原微生物染色体 DNA进行扩增 ,通过 1 5 g/L... 目的 探讨一种多重随机引物 PCR方法 (M- RAPD)对不同种株病原微生物进行鉴定的可能性。方法 将 1 0个碱基的随机引物进行随机组合 ,利用三条组合的随机引物在较高的退火温度下对不同种株病原微生物染色体 DNA进行扩增 ,通过 1 5 g/L 琼脂糖凝胶电泳获得不同种株病原微生物的扩增图谱 ,并用软件 Gelworks1 d Intermediate进行分析。结果 初步实验表明 ,M- RAPD技术可以得到稳定的种株特异的 DNA指纹图谱 ,其条带清晰、数目较多、片段大小分布均匀。三引物的扩增产物包含了其中任意两引物的绝大多数扩增产物 ,大、小片段均可出现增减 ,但小片段更易增加 ;对同一种病原微生物三引物所提供的基因信息要远多于两引物所提供的信息 ,增加的信息量约为原来的 5 0 % ;不同耐药菌株间及其与相应标准株间差异亦很明显 ,但同种不同株间相同的扩增产物要多于不同的扩增产物。软件 Gelworks1 d Interm ediate的分析数据亦支持我们的实验结果。结论  M- RAPD技术对不同种株病原微生物染色体 DNA扩增时 ,能获取较丰富的遗传信息 ,可迅速、简便地鉴定不同种株的病原微生物。 展开更多
关键词 多重随机引物pcr方法 病原微生物 基因指纹图
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儿童病毒性脑炎62例临床及病毒病原学分析 被引量:13
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作者 蔡虹 王立文 +6 位作者 朱彦丽 吕凌云 徐光芝 朱汝南 邓洁 赵林清 钱渊 《中国实用儿科杂志》 CSCD 北大核心 2004年第7期415-416,共2页
目的 探讨不同年龄组儿童病毒性脑炎临床表现差异及脑脊液病毒病原学特点。方法 选取首都儿科研究所2 0 0 2年 1月至 2 0 0 3年 2月收治的 6 2例病毒性脑炎患儿 ,根据年龄分为A组 ( <3岁 )、B组 ( 3~ 6岁 )、C组 ( >6岁 ) 3组... 目的 探讨不同年龄组儿童病毒性脑炎临床表现差异及脑脊液病毒病原学特点。方法 选取首都儿科研究所2 0 0 2年 1月至 2 0 0 3年 2月收治的 6 2例病毒性脑炎患儿 ,根据年龄分为A组 ( <3岁 )、B组 ( 3~ 6岁 )、C组 ( >6岁 ) 3组。 ( 1)分析不同年龄组临床表现特点。 ( 2 )应用多重引物PCR方法对脑脊液进行病毒病原学检测 ,包括肠道病毒 (EV)、疱疹病毒 (HSV)Ⅰ、Ⅱ型、EB病毒、巨细胞病毒 (CMV) 5种。结果  ( 1) 3组患儿均有发热、嗜睡、烦躁、淡漠等症状 ;其他伴随症状 :A、B两组患儿中 2 4例 ( 6 2 5 % )伴有惊厥 ,C组中 2 2例 ( 95 7% )伴随头痛。 ( 2 )脑脊液病毒病原检测阳性者 39例 ( 6 2 9% ) ,其中EV 18例 ( 4 6 2 % ) ,HSVⅡ型 9例 ( 2 3 1% ) ,CMV、EB病毒各 6例 (各 15 4 % ) ,HSVⅠ型未检出。结论  ( 1)除发热、嗜睡以外不同年龄组病毒性脑炎患儿伴随症状不同。 ( 2 ) 展开更多
关键词 病毒性脑炎 临床表现 多重引物pcr 病毒病原学
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