流式微球捕获蛋白定量检测技术的原理与应用

流式微球捕获蛋白定量检测技术也被称为悬浮点阵技术、液态芯片技术,是基于流式检测技术和荧光微球捕获技术的液相、高通量、多重蛋白定量技术,基本原理是在荧光编码捕获微球表面进行的荧光标记液相抗原抗体反应,具有流式技术检测速度快、定量准确、多参数、高通量的特点,检测所需样品量小,可同时检测一个样品中数种到数十种可溶性蛋白,具有良好的可重复性,是固相酶联免疫吸附检测的一项良好的替代技术,在病毒感染、各类炎症、过敏性疾病、自身免疫病、肿瘤、移植、药物研发等相关的研究领域具有应用价值,在儿科危重病患儿的诊断和治疗、急性公共传染性疾病的研究和临床诊治中具有特殊意义。文章主要介绍流式微球捕获蛋白定量检测技术的技术原理、特点、应用与局限性。

晚期膝骨关节炎患者外周血中趋化因子表达谱的特征分析

目的探讨行关节置换术的晚期膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者外周血中趋化因子谱的特征及变化,了解其慢性炎症状态。方法选取2016年1—7月在第二军医大学长征医院住院的行关节置换术的晚期膝OA患者共20例,设为OA组,同期选取本院体检中心健康体检者共20例为正常对照组,通过流式液相多重蛋白定量技术,检测两组血浆中趋化因子表达谱水平。结果OA组和正常对照组血浆中,IL-8(CXCL8)、IP-10(CXCL10)、Eotaxin(CCL11)、MCP-1(CCL2)的浓度差异无统计学意义(P>0.05);OA组血浆中,TARC(CCL17)和RANTES(CCL5)的浓度明显低于正常对照组(P<0.05)。结论晚期膝OA患者外周血中趋化因子的产生趋于平稳甚至逐渐降低,而炎症反应可能更多的局限于关节局部。

支气管哮喘患者外周血TH1、TH2、TH17及Treg细胞相关细胞因子的表达及意义

目的研究支气管哮喘患者T_H1、T_H2、T_H17及Treg细胞相关炎性因子的变化规律。方法采用多重蛋白定量技术(CBA法)检测支气管哮喘患者及健康对照人群血清中T_H1、T_H2、T_H17及Treg细胞相关细胞因子的蛋白质表达。结果在支气管哮喘患者血清中转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-17A的表达水平明显高于健康对照人群,且差异有统计学意义(P<0.05)。在支气管哮喘患者与健康人群血清中IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论支气管哮喘患者外周血中TGF-β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-17A的表达水平明显升高,推测存在TH1、TH2、TH17及Treg细胞的比列失衡。

流式微珠阵列术在医学中的研究进展

随着高分子微球技术的日益创新,流式细胞术与高分子微球技术相结合的流式细胞微球芯片捕获技术也随之产生,流式细胞微球芯片捕获技术又称为流式微球分析技术、流式微球技术、流式微珠阵列术,具有检测灵敏度高、特异性强、分析速度快等优点,应用前景广阔。我们就流式细胞微球捕获芯片技术在医学中的研究进展做简要综述。

麻风患者血清Th1/Th2/Th17相关细胞因子检测

目的:检测麻风患者血清中Th1/Th2/Th17相关细胞因子水平,探讨其在麻风发病中的作用。方法:利用微量样本多重蛋白定量技术检测12例新发麻风患者,29例治愈麻风患者及37例正常人血清中IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ和IL-17A水平。利用Kruskal-Wallis和Nemenyi方法进行组间比较。结果:新发组患者血清IL-1和IL-2水平显著高于治愈组(P<0.005);新发组及治愈组患者血清IL-6水平均显著高于对照组(P<0.005);新发组患者血清IFN-γ和IL-17A水平显著高于对照组(P<0.005)。新发组、治愈组和对照组IL-4、IL-10和TNF浓度差异无统计学意义。结论:Th1/Th2/Th17某些相关细胞因子可能与麻风的发病有关。

急性白血病患儿外周血IL-17水平变化及意义

目的观察急性白血病患儿外周血白细胞介素-17(IL-17)的水平变化,并探讨其临床意义。方法急性白血病患儿43例,按照化疗结果分为未缓解组(15例)、缓解组(28例)及化疗后骨髓抑制组(19例)、非骨髓抑制组(24例),22例健康儿童作为对照组。采用流式液相多重蛋白定量技术(CBA)检测各组外周血血浆IL-17。结果未缓解组、缓解组、骨髓抑制组和非骨髓抑制组IL-17水平低于对照组(P均<0.05),未缓解组IL-17水平低于缓解组(P<0.05),骨髓抑制组IL-17水平低于非骨髓抑制组(P<0.05)。结论急性白血病患儿外周血IL-17水平降低,其表达水平部分反映了白血病的疾病状态。

褪黑素体内外对胃癌Th1/Th2/Th17型细胞因子表达的影响

目的探讨褪黑素(MLT)体内外对胃癌Th1/Th2/Th17型细胞因子干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17a表达的影响。方法 1.构建荷胃癌小鼠模型,共32只雄性615小鼠全部荷小鼠前胃癌(MFC)细胞后随机分为4组,分别用0、25、50、100 mg/kg剂量褪黑素进行腹腔注射并测量肿瘤长短径。干预1周后取外周血,剥离肿瘤组织进行称重和测量。2.将MFC接种于6孔细胞培养板中,贴壁24h后分别用0、2、4、6、8、10 mmol/L浓度褪黑素干预,24 h后形态学观察并收集相应上清液。3.采用ELISA检测外周血清中褪黑素的浓度变化。采用流式液相多重蛋白定量技术流式微珠阵列(CBA)分别检测外周血清、细胞上清液中Th1/Th2/Th17型相关细胞因子的浓度变化。结果 1.成功建立荷胃癌小鼠模型。与阴性对照组相比,褪黑素中、高剂量组小鼠外周血清褪黑素浓度明显升高,肿瘤体积明显下降。与阴性对照组相比,中剂量组血清中IL-10浓度明显增加;高剂量组血清IFN-γ、IL-2、IL-10浓度均明显增加。2.褪黑素干预MFC细胞实验中,与空白对照组相比,6、10 mmol/L褪黑素组中IFN-γ浓度显著降低;4、6、8、10 mmol/L褪黑素组中IL-6浓度明显降低,而6 mmol/L褪黑素组IL-10浓度明显升高。以上差异均具有统计学意义(P<0. 05)。结论褪黑素体内外对胃癌细胞均有抑制作用且可能通过调节Th1/Th2/Th17细胞相关因子IFN-γ、IL-2、IL-6及IL-10的表达起增强肿瘤免疫作用。

肛瘘患者外周血清炎症细胞因子IL-6和IL-17A表达水平及其在发病中的作用

目的:研究炎症因子IL-6、IL-17A在肛瘘患者外周血清中的表达水平,分析其在肛瘘发病中的作用。方法:选择49例肛瘘患者(肛瘘组)和48例健康体检者(对照组)血清,用化学发光法检测肿瘤标志物CA199,用微量样本多重蛋白定量技术(CBA)测定外周血清中IL-6、IL-17A水平。肛瘘壁病理检查采用HE染色,肛瘘脓液细菌培养根据《全国临床检验操作规程》对病原微生物进行培养鉴定。结果:肛瘘组外周血清IL-6水平明显高于对照组,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。病理检查示肛瘘组外周血清IL-6和IL-17A表达水平增高者,肛瘘壁出现大量淋巴细胞浸润。肛瘘中存在脓液及脓液细菌培养阳性的患者IL-6水平明显高于肛瘘中无脓液及脓液细菌培养阴性的患者,差异有统计学意义(P=0.008、0.001)。结论:肛瘘患者外周血清IL-6和IL-17A表达水平增高与局部淋巴细胞浸润有关,IL-6还与肛瘘是否有脓液相关,动态监测外周血清IL-6和IL-17A水平对评估肛瘘患者的病情有一定临床价值。

重型再生障碍性贫血患者血清白细胞介素17水平及免疫功能状态

目的 探讨白细胞介素（IL）-17在重型再生障碍性贫血（SAA）患者发病机制中的作用.方法 收集2012年10月至2013年10月天津医科大学总医院血液科诊断明确的SAA患者40例（初治组25例、缓解组15例）及10名健康对照的外周血标本,采用流式液相多重蛋白定量技术检测血清IL-17水平,分析其与T细胞亚群（CD4^＋/CD^8＋比值）、树突细胞（DC）亚群[髓样树突细胞（mDC）/淋系树突细胞（pDC）比值]、调节性T细胞（Treg）及血常规表达的相关性.结果 SAA初治组IL-17水平为（17.07±15.18） ng/L,明显高于恢复组[（7.09 ±3.84） ng/L,P＜0.01]和对照组[（3.53±2.08） ng/L,P＜0.01];SAA恢复组IL-17水平亦明显高于对照组（P＜0.05）.初治组CD4^＋/CD^8＋比值为0.32±0.08明显低于恢复组（1.11±0.31,P＜0.01）及对照组（1.07±0.26,P＜0.01）;初治组mDC/pDC比值为3.16±0.55明显高于恢复组（1.60 ±0.43,P＜0.01）及对照组（1.43±0.38,P＜0.01）;初治组Treg占外周血单个核细胞比例（CD4^＋ CD^25＋ CD127dim/PBL）为0.80％±0.31％明显低于恢复组（1.78％±0.69％,P＜0.01）及对照组（2.23％±0.66％,P＜0.01）.初治组IL-17水平与CD4^＋/CD^8＋比值及CD4^＋ CD^25＋ CD127dim/PBL均呈负相关（r=-0.421,P ＜0.05;r=-0.650,P＜0.01）,与mDC/pDC比值呈正相关（r=0.414,P＜0.05）,与白细胞水平呈负相关（r=-0.689,P＜0.01）;恢复组IL-17水平与白细胞水平呈负相关（r=-0.640,P＜0.05）.结论 SAA患者血清IL-17升高,并与SAA免疫功能状态及病情严重程度相关.

玉米赤霉烯酮对小鼠原代培养T淋巴细胞细胞因子分泌的影响

为探讨玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对动物免疫功能的影响及其机理,试验以分离培养的原代小鼠脾脏淋巴细胞材料,研究了ZEA对T淋巴细胞细胞因子分泌的影响。以刀豆蛋白A(Con A,5 mg/L)作为T细胞活化特异性刺激剂,试验设空白对照组(不加Con A)、Con A组(5 mg/L Con A)、不同浓度的ZEA染毒组(Con A+ZEA 10、20和40μmol/L),处理48,72 h后,使用流式液相多重蛋白定量技术检测T细胞分泌IL-2、IL-3、IL-5、IL-6和GM-CSF等细胞因子的含量。结果显示,与空白对照组相比,Con A组细胞在48,72 h时间段5种细胞因子分泌均明显上升;与Con A组比较,染毒48,72 h后,10,20,40μmol/L ZEA染毒组各细胞因子分泌浓度均有极显著下降(P<0.01),并呈剂量-效应关系。结果表明,ZEA可以抑制T淋巴细胞细胞因子IL-2、IL-3、IL-5、IL-6和GM-CSF的分泌,从而影响机体正常免疫反应的进行,降低整体的免疫功能。

利用 THP-1 细胞进行致敏物鉴定的方法验证

目的探讨建立以THP-1源性巨噬细胞为受试细胞,以细胞上清液中细胞因子表达改变为检测指标的体外检测化学物致敏性的试验方法。方法将人单核细胞株THP-1细胞用佛波酯(PMA,0.1μg/ml)诱导,使之转化为具有贴壁能力的THP-1巨噬细胞。选择5种已知的化学致敏物硫酸镍(NiSO4)、2,4-二硝基氯代苯(DNCB)、苯二胺(PPDA)、重铬酸钾(K2Cr2O7)、异氰酸酯(TDI)和2种非化学致敏物十二烷基磺酸钠(SDS)、异丙醇(IPA)为受试物,检测不同浓度受试物处理细胞的不同时间点时细胞因子表达的变化。分别用ELISA法检测细胞培养上清IL-6、TNF-α的水平,用流式液相多重蛋白定量技术(CBA)检测IL-1β、IL-8细胞因子的表达水平。结果 NiSO4、DNCB和K2Cr2O7作用6h,PPDA、TDI作用12h时,THP-1细胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-8四种细胞因子的表达量最高。5种化学致敏物NiSO4、DNCB、K2Cr2O7、PPDA和TDI在最适时间点最适浓度刺激细胞分泌IL-6的水平分别为对照组的40、25、20、50和50倍,TNF-α水平为对照组的20、12、20、8和5倍,IL-1β水平为对照组的30、60、25、30和45倍,IL-8水平为对照组的15、12、15、12和7倍;非致敏物SDS与IPA处理组IL-6水平均有升高,其中SDS组升高最明显,约为空白对照组的20倍。TNF-α、IL-1β和IL-8表达水平无明显变化。结论利用THP-1巨噬细胞检测细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-8表达水平的试验方法可以有效区分化学致敏物与非致敏物,因此这3个指标可作为鉴别化学致敏物和非致敏物的有效参考指标。

肛瘘患者Th1/Th2细胞因子平衡状态及其临床意义

目的探讨肛瘘患者Th1/Th2细胞因子平衡状态及其临床意义。方法应用微量样本多重蛋白定量技术(CBA)检测49例肛瘘患者外周血清Th1/Th2细胞因子,分析各细胞因子间相关性与临床特征的关系。结果肛瘘患者外周血清IL-4水平明显低于健康体检者,差异有统计学意义(P<0.01),TNF-α水平与健康体检者比较,差异无统计学意义(P>0.05),IL-4/THF-α明显低于健康体检者,差异有统计学意义(P<0.05)。肛瘘患者IL-10与TNF-α呈正相关(r=0.36,P<0.01),其他细胞因子无明显相关性(P>0.05)。肛瘘脓液细菌阳性的患者IL-4/TNF-α值低于细菌培养阴性的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肛瘘患者外周血清细胞因子以Th1细胞免疫反应为主,细菌培养阳性肛瘘患者Th1细胞免疫反应更为明显。