胶体金免疫层析试纸条在生物毒素检测领域的研究进展

胶体金免疫层析试纸条是一种常用的检测方法,广泛应用于疾病诊断、生物毒素检测等领域。该技术基于胶体金标记的特异性抗原(抗体)与待检样品中的目标分子相互作用,在试纸条上形成可见的测试线或信号变化。其流程包括样品预处理、标记抗体制备、试纸条组装步骤。胶体金免疫层析试纸条可以用于快速检测食品中的毒素残留、环境中的有害物质以及临床诊断中的相关指标。该技术具有无创、快速、灵敏和准确的特点,在临床应急检测和大规模筛查中能快速获得结果。文章总结了胶体金免疫层析试纸条技术及其在生物毒素检测中的研究进展,并分析了当前胶体金免疫层析试纸条技术的优缺点,展望了该技术在生物毒素检测领域的未来发展方向。

牛传染性鼻气管炎病毒胶体金检测试纸条的研制和评价

为建立快速检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的病原学检测方法,本试验采用杂交瘤细胞融合技术制备IBRV单克隆抗体,以其作为检测原,优化反应条件并组装IBRV胶体金检测试纸条,验证该试纸条的特异性、灵敏性、敏感性和稳定性,并与实时荧光定量PCR(qPCR)进行比较分析。结果显示,共制备7株针对IBRV的单克隆抗体,其中以胶体金标记的单克隆抗体2B7作为捕获抗体、1B9作为检测抗体,建立的胶体金检测试纸条能够检测样品中的IBRV;该试纸条与病毒性腹泻/黏膜病毒、牛冠状病毒和大肠杆菌无交叉反应,检测限为4.04×10~4TCID50/0.1 mL,敏感性为86.7%;在室温条件下保存12个月仍能够有效检测IBRV,说明该试纸条稳定性良好。与qPCR比较结果显示,2种方法检测结果的符合率为92.85%,说明该胶体金检测试纸条能够用于IBRV的临床诊断。结果表明,本试验利用IBRV的单克隆抗体建立的胶体金检测试纸条灵敏度高且特异性好,为IBRV抗原检测和流行病学调查提供技术支持。

猪轮状病毒胶体金检测试纸条的研制及应用

【目的】利用2株猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条,用于PoRV的临床快速检测。【方法】制备40 nm粒径的胶体金溶液标记单克隆抗体4G5,将单克隆抗体5G4和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测线和质控线。通过优化胶体金溶液最适pH、标记抗体和检测抗体的最佳使用量,制备PoRV胶体金检测试纸条;对试纸条的灵敏度、敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评价。通过检测50份猪粪便样品,计算试纸条与RT-PCR方法的符合率,最后采用试纸条进行1249份临床样品的测定。【结果】经优化后试纸条的最佳参数如下:胶体金溶液最佳pH为8.0,标记抗体4G5和检测抗体5G4最佳使用量分别为14.4μg/mL和1 mg/mL。试纸条能检测出1∶2000稀释的PoRV OSU株(G5型)病毒液,灵敏度为104.5TCID50/mL,且检测PoRV G9、G3和G4型毒株均为阳性。检测猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)、猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)均为阴性。批内和批间重复性、稳定性良好。检测50份猪粪便样品,与RT-PCR方法的阳性符合率为97.5%(39/40),阴性符合率为100%(10/10),总体符合率为98%(49/50)。检测2022年在河南、山西省猪场收集的临床样品1249份,阳性检出率为5.2%。【结论】本研究制备的PoRV胶体金检测试纸条具有良好的敏感性、特异性和重复性等优点,与RT-PCR方法的符合率较高,可用于规模化猪场PoRV的快速检测。

恙虫病东方体混合重组抗原应用于胶体金免疫层析试纸条的制备及效价检测

胶体金免疫层析试纸条具有携带方便、操作简单且敏感性、特异性高等特点,近年来开始广泛应用于疾病的诊断。为了实现对恙虫病的快速检测,笔者利用双抗原夹心法,以胶体金标记恙虫病东方体56 kDa混合重组蛋白,56 kDa混合重组蛋白和兔抗恙虫病东方体多克隆抗体分别喷在检测线及质控线上,制备了用于检测恙虫病东方体抗体的胶体金免疫层析试纸条。本研究制备的胶体金试纸条检测限为61 ng/mL,和疟疾、伤寒、血吸虫、出血热以及斑点热等阳性血清无交叉反应,特异性达90%(54/60),检测的敏感性为91.96%(103/112),在4℃下可稳定保存6个月。本试纸条能够应用于人体血清中恙虫病东方体总抗体的检测。

免疫快速同步检测玉米中5种真菌毒素胶体金试纸条的构建和应用

玉米作为重要的粮食和饲料来源,容易受到多种真菌毒素的污染,给居民健康和养殖业造成严重的危害。本文优化了适合5种真菌毒素(黄曲霉毒素B1、伏马毒素、T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮)同时提取的样品前处理方法,并构建了5检测线胶体金试纸条,检测结果可以通过肉眼定性,结合Image J软件可以进行定量分析,并应用于实际玉米样品检测。结果表明,最佳提取条件为90%乙腈/水,涡旋20 min,样品的添加回收率为71.9%~113.3%,相对标准偏差为0.9%~7.5%;测定基质添加样品建立标准曲线,通过肉眼判定得到5种真菌毒素的消线值分别为80.0、1 000.0、100.0、400.0、200.0μg/kg;结合Image J软件提取多重检测试纸条的检测线灰度值,结果表明当AFB1、FB1、T-2、DON和ZEN的质量分数为8.0、20.0、10.0、40.0、20.0μg/kg时,各真菌毒素浓度对应的检测线显色值比空白对照显色值低。最后,通过检测11个实际玉米样品,结果表明部分玉米样品受到了不同程度的AFB1、DON和ZEN的污染。因此,本研究开发的免疫快速同步检测玉米中5种真菌毒素胶体金试纸条可以用于玉米中真菌毒素的现场快速筛查。

黄曲霉毒素B_(1)胶体金免疫层析试纸条的制备及性能研究

以黄曲霉毒素B_(1)为研究对象,制作出一种可实现对黄曲霉毒素B_(1)含量快速检测的胶体金试纸条。实验采用竞争抑制法,基于试纸条的层析作用,以胶体金为标记物与黄曲霉毒素B_(1)单抗偶联,将黄曲霉毒素B_(1)抗原和羊抗鼠二抗固定到硝酸纤维膜上作为检测线和质控线,制备出可以快速检测黄曲霉毒素B_(1)的免疫层析试纸条。通过优化,试纸条在37℃条件下,分别在5,10,15,20 d后测试,效果没有明显降低,检测灵敏度为20 ng/mL;与磺胺类药物、“瘦肉精”类药物均无交叉反应。该试纸条具有良好的稳定性和特异性,可实现生物样本中黄曲霉毒素B_(1)的快速大量检测。

牛病毒性腹泻病毒抗原胶体金快速检测试纸条的研制

为建立一种快速准确且便携的检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,本研究将制备的BVDV单克隆抗体(MAb)作为检测线(T线),以纯化的免源多克隆抗体作为金标蛋白,以羊抗兔IgG-HRP作为质控线(C线),组装成双抗体夹心胶体金层析试纸条,并优化各反应条件。结果显示,最适金标蛋白标记量为30μg/mL,BVDV MAb和羊抗兔IgG-HRP最佳浓度均为0.5 mg/mL。利用猪瘟病毒(CSFV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛丘疹性口炎病毒(BPSV)及BVDV临床分离株评估该试纸条的特异性,结果显示,除阳性对照和BVDV临床分离株检测为阳性外,其余病毒均为阴性,表明该试纸条的特异性较强,无交叉反应。将BVDV-NADL株(10^(6.6)ELD_(50)/mL)10倍倍比稀释后,利用该试纸条检测,结果显示其最低检出量为10^(4.6)ELD_(50)/mL。利用同一批次和不同批次制备的试纸条对CSFV、IBRV、BPSV、BVDV临床分离株检测,结果显示检测结果均一致,表明该试纸条的重复性良好。将制备的试纸条应用于检测临床采集的68份牛血清样品,并以RT-PCR方法同时检测,结果显示胶体金试纸条对BVDV的阳性检出率为17.5%(12/68),RT-PCR对BVDV的阳性检出率为26.5%(18/68),两者之间的总符合率为88.24%。本研究于国内首次采用双抗体夹心方式制备了检测BVDV的胶体金免疫层析试纸条,该方法方便快捷,特异性及敏感性均较好,适宜于牛场BVDV的快速筛选,为进一步研制BVDV胶体金检测试剂盒提供了实验依据。

大肠杆菌O157:H7胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

本文采用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金溶液标记大肠杆菌O157:H7抗体(6C1E5),然后将其包被于金标垫上,再将大肠杆菌O157:H7抗体(10G1A2)和兔抗鼠IgG分别包被于硝酸纤维素膜作为检测线和质控线,研制出的大肠杆菌O157:H7胶体金免疫层析快速检测试纸检测灵敏度达104 CFU/mL,并与鼠寒沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌等8种菌株无交叉反应,显示出较强的特异性。

安眠酮胶体金免疫快速检测试纸条的研制

为快速检测出猪肉等动物源性食品中安眠酮的残留,利用胶体金免疫层析技术制备安眠酮快速检测试纸条。通过化学方法合成安眠酮半抗原和安眠酮抗原,利用免疫反应制备安眠酮多克隆抗体,以安眠酮多克隆抗体和安眠酮包被抗原作为主要原料,制备安眠酮胶体金免疫快速检测试纸条。结果表明,研制的试纸条对动物组织样本的检测限为20μg/kg,对尿样的检测限为30μg/kg,检测时间不超过5 min,与500μg/kg的四环素类、喹诺酮类、磺胺类等药物均无交叉反应,特异性较好,假阳性率≤5%,假阴性率≤0.5%。该方法操作简便、快速、灵敏、准确、稳定,适用于动物源性食品中安眠酮残留的现场快速检测和筛查。

肉制品中卡那霉素胶体金快速检测试纸条的研制

为实现对肉制品中卡那霉素残留的快速检测,研制了一种卡那霉素胶体金检测试纸条.根据实验结果确定了胶体金试纸条的最佳制备条件,然后对研制的试纸条的灵敏度、特异性和稳定性进行测试.结果表明,该试纸条的最低检测限为100μg/L,试纸条对卡那霉素具有明显的特异性,稳定性好.该试纸条能够用于肉制品中卡那霉素残留的快速检测,而且经济、简便,具有实用价值.

多重烟草病毒胶体金检测试纸条的研制及应用

为建立一种快速、特异、简便的多重烟草病毒检测方法,用胶体金标记和免疫层析技术研制了双重(TMV-CMV、CMV-PVY、TMV-PVY)和三重(TMV-CMV-PVY)病毒试纸条。测试结果表明,三重病毒检测试纸条对目标病毒(TMV、CMV和PVY)的检测具有良好的灵敏性和特异性。检出TMV、CMV和PVY的最低浓度分别在1.02～10.2、1.10～11.0、1.20～12.0 ng/mL之间。对烟草危害严重的TEV、PVA和TSWV均无交叉反应。用三重病毒检测试纸条对苗棚中的烟株进行检测,其结果与RT-PCR检测结果的符合率≥90%。

胶体金免疫层析试纸定量检测猪肉中沙丁胺醇的研究

通过便携式免疫层析读条仪,建立猪肉中沙丁胺醇的胶体金免疫层析试纸定量检测方法.沙丁胺醇试纸的定量检测限为5 ng/mL,定量检测范围为5~250 ng/mL,试纸与两种β_(2)-受体激动剂无交叉,添加回收试验的平均回收率为105.76%,对三个不同超市的猪肉样品进行了检测.该法方法灵敏度高、特异性好、精密度和准确性高,而且方便快捷.

基于CCD的胶体金试纸条光电检测仪器设计及实验研究

为了将农残检测的胶体金试纸条检测结果数值化，设计了基于线阵CCD的光电检测仪器，用其进行现场检测。仪器设计包括光路和电路部分，其中电路部分使用FIFO芯片进行数据缓存，有效降低了开发成本；采用自动定位插槽的定位装置，用于提高检测目标定位的准确度。实验测定了系统的工作曲线及参数，精度可达1ng／mL，线性范围为1～20ng／mL，符合农残检测范围。

盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制

研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,以用于对猪尿中盐酸克伦特罗的检测。以胶体金标记盐酸克伦特罗单克隆抗体竞争性膜层析技术制成了猪尿液中盐酸克伦特罗残留检测的快速检测试纸条。如待测尿样中无盐酸克伦特罗,则金标抗体能顺利地与固相载体结合,形成肉眼可见的红色带;如待测尿样中含有盐酸克伦特罗,则与金标抗体以同样的机会与固相载体结合,竞争性地占去了金标抗体与固相载体结合的机会,使金标抗体与固相载体的结合量减少,无法形成肉眼可见的红色带。经过试验制成了可检测出猪尿样中盐酸克伦特罗浓度为2 ng/mL的试纸条,可在8 min完成测试,肉眼即可判断;该试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求,且无需任何仪器设备,具有敏感、特异、快速、简便的特点,适用于现场快速检测和筛选工作。

莱克多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术建立了一种快速检测莱克多巴胺的方法。采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,莱克多巴胺偶联OVA抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成莱克多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条。试验结果表明,该快速检测试纸条的灵敏度为5 ng/mL,检测时间为5 min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。

氯霉素胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

为研究应用检测氯霉素(CAP)的胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗CAP单克隆抗体,将CAP偶联抗原和羊抗鼠二抗分别结合于硝酸纤维膜作为检测线和质控线,研制CAP胶体金快速检测试纸条。通过优化试验,确定最佳标记pH为8.5、最佳标记量为36μg/mL、最佳抗原包被浓度和最佳二抗包被浓度分别为0.5,1.0 mg/mL。经过试验制成的试纸条检测限为2ng/mL,检测时间5～8min,肉眼即可判断结果。用该试纸条检测CAP残留具有操作简便、快速、特异性强、灵敏度高等特点,适用于现场快速检测和筛选工作。

胶体金试纸条快速检测食品中磺胺二甲基嘧啶残留

目的:旨在建立一种快速、简便的针对磺胺二甲基嘧啶残留的检测方法。方法:应用竞争抑制免疫层析原理,研制磺胺二甲基嘧啶胶体金试纸条。结果:该试纸条检测限为10ng/mL、检测时间5min,与其他磺胺类药物交叉反应小,可用于多种食品样本的检测,且样本检测限为100μg/kg。结论:该方法操作简便、灵敏度高且特异性强,可实现对食品样品中磺胺二甲基嘧啶残留的快速检测。

基于侧流免疫层析技术制备胶体金试纸条检测莲子中黄曲霉毒素B_1的研究

目的基于侧流免疫层析技术制备一种适用于快速检测莲子中黄曲霉毒素B1(AFB1)的试纸条。方法利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,金颗粒标记单克隆抗体制成金标偶联物作为结合垫,特异性抗原(AFB1-BSA)和羊抗鼠Ig G二抗分别作为检测线和控制线。结果经组装测试,试纸条的灵敏度为2.5ng·m L-1,检测时间在10 min以内。在检测的23份莲子样品中,6份样品有AFB1,阳性样品经UFLC-MS/MS确证,试纸条假阳性和假阴性率为0。结论所制备的试纸条检测快速、操作简便、结果准确,适合大批量莲子中AFB1的现场检测。

莱克多巴胺胶体金免疫层析法快速检测试纸条的研制

为研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,快速检测猪尿中莱克多巴胺（ractopamine,RAC药物残留）,采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上制备胶金垫,RAC-BSA偶联抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装并切割成莱克多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条。试验结果表明该快速检测试纸条的检测限为5 ng/mL,可在8~10 min内完成测试,肉眼即可判断,无需其他检测设备。该试纸条灵敏度、特异性、稳定性和重复性均达到临床使用要求,适用于现场快速检测和筛选工作。