多重荧光原位杂交检测多发性骨髓瘤复杂核型异常

目的探讨多重荧光原位杂交(MFISH)技术在多发性骨髓瘤(MM)复杂核型异常(CCAs)检测中的价值。方法对5例常规R显带具有CCAs的MM患者应用MFISH确定复杂染色体的重排及标记染色体的组成。结果明确了常规核型(CC)分析中的所有异常,共检出20种结构异常,其中缺失2种,易位18种,均为不平衡易位。最常累及的为14号染色体、1q的不平衡易位及6号染色体。结论对伴有CCAs的MM患者,MFISH技术可以明确CC分析中复杂染色体异常,并发现和纠正CC分析中漏检及误检的异常,为MM的染色体异常研究提供了一种理想的方法。

多重荧光原位杂交检测慢性淋巴细胞白血病复杂核型异常

目的探讨多重荧光原位杂交(M-FISH)技术检测慢性淋巴细胞白血病(CLL)复杂核型异常(CCA)的价值。方法应用M-FISH技术对6例常规细胞遗传学(CC)显示CCA的CLL进行研究。结果M-FISH检测仅有1例检出了CCA克隆;1例检出非复杂核型的异常克隆及1个CCA细胞;1例检出3个不同的染色体变异细胞。其余3例M-FISH未检出异常核型分裂象。6例CLL的核型分析中共发现平衡易位10种;非平衡易位9种,其中der(14)t(16;14;9)是既往文献未报道的易位。结论对伴有CCA的CLL以M-FISH技术可以发现和纠正CC漏检及误检的染色体异常。单个细胞核型异常在CLL中多见。

应用原位杂交技术比较肺腺癌和肺鳞癌的内在分子机制

目的分析肺腺癌及肺鳞癌肿瘤中染色体异常变化和基因组的改变。探讨肺腺癌及肺鳞癌细胞遗传物质的改变,揭示这两种NSCLC主要亚型发生发展的内在本质及其与临床特征之间的关系。方法应用M-FISH技术,检测肺腺癌及肺鳞癌细胞株各1株,观察其染色体数目及结构畸变情况,应用CGH技术对80例肺腺癌组织80例肺鳞癌组织中所提取的全基因组DNA进行检测,比较这两种类型的NSCLC全基因组的变化。结果M-FISH结果显示肺腺癌及肺鳞癌细胞中存在许多复杂的染色体重排,其中5、6、11、12、17号染色体最频繁参于染色体间的易位。CGH发现,在160例肺癌标本基因组中,最常见的扩增区域足1 q,2 p,3 q,5 p,5 q,7 p,8 q,11 q,12 q,14 q,16 p,17 p.19 p,20 q,21 q,22 q。最常见的缺失区域是2 q.3 p,4 p,5 q,7 q,8 p,9 p.13 q,14 q,17 p。在肺腺癌中最常见的扩增位点足16p13,阳性率达50%.而肺鳞癌中最常见的扩增位点是17q21(45%),并且这两个位点的变异在肺腺癌和肺鳞癌之间有着显著性的差异(P<0.05)。结论M- FISH和CGH技术是研究肺癌基因组变化的强有力的工具,本实验中发现的基因改变町能代表了与肺腺癌及肺鳞癌特有的病理,诊断相关和候选基因。

多重荧光原位杂交检测骨髓增生异常综合征患者复杂核型异常

目的探讨多重荧光原位杂交(M-FISH)技术在骨髓增生异常综合征(MDS)患者复杂核型异常检测中的应用价值。方法对10例常规R显带具有复杂染色体异常(CCA)的MDS患者应用M-FISH确定复杂染色体的重排及标记染色体的组成,识别并确定微小易位。结果M-FISH共检出37种结构重排,包括插入易位、缺失、易位及衍生染色体。其中34种为不平衡重排;3种为平衡重排,包括:t(6;22)(q21;q12)、t(9;19)(q13;p13)和t(3;5)(?;?)。有7种重排文献未见报道。涉及17号染色体的异常及-5/5q-最为常见(10例患者中两种异常各占7例)。结论对伴有CCA的MDS患者M-FISH技术可以明确常规细胞遗传学(CC)分析中复杂染色体异常,并发现和纠正CC分析中漏检及误检的异常。为MDS患者染色体异常的分析提供了一种较理想的方法。

多重荧光原位杂交技术体系的建立及其在检测白血病复杂核型异常中的应用

目的 建立多重荧光原位杂交技术 (multiplex fluorescence in situ hybridization,M- FISH)体系 ,探讨其在检测白血病复杂核型异常中的应用。方法 联合应用常规核型分析、染色体涂抹 (chromo-some painting,CP)、染色体荧光原位杂交 (fluorescence in situ hybridization,FISH)和 M- FISH方法分析了两例白血病复杂核型。结果 对其中 1例常规核型分析显示为 4 6 ,XY,der(9) t(9;12 )的急性淋巴细胞白血病 - L 2型病例 ,M- FISH检出其具有复杂的染色体易位 :4 6 ,XY,der(2 ) t(2 ;9) ,der(9) t(9;12 ;2 2 )。对另 1例常规核型难以分析的急性单核细胞白血病 - M5型病例 ,M- FISH检出其复杂核型是 4 6 ,XY,der(2 ) t(2 ;17) ,der(10 ) t(10 ;11;17) ,der(11) t(11;?)。进一步用染色体涂抹和双色 FISH证实了 M- FISH的结果 ,并发现 ML L基因 (mixed lineage leukemia gene)受累。结论 M- FISH是筛选白血病复杂染色体异常的理想方法 ,对阐明所有白血病、乃至其它肿瘤性疾病和遗传性疾病的染色体易位和基因改变有广阔的应用前景。

多重荧光原位杂交技术检测急性髓系白血病复杂核型异常的价值

目的探讨多重荧光原位杂交技术检测急性髓系白血病(AML)患者复杂核型异常的价值。方法联合应用常规细胞遗传学、间期荧光原位杂交技术和多重荧光原位杂交技术对14例伴有复杂核型异常的 AML 患者进行研究。结果 14例 AML 患者应用常规细胞遗传学技术共检出23种染色体的数量异常和56种染色体的结构异常。常规细胞遗传学技术检出的4种染色体增加和4种染色体丢失与多重荧光原位杂交技术分析结果一致,常规细胞遗传学技术检出的12种染色体丢失经多重荧光原位杂交技术证实为衍生染色体。常规细胞遗传学技术检出的26种衍生染色体和19种标记染色体的性质被多重荧光原位杂交进一步明确。它们中大多数是由染色体不平衡易位所致,包括2种尚未报道的复杂 t(8;21)易位:t(8;21),der(8)t(8;21)(8pter→8q22::21q22→21qter),der(21)t(8;21;8)(8qter→8q22::21p13→21q22::8q22→8qter)和 t(21;8;18;1),der(8)t(8;21)(8pter→8q22::21q22→21qter),der(21)t(21;8;18;1)(21p13→21q22?::8q22→8q24?::18??::1q??q??)。复杂核型异常几乎涉及所有染色体,但以17,7和5号染色体多见。结论 AML 的复杂核型异常单用常规细胞遗传学分析常难以阐明,而联合多重荧光原位杂交则可以更好的揭示其特征。因此对伴有复杂核型异常的 AML 患者,最好进一步采用多重荧光原位杂交技术进行分析。

多重荧光原位杂交结合染色体涂抹技术检测骨髓增生异常综合征复杂核型异常

目的探讨多重荧光原位杂交（multiplex fluorescence in situ hybridization,M-FISH）及全染色体涂抹（whole chromosome painting,WCP）技术在骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndromes,MDS）复杂核型异常检测中的价值。方法对7例常规R显带具有复杂染色体异常的MDS患者应用M-FISH技术确定复杂染色体的重排及标记染色体的组成,识别微小易位。并进一步采用双色WCP技术验证M-FISH检测的结果。结果M-FISH不仅证实了R显带的结果,而且确定了R带核型分析没有确定的6种标记染色体、9种有不明来源的额外物质增加的染色体、5种衍生染色体的组成和来源及4种被忽略的微小易位。涉及17号染色体的异常及-5/5q-是MDS最为常见的两种染色体异常。WCP技术纠正了一些M-FISH漏检及误检的异常。结论M-FISH是明确复杂染色体异常的很有用的分子生物学工具,WCP是M-FISH技术的重要补充,R带核型分析结合分子细胞遗传学工具M-FISH和WCP可以更加准确地描述复杂染色体异常。

多重荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤复杂核型异常

目的 探讨多重荧光原位杂交（multiplex fluorescence in situ hybridization,M-FISH）技术在多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）复杂核型异常（complex chromosomal aberrations,CCAs）检测中的价值.方法 对10例常规细胞遗传学（conventional cytogenetics,CC）方法检测具有复杂核型的MM患者应用M-FISH技术确定复杂染色体的重排及标记染色体的组成.结果 M-FISH证实了CC显示的29种结构异常,并进一步明确了1p-、6q-、9q-、9q＋、＋8q＋×2、14q＋、？14q、der（4）、der（22）、der（1）t（1;？）（q10;？）、der（3）、del（7）的具体来源;同时也发现CC分析没有发现或不能识别的21种异常,其中t（2;15）（q33;q22）、t（6;7）（q23;q34）、t（8;11）（q24;q23）、t（1;14）（q10;q32）和t（X;1）（q26;q25）是新发现的核型异常.这10例随访的MM患者病例资料中9例已死亡,中位生存期仅为23个月,较公认的MM患者的平均生存期34个月明显缩短.结论 对伴有CCAs的MM患者,M-FISH技术可以明确CC分析中复杂染色体异常,并发现和纠正CC分析中漏检及误检的异常,为MM的染色体异常研究提供了一种重要的方法,已经成为精确染色体核型分析所不可缺少的手段之一.

常规细胞遗传学检查联合多重荧光原位杂交技术确定急性白血病患者复杂核型异常

目的 探讨多重荧光原位杂交（M-FISH）技术在急性白血病（AL）患者复杂核型异常和标记染色体检测中的应用价值.方法 对11例常规R显带检测显示具有复杂核型异常和标记染色体的AL患者应用M-FISH技术确定复杂染色体重排和标记染色体的组成,识别并确定微小易位和隐匿易位.结果 11例AL患者应用常规细胞遗传学（CC）技术共检出27种染色体数目异常和41种结构异常.CC技术检出的3种染色体增加和9种染色体丢失以及12种结构异常与M-FISH分析结果一致,CC技术检出的15种染色体丢失经M-FISH证实为衍生染色体,M-FISH还检出3种CC检查未发现的染色体数目增加.CC检查所检出的其余29种结构异常（包括17种标记染色体）的性质被M-FISH进一步明确.M-FISH共检出33种结构重排,有6种异常未见文献报道,分别为t（5q-;16）（？q14;q24）、der（9）（Y：：9：：Y：：9）、der（7）（7：：8：：9）、ins（20;21）、der（11）（11：：21：：20）和der（3）t（3p-;13）（3p-;q21）,这些复杂染色体重排主要由染色体不平衡易位所致.复杂核型异常几乎涉及所有染色体,在AML患者以涉及17、5、7、15和11号染色体的异常较为常见;在ALL患者则以涉及8、9、14和22号染色体的异常较为多见.结论 联合应用CC和M-FISH检查可以提高CC核型分析的分辨率,对伴复杂核型和标记染色体的AL具有一定的临床应用价值.

M-FISH在实体肿瘤研究中的应用

本文综述了M-FISH在实体肿瘤研究的最新进展。介绍了M-FISH技术的原理,讨论了M-FISH使用的探针、M-FISH在肿瘤细胞系研究和肿瘤组织标本研究中的应用以及M-FISH技术的优缺点。

不同检测方法在羊水细胞性染色体嵌合产前诊断中的应用比较

目的比较不同产前羊水检测技术的性染色体检测结果,评估不同检测方法对检测结果的影响,指导临床工作中正确认识各项检测结果的临床意义。方法对羊水细胞行染色体核型分析提示为性染色体嵌合体的标本,进行分子生物学检测,比较不同检测方法提示的性染色体的结果。结果核型分析提示为性染色体嵌合体的22例孕妇的23例标本中,多重连接探针扩增技术(MLPA)检测了20例,染色体微阵列检测(CMA)检测了9例,荧光原位杂交技术(FISH)检测了4例,11例标本核型结果与分子生物学检测结果一致,12例标本核型结果与分子生物学检测结果不一致。结论经典的羊水细胞染色体核型分析技术作为传统认为的“金标准”在性染色体嵌合体的检测中,其检测结果并不准确,可能原有部分细胞的丢失或者优势生长,甚至异常细胞的分裂和异常细胞类型的获得,需要选择不同的技术组合,综合分析得出结论,以提供更准确的临床信息,指导产前诊断和临床咨询。

一例伴有双ider(17q)的急性早幼粒细胞白血病的临床及实验研究

本研究报道一例伴有双ider(17q)特殊复杂核型异常急性早幼粒细胞白血病(APL)的临床和实验特征。对一例复发APL患者进行多参数流式细胞术免疫分型、传统细胞遗传学分析,并应用荧光原位杂交(FISH)和多重荧光原位杂交(M-FISH)两种技术进一步明确染色体异常。结果表明:该患者染色体核型分析提示为47,XY,1p-,15q+,ider(17q)×2;FISH检测同一细胞中出现5个PML-RARα融合信号;M-FISH进一步明确并证实上述结果。免疫表型检测显示高表达CD13和CD33,而CD34、HLA-DR及T、B淋巴细胞标志阴性。结论:双ider(17q)是APL中一种罕见的附加异常,联合应用FISH及M-FISH技术是确认复杂染色体异常的可靠手段。

免疫磁珠分选和MLPA技术联合检测多发性骨髓瘤分子遗传学异常系统的建立

目的探讨联合免疫磁珠分选和多重探针连接依赖性扩增(MLPA)技术检测多发性骨髓瘤(MM)分子遗传学异常的可靠性。方法收集29例初诊MM患者的骨髓细胞,用CD138磁珠进行分选,设计MLPA探针检测分选前后标本TP53和RB1的表达情况,并与FISH检测结果进行对照。结果 MLPA检测成功率100%,与FISH结果吻合度达99.1%,分选后MLPA和FISH阳性率均有显著性提高。结论 MLPA适合临床MM分子遗传学异常检测,标本应在检测前进行磁珠分选。

FISH联合multiplex RT-PCR检测MLL基因重排的价值探讨

目的:采用荧光原位杂交(FISH)与逆转录多重巢式聚合酶链反应(multiplex RT-PCR)技术检测急性白血病中MLL基因重排的情况,分析两者联合应用的诊断价值。方法:对2008年1月～2011年5月在我院诊断为急性白血病的201例患者采用MLL双色断裂分离重排探针进行FISH检测,同时用multiplex RT-PCR技术检测11种较常见的MLL融合基因,观察MLL基因异常的检出率。所有患者均进行常规染色体核型分析(CCA),观察11q23重排率作为对照。结果:共有19例患者出现11q23/MLL基因重排,在急性髓细胞白血病(AML)中的检出13例(10.2%),急性淋巴细胞白血病(ALL)的检出6例(8.2%)。FISH联合multiplex RT-PCR对MLL基因重排的检出率为9.45%,CCA对11q23异常的检出率为5.47%。5例正常核型的患者和3例未涉及11号染色体异常的患者中FISH检出了1例MLL倒位和3例扩增信号,multiplex RT-PCR检出了7例dup MLL(11q23)重排。结论:FISH联合multiplex RT-PCR能提高MLL基因重排检出率。

伴复杂核型异常的髓系恶性血液病8号染色体异常分析

为研究伴复杂核型异常(complex chromosome abnormalities,CCA)的髓系恶性血液病的8号染色体异常,采用常规染色体分析和多重荧光原位杂交技术检测81例伴CCA的髓系恶性血液病患者的染色体异常,其中急性髓系白血病(AML)25例、慢性髓系白血病(CML)35例和骨髓增生异常综合征(MDS)21例。结果表明:81例标本中CCA涉及所有染色体,而8号染色体异常发生率为35.8%(29/81),其中AML为56%(14/25)、CML为28.6%(10/35)、MDS为23.8%(5/21),CML加速期、急变期发生率分别为20%(1/5)、33.3%(9/27)。29例伴8号染色体异常的髓系恶性血液病中有15例为非平衡易位,占51.7%。结论:8号染色体异常是伴CCA的髓系恶性血液病中常见的染色体异常,可能与疾病进展相关,多为不平衡性易位。

伴有复杂核型的急性早幼粒细胞白血病的临床及实验研究

目的:探讨伴有复杂核型的急性早幼粒细胞白血病的临床和实验室特征。方法:应用常规细胞遗传学,间期荧光原位杂交技术(FTSH),多重荧光原位杂交技术,检测2例急性早幼粒细胞白血病。结果:常规细胞遗传学检测发现2例具有复杂核型,间期FISH证实2例均含有PML/RARA融合基因,多重FISH明确复杂核型性质。2例预后均较差。结论:联合常规细胞遗传学,间期FISH,多重FISH可以准确明确复杂核型的性质。具有复杂核型的急性早幼粒细胞白血病患者预后较差。

胎儿染色体异常快速产前检测方法的研究进展

快速产前检测方法是产前诊断的重要组成部分,包括细胞和分子遗传学和超声诊断。由于细胞和分子遗传学检测技术的介入,胎儿染色体非整倍体的快速检出及某些染色体结构异常的鉴别能力,得到了很大的提高。目前临床上较常用的细胞和分子遗传技术包括荧光原位杂交技术(FISH)、荧光定量PCR(QF-PCR)、多重连接探针扩增技术(MLPA)和微阵列比较基因组杂交技术(array-CGH)。在怀孕的第1和第2个"3个月"阶段进行有效的超声检查,常见的染色体异常都可以被检测出来。因此,将细胞和分子遗传技术与超声检测相结合,可以提高胎儿染色体非整倍体的检出率和产前诊断的准确性,以减少缺陷婴儿的出生。

MLPA在产前诊断性染色体嵌合体的应用价值

目的探究多重连接探针扩增技术(MLPA)在产前诊断性染色体嵌合体的价值。方法收集2015年6月~2016年6月东莞市妇幼保健院产前诊断中心经核型分析或MLPA P095非整倍体检测试剂盒检测发现的性染色体嵌合体病例作为研究对象,共11例。比较这两种方法的检测结果,并用荧光原位杂交(FISH)验证性染色体嵌合体的真实性。结果 MLPA结果显示,11例标本中,有9例标本(病例9至病例17)MLPA与核型分析结果均是阳性,其中8例(病例9至病例16)两种结果一致,1例(病例17)结果有差异。有1例(病例18)MLPA检测结果为嵌合体,而核型分析正常,有1例(病例19)核型分析发现嵌合体,而MLPA检测结果正常。FISH检测:除病例16外,其余病例均为真性嵌合体。MLPA、核型分析诊断性染色体嵌合体的灵敏度为90%,符合率为81.82%。结论 MLPA对于产前诊断性染色体嵌合体具有重要意义。

儿童急性白血病MLL基因的检测及临床意义

目的对儿童急性白血病(acute leukem ia,AL)MLL基因重排进行临床和实验研究。方法采用荧光原位杂交(FISH)和多重RT-PCR技术,联合染色体R带核型分析及流式细胞仪免疫表型检测,对27例儿童AL进行分析。结果25例儿童AL中的9例(36.0%)有MLL重排,ALL中的发生率为4.0%,AML中的发生率为3.7%。多重RT-PCR检测到MLL易位产生的融合基因4例,分别为MLL/AF4 2例、MLL/AF9和MLL/AF10各1例;27例白血病患儿进行了染色体核型分析,22例(81.5%)有克隆性染色体异常。在MLL重排中ALL均为B系ALL,AML均为M5b。结论MLL基因重排可能与儿童急性单核细胞白血病和B细胞系ALL有关。

MLPA联合FISH在DMD基因突变产前诊断中的价值探讨

目的:分别采用多重连接探针扩增技术(MLPA)与荧光原位杂交技术(FISH)针对外周血及羊水标本分析杜氏/贝氏肌营养不良(DMD/BMD)患者DMD基因缺失/重复突变的类型。分析在DMD/BMD产前诊断中两者联合应用的诊断价值。方法:对2009年1月-2010年1月在我院行基因诊断的3个DMD/BMD家系共5位先证者及其15位女性亲属采用MLPA进行DMD基因的分析,获得缺失/重复片段范围,再通过BAC克隆制备相应区段的直标型FISH探针,并用X染色体着丝粒探针作为对照。分别采取MLPA和FISH技术对羊水标本进行检测,与分娩后取样的MLPA检测结果进行对照。结果:MLPA与FISH技术检测效果在外周血中完全一致,但3例羊水标本中采用MLPA进行检测有1例无法满足分析要求,1例出现假阳性结果,另1例为真阴性结果,MLPA联合用FISH检测结果均正确。结论:MLPA和FISH检测DMD基因缺失/重复在外周血中都能够获得准确的结果,但对于羊水标本MLPA联合FISH进行检测的准确性更高。