肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色在诊断Alport综合征中的应用

目的对Alport综合征(AS)患者肾脏穿刺组织进行石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学检测,探讨其临床应用价值。方法选取2018年11月至2022年7月浙江大学医学院附属第一医院肾脏病中心确诊的10例AS患者(AS病例组)、10例心脏死亡器官捐献者(DCD)供肾及10例确诊为免疫球蛋白A肾病患者(对照组)的肾组织进行石蜡切片Ⅳ型胶原α1、α3、α5链全自动免疫组织化学染色,将其与冰冻切片免疫荧光染色结果进行比较。将对照组肾组织石蜡切片分别采用多种方法进行抗原修复,比较修复效果。结果对照组肾组织2种染色方法Ⅳ型胶原α1、α3、α5链染色在肾小球基底膜(GBM)中均为连续线状阳性表达。AS病例组肾组织2种染色方法Ⅳ型胶原α1链染色在GBM均呈连续线状阳性表达,α3、α5链染色在GBM为阴性或节段弱阳性表达。2种染色方法染色结果具有较高的一致性(Kappa=0.615,P=0.035)。结论石蜡切片全自动免疫组织化学检测Ⅳ型胶原α1、α3和α5能较好地用于AS的诊断,为AS的诊断和研究提供了一种可靠的技术手段。

多重微球流式免疫荧光技术对肺癌患者外周血IL-1β、IL-6、IFN-γ水平测定及与hs-CRP的相关性分析

目的探讨多重微球流式免疫荧光技术在肺癌患者外周血白细胞介素(IL)-1β、IL-6和干扰素γ(IFN-γ)细胞因子的表达情况及与超敏C反应蛋白(hs-CRP)相关性分析。方法采用回顾性研究的方法,选择张家港市中医医院(下称该院)肿瘤科和肺病科收治的30例肺癌患者作为肺癌组,另选择同期该院收治的30例肺炎患者作为肺炎组,同时选取同期该院体检健康者30例作为对照组,通过多重微球流式免疫荧光技术检测血清中IL-1β、IL-6和IFN-γ水平,同时利用乳胶增强免疫散射比浊法测定外周血全血中hs-CRP水平。结果肺癌组与对照组比较,IL-1β、IL-6和hs-CRP水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.001),而IFN-γ水平差异无统计学意义(P>0.05);肺炎组与对照组比较,IL-1β、IL-6、IFN-γ、hs-CRP水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.001);肺癌组与肺炎组比较,IL-6、IFN-γ、hs-CRP水平明显降低且IL-1β水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);肺癌组、肺炎组IL-6和hs-CRP水平分别进行Pearson相关性分析,均无明显的相关性。结论IL-1β、IL-6、IFN-γ可以作为有效评估肺癌患者免疫功能的辅助指标,多重微球流式免疫荧光技术的应用对于肺癌的诊断及监测具有潜在的临床应用价值。

肿瘤免疫治疗时代的多重免疫组织化学/免疫荧光技术

常规免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)是组织病理学中广泛应用的诊断技术。但该技术存在诸多局限性,包括观察者间的变异性高,每张组织切片仅能标记一个标志物。本文详细描述了各种多重检测技术,这些技术克服了上述局限性,可在单张切片上同时检测多个标志物,可对细胞组成、细胞功能和细胞间相互作用进行整合研究。在这些技术中,多重免疫组织化学/免疫荧光(multiplex immunohistochemistry/immunofluorescence,mIHC/IF)已成为最具应用前景的技术。mIHC/IF为开展高重复性、高效、高性价比的组织研究提供了高通量多重染色技术和标准化的定量分析。该技术在转化研究和临床实践中,尤其是肿瘤免疫治疗中极具应用价值。

免疫组织化学和免疫荧光染色在肾活检组织石蜡切片磷脂酶A2受体检测中的应用

目的评估免疫组织化学和免疫荧光染色方法在肾活检组织石蜡切片磷脂酶A2受体（PLA2R）检测中的应用情况,寻找在肾组织中检测PLA2R准确、快捷的实验方法。方法对193例肾活检组织石蜡切片进行PLA2R免疫组织化学染色,抗原修复方法为高压锅热修复加胰蛋白酶双修复法,其中包括特发性膜性肾病（IMN）139例、膜型狼疮性肾炎15例、乙型肝炎病毒相关性膜性肾病8例、Ig A肾病18例和微小病变13例。将其中22例肾组织PLA2R阳性IMN患者的肾组织石蜡切片分别给予高压锅热修复、高压锅热修复加胰蛋白酶双修复、水浴热修复和水浴热修复加胰蛋白酶双修复等4种抗原修复法,然后行PLA2R免疫组织化学染色,对染色效果进行比较。再将其中15例肾组织PLA2R阳性IMN患者的肾组织石蜡切片分别给予水浴热修复加胰蛋白酶双修复、蛋白酶K修复、胃蛋白酶修复等3种抗原修复法,然后行PLA2R免疫荧光染色,对染色效果进行比较。结果 193例标本中,IMN患者PLA2R免疫组织化学染色结果阳性率为90.6%（126/139）;其他54例非IMN患者均为阴性。采用高压锅热修复加胰蛋白酶双修复法和水浴热修复加胰蛋白酶双修复时,22例患者的PLA2R免疫组织化学染色结果均为阳性;而采用高压锅热修复法或水浴热修复时,仅部分患者为阳性。采用水浴热修复加胰蛋白酶双修复、蛋白酶K修复和胃蛋白酶修复时,15例患者的PLA2R免疫荧光染色结果均为阳性,但水浴热修复加胰蛋白酶双修复为弥漫球性着色,荧光强度2＋～3＋,而蛋白酶K修复和胃蛋白酶修复为局灶节段性着色,荧光强度3＋～4＋。结论肾组织PLA2R免疫组织化学染色可有效鉴别IMN与继发性MN。行免疫组织化学染色和免疫荧光染色时,首选水浴热修复加胰蛋白酶双修复法。

EWS易位分离探针荧光原位杂交和免疫组织化学抗体(FLI-1和CD99)在尤文肉瘤/原始神经外胚层肿瘤诊断中的价值

目的:评价EWS易位分离探针荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)与免疫组化抗体CD99、FLI-1对尤文肉瘤/原始神经外胚层肿瘤(Ewing’s sarcoma/primitive neuroectodermal tumor,EWS/PNET)的诊断价值。方法:收集35例EWS/PNET和其他小圆细胞肿瘤24例,应用FISH检测EWS基因易位、免疫组化抗体CD99和FLI-1的表达,进行对比研究,评价各自及联合应用的诊断价值。结果:FISH检测在EWS/PNET的敏感性、特异性、阳性预期值和阴性预期值分别为93.8%(30/32)、81.8%(18/22)、88.2%(30/34)和90%(18/20);CD99分别为100%(35/35)、58.3%(14/24)、77.8%(35/45)和100%(14/14);FLI-1分别为71.4%(25/35)、62.5%(15/24)、73.5%(25/34)和60%(15/25)。不同指标两两联合应用敏感性、特异性和阳性预期值、阴性预期值为:CD99+FLI-1分别为71.4%(25/35)、75%(18/24)、80.6%(25/31)和64.3%(18/28);FLI-1+FISH分别为68.7%(22/32)、86.4%(19/22)、88%(22/25)和65.5%(19/29),CD99+FISH分别为93.8%(30/32)、95.5%(21/22)、96.8%(30/31)和91.3%(21/23)。结论:应用EWS基因易位分离探针FISH检测染色体易位,是辅助诊断EWS/PNET非常敏感和特异的分子指标,与CD99联合应用诊断价值最大。在缺乏FISH结果的情况下,FLI-1和CD99联合应用能够提高诊断的特异性。

荧光原位杂交与免疫组织化学检测胃癌组织中HER-2基因及蛋白表达一致性

目的探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)与免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测胃癌组织中HER-2基因扩增及与C-erbB-2蛋白表达结果的一致性。方法采用FISH和IHC法分别检测50例胃癌组织中HER-2基因扩增和C-erbB-2蛋白表达,并采用SPSS 19.0进行统计学分析。结果 50例胃癌标本进行IHC检测结果 11例为(﹢),9例为(),4例为(),26例为(-);50例胃癌标本进行FISH检测结果 11例为(+),39例为(-);其中,FISH检测阳性标本中IHC检测有2例(﹢),5例(),4例()。IHC检测C-erbB-2蛋白为()的病例FISH检测均为(+),而IHC检测C-erbB-2蛋白()的9位患者中有4例经FISH检测证实HER-2呈(-),5例呈(+)。结论 IHC与FISH检测HER-2状态结果的符合率为95.1%(39/41),具有高度一致性(Kappa系数=0.773,P<0.001)。当IHC检测C-erbB-2蛋白表达为(-)或()时IHC和FISH检测结果有较高符合率,可作为临床是否应用Herceptin治疗的依据,而C-erbB-2蛋白表达为()的病例则必须进一步行HER-2基因扩增检测。

免疫组织化学法与间接免疫荧光法对REV抗原定位的比较

本研究分别用免疫组织化学(IHC)法、间接免疫荧光(IFA)法对肿瘤病鸡不同脏器中的禽网状内皮增生病病毒(REV)进行了检测,旨在为两种REV抗原定位方法的应用提供实验依据。采用REV SD1005分离株人工接种1日龄海兰褐鸡,分别采取28日龄肿瘤病鸡的肿瘤、法氏囊、骨髓、肝脏、心脏、脾脏、腺胃的新鲜切面在洁净盖玻片上触片,同时制备其病理组织连续切片,分别用IHC法、IFA法对触片和切片进行REV检测。结果显示,两种用于抗原定位的染色方法检测结果完全一致,均可对病鸡的肿瘤、法氏囊、骨髓、肝脏、心脏、脾脏、腺胃等组织中存在的REV进行定位,依据染色后的阳性细胞感染率可判断REV的组织嗜性。本研究表明,IHC法与IFA法均可用于检测不同脏器中的REV,并具有良好的特异性、低背景和简便快速的特点。但相对于IFA法,IHC法更经济实用并且实验材料易于保存,因此可以在REV抗原定位研究中推广应用。

荧光原位杂交（FISH）技术与免疫组织化学（IHC）技术应用于乳腺癌患者Her2基因检测的评价

目的探讨采用荧光原住杂交（FISH）技术检测乳腺癌患者中的Her2基因与免疫组织化学（IHC）检测Her2基因的结果的一致性以及导致两者差异的可能原因；了解荆州地区乳腺癌患者中Her2基因的分布。方法以FISH方法，对55例免疫组织化学分别为（3＋），（2＋），（1＋）和阴性（-）的乳腺癌新鲜石蜡切片标本进行Her2基因的检测。结果55例标本中，有16例采用FISH方法检测出Her2基因的表达；12例Her2基因表达（3＋）的标本中11例检测出Her2基因；7例Her2基因表达（2＋）的标本中5例检测出Her2基因；10例Her2基因表达（1＋）的标本中未检测出Her2基因；26例Her2基因表达（-）的标本中未栓测出Her2基因。结论初步筛查Her2基因状态可以首选免疫组织化学方法，对于IHC（2＋）的标本，应该行FISH确诊。

六种抗大鼠Nogo-A分子单克隆抗体的免疫荧光组织化学染色特性的比较

目的:检测和比较6种针对大鼠Nogo-A分子不同表位的单克隆抗体(mAb)应用于中枢神经组织的免疫组化染色特性,从而决定它们今后可能的应用范围和方法。其中4种mAb是针对Nogo-A分子中Nogo66片段,分别命名为No-go66-1、Nogo66-2、Nogo66-3和Nogo66-4;其他2种mAb是针对Nogo-A分子氨基端(570-691)肽段,分别为Nogo-N1和Nogo-N2。方法:利用免疫荧光组织化学,检测Nogo-A mAb抗体对大鼠神经组织的反应性与特异性。结果:正常SD大鼠脊髓组织的免疫荧光组织化学双标结果显示,制备的6种抗大鼠Nogo-A分子mAb均可以与商品化的兔抗大鼠Nogo-A多克隆抗体(PcAb)双标记;其中Nogo66-1、Nogo66-2、No-go66-4和NogoN-2 mAb可与MBP阳性细胞双标记,与GFAP阳性细胞不共存;而Nogo66-3和NogoN-1 mAb不仅可以与MBP阳性细胞双标,同时也可以和GFAP阳性细胞共存。结论:Nogo66-1、Nogo66-2、Nogo66-4和NogoN-2 mAb可很好的识别组织中的Nogo-A分子,用于免疫组化研究。

免疫组织化学法双色银染原位杂交与荧光原位杂交技术检测乳腺癌HER-2基因状态的应用

目的:比较免疫组织化学法(IHC)、双色银染原位杂交(DISH)、荧光原位杂交技术(FISH)对乳腺癌HER-2基因状态的应用效果。方法:回顾性的选取2017年1月至2019年12月我院收治的180例乳腺癌患者作为研究对象,均为女性、单侧,取组织标本行IHC、DISH、FISH检查HER-2。结果:180例患者中各检测方式对HER-2基因的检查效果:IHC检查HER-2表达阴性118例、HER-2表达阳性49例,可疑阳性13例;DISH检查HER-2基因扩增56例、无扩增107例、不确定17例;FISH检查HER-2扩增54例、无扩增107例、不确定19例。各检测方式比较:DISH与IHC检查HER-2基因的Kappa值为0.788,一致性较好;FISH与IHC检查HER-2基因的Kappa值为0.784,一致性较好;DISH与FISH检查HER-2基因的Kappa值为0.939,一致性高。结论:IHC、DISH、FISH均可对乳腺癌患者的HER-2基因状态行评估,可以IHC作为筛查手段,若医疗资源许可应当结合DISH检查结果制定治疗方案。

荧光原位杂交和免疫组织化学技术检测乳腺癌HER-2基因扩增和蛋白表达状态对照研究

目的比较荧光原位杂交(FISH)与免疫组织化学技术(IHC)在检测乳腺癌患者HER-2基因扩增和表达状态方面的应用。方法采用FISH技术对66例IHC检测结果为HER-2基因过度表达(3+/2+)和低表达或无表达(1+/-)的乳腺癌石蜡切片进行HER-2基因扩增状态检测。结果用FISH技术检测42例IHC结果显示HER-2基因过度表达(3+/2+)的标本,31例显示HER-2基因扩增,11例无扩增。检测24例IHC检测显示HER-2基因低度表达或无表达(1+/-)的标本,均未显示HER-2基因扩增。两组之间比较,Kappa系数为0.672,P<0.001,显示两项检测技术具有良好的一致性。另外,用FISH技术检测到部分病例显示17号染色体多体性,并且该多体性在HER-2高表达(3+/2+)的病例发生率显著高于低表达或无表达(1+/-)的病例(χ2=4.688,P=0.03)。结论FISH和ICH两项技术具有良好的一致性,IHC可作为HER-2基因扩增和表达状态检测的筛查手段。FISH技术可以作为检测HER-2基因扩增和17号染色体多体性的确诊手段。

荧光原位杂交法与免疫组织化学法检测乳腺癌c-erbB-2表达的比较

目的比较免疫组织化学法(I HC)和荧光原位杂交法(FISH)检测乳腺癌c-erbB-2状态的一致性。方法选取乳腺癌石蜡标本共50例,其中以I HC法检测c-erbB-2蛋白表达(+)10例、()20例、()20例。以FISH法检测上述乳腺癌细胞c-erbB-2基因扩增情况,分析比较两种方法差异性与相关性。结果在I HC检测乳腺癌c-erbB-2(+)和()时,FISH检测结果与其具有较好的一致性,总符合率为89.2%。在I HC检测c-erbB-2()时,FISH结果与其一致性较差,符合率仅为35.3%。结论I HC可以作为初步筛查c-erbB-2表达的首选方法;I HC检测乳腺癌c-erbB-2(+)和()时与FISH有良好的一致性。因I HC检测c-erbB-2表达()时与FISH结果的一致性较差,这类患者在应用赫赛汀治疗时应做FISH确诊。

免疫组织化学和荧光原位杂交检测肺腺癌ROS1表达的对比

目的 比较免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）和荧光原位杂交（fluorescent in situhybridization,FISH）技术在检测肺腺癌中ROS1蛋白表达和融合基因的差异性和一致性,评估IHC在临床上的应用价值。方法 应用IHC和FISH技术对332例肺腺癌中ROS1蛋白表达和融合基因进行检测,比较两者检测的结果和相关性,并探讨ROS1融合基因与临床病理特征之间的关系。结果 332例肺腺癌中FISH阳性者13例,阴性者319例,ROS1融合基因阳性率为3.9%;ROS1蛋白表达结果：0者312例,1＋者2例,2＋者5例,3＋者13例,ROS1蛋白过表达率为6.0%;经FISH检测312例ROS1蛋白表达为0的标本无ROS1融合基因,2例1＋的标本中也无ROS1融合基因;5例2＋的标本中有2例ROS1融合基因,13例3＋的标本中11例有ROS1融合基因;IHC检测0和1＋、2＋、3＋标本FISH检测阳性符合率分别为0（0/314）、40%（2/5）和84.6%（11/13）;IHC检测ROS1蛋白为2＋～3＋的标本中72.2%（13/18）显示ROS1融合基因,0～1＋患者中无1例有ROS1融合基因（Kappa系数=0.831,P〈0.01）;IHC检测ROS1蛋白表达的敏感性和特异性分别100%和98.4%。结论 IHC检测ROS1蛋白表达和FISH检测ROS1融合基因,两种方法有较高的符合率,一致性较好,IHC有较高的敏感性和特异性,可作为临床检测肺腺癌ROS1融合基因的简单而有效的方法。

荧光原位杂交法与免疫组织化学法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究

目的比较桂林市荧光原位杂交法(FISH)和免疫组织化学法(IHC)检测乳腺癌组织中人表皮生长因子受体(HER-2)基因扩增及其蛋白表达情况的一致性,探讨FISH与IHC检测乳腺癌HER-2基因状态的临床意义。方法应用IHC和FISH对50例乳腺癌患者HER-2蛋白表达、基因扩增情况及17号染色体倍体性进行检测,分析IHC与FISH检测HER-2基因状态的差异以及HER-2蛋白状态与17号染色体倍体性的相关性。结果FISH与IHC结果总的符合率为82.0%,两者之间存在较好的一致性(kappa=0.640),FISH检测IHC结果为3+、2+和0/1+者的符合率分别为92.9%、70.0%和80.8%;IHC3+及2+者出现17号染色体多体性的几率比IHC0/1+者高(P<0.05)。结论FISH可以准确和稳定地检测乳腺癌组织中HER-2的基因状态及17号染色体倍体性;FISH检测IHC3+者符合率较高,FISH与IHC的差异主要在于IHC2+和IHC0/+组,IHC仅作为检测HER-2基因状态的初筛方法,而IHC结果为2+或0/1+者的HER-2基因状态必须应用FISH进一步确定。

应用改进的免疫荧光组织化学染色法对水稻根尖细胞微管结构的观察

植物细胞微管在细胞形态建成中具有重要作用。它体积小,且结构始终处于动态变化之中,因此观察到清晰的微管形态有一定的困难。本实验以水稻根尖为材料,介绍了一种改进的植物细胞微管免疫荧光组织化学染色方法,用此方法可以观察到清晰、完整的植物微管形态,此法对观察其它植物细胞微管结构也具有指导作用。

Kikuchi病相关性皮肤病变:一项综合16例患者的临床病理学、免疫组织化学以及免疫荧光特征并侧重于其鉴别诊断的分析研究

Kikuchi病（Kikuchi＇s disease,KD）是一种以颈部淋巴结肿大和发热为特征的自限性坏死性淋巴结炎。虽然有文献报道该病可累及皮肤,但相关皮肤损害特征尚未被充分认识,因此作者回顾了16例经淋巴结及皮肤活检证实且伴有皮肤累及的KD患者,并进行了免疫组化、免疫荧光与EBER原位杂交检测。

μ阿片受体在大鼠痛一级传入神经元中的免疫组织化学定位——荧光双标与电镜双标研究

μ阿片受体在大鼠痛一级传入神经元中的免疫组织化学定位——荧光双标与电镜双标研究李和李肇春王小丽张亦农杨世明（同济医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室，武汉４３００３０）以前的研究表明，阿片受体可存在于一级传入神经元中，在脊髓后角胶状质或三叉神经脊束...

烟碱型乙酰胆碱受体α3和/或α5型在大鼠脑垂体中的表达:荧光双标免疫组织化学研究

为了探讨在大鼠脑垂体中,包含α3和 /或α5亚单位的烟碱型乙酰胆碱受体(N -AChR)是否存在,我们运用免疫荧光双标记技术对成年雄性大鼠脑垂体进行了研究。结果显示:N -AChR的α3和 /或α5亚单位样免疫反应阳性物质局限性地分布在神经垂体的催产素能神经纤维上,并一直延续到神经垂体的尾侧末端。

胚胎脑片免疫荧光组织化学双重漂染技术在神经元发生研究中的应用

目的为更客观地观察胚胎脑神经祖细胞的增殖、分化和迁移,建立胚胎脑片免疫荧光组织化学双重漂染技术。方法灌流固定,取胚胎14天(E14)大鼠脑,低熔点琼脂糖包埋,振动切片机连续冠状切片,免疫荧光组织化学双重漂染,激光扫描共聚焦显微镜下观察。结果波形蛋白(Vimentin)和乙酰胆碱转移酶(ChAT)双阳性细胞呈黄色荧光,胞体位于脑室区,长突起呈放射状。ChAT阳性细胞呈红色荧光,除胞体位于脑室区,长突起呈放射状伸展外,可见皮层板区也有阳性细胞集聚。结论此项技术可直接观察到胚胎脑神经祖细胞和成神经细胞的完整形态,并通过免疫荧光组织化学方法鉴定其表型,从而阐明相互之间的关系。

肝细胞癌组织ICOS^+T细胞的多重免疫组织化学检测及其预后价值研究

背景与目的:诱导共刺激分子(inducible costimulator,ICOS)属于B7-CD28免疫球蛋白超家族成员,表达于活化T细胞表面,在T细胞的激活和免疫应答中发挥重要作用;但目前对于ICOS及ICOS^+T细胞在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)肿瘤组织中的表达及其意义尚不清楚。该研究旨在测定ICOS、ICOS^+T细胞在HCC患者肿瘤组织中的表达情况并探讨其预后价值。方法:应用组织芯片(tissue microarrays,TMAs)和多重免疫组织化学技术(multiplex immunohistochemistry,mIHC)检测2006-2007年在复旦大学附属中山医院接受手术治疗的358例原发性HCC患者肿瘤组织和癌旁组织中ICOS^+细胞、ICOS^+CD4^+及ICOS^+CD8^+T细胞的浸润密度和ICOS^+细胞占CD4^+、CD8^+T细胞的百分比。应用KaplanMeier法和多因素COX回归模型分析上述指标对患者预后的影响。结果:与癌旁组织相比,ICOS^+细胞和ICOS^+CD4^+T细胞在肿瘤组织中浸润数量显著增加(P<0.000 1和P=0.009 1),而ICOS^+CD8^+T细胞则呈相反的降低趋势(P=0.033);在肿瘤中,ICOS^+CD4^+T细胞的浸润程度显著高于ICOS^+CD8^+T细胞。此外,ICOS^+CD4^+和ICOS^+CD8^+T细胞占各自T细胞亚群的百分比在肿瘤组织中均显著增加(P均<0.000 1)。预后分析发现,肿瘤组织中ICOS^+细胞、ICOS^+CD4^+及ICOS^+CD8^+T细胞浸润高的患者总生存期(overall survival,OS)更长,多因素分析证实上述指标是HCC的独立预后良好因素。结论:ICOS在HCC患者的肿瘤组织中高表达,且ICOS^+细胞、ICOS^+CD4^+及ICOS^+CD8^+T细胞是OS的独立预后良好因素,提示上述指标可作为新的HCC预后免疫标志物。