应用逆转录多重PCR方法检测正常核型急性白血病患者的易位相关融合基因

为了探讨逆转录多重PCR方法在检测具有正常核型的急性白血病(AL)患者的易位相关融合基因中的价值,应用包括19种染色体易位特异性引物对的逆转录多重PCR方法对37例经常规细胞遗传学方法揭示为正常核型的AL患者进行了检测。结果表明:有8例(21.6%)AL患者分别检测出有PML/RARA、AML1/ETO、CBFβ/MYH11和BCR/ABL等4种融合基因的存在。结论:逆转录多重PCR可在核型正常的AL患者中检出隐匿的染色体易位,故凡常规细胞遗传学显示为核型正常的AL患者,均应对其进行逆转录多重PCR检测。

MAPK信号转导通路多基因多重RT-PCR方法的建立

目的:建立检测MAPK激酶信号转导通路ERK1、JNK1、p38各基因mRNA表达情况的多重逆转录聚合酶链式反应(Multi RT-PCR)的方法。方法:自Genebank中获取大鼠及人源ERK1、JNK1及p38的基因序列,将大鼠与人的基因序列用Align X进行同源性比较,选取保守区应用primer 5软件设计3对引物,建立Multi RT-PCR检测体系,分别扩增ERK1、JNK1、p38基因,产物长度分别403、3096、07 bp;对RT-PCR扩增产物分别切胶回收进行PCR产物测序进一步验证。结果:①应用Multi RT-PCR方法对11例大鼠及11例人肝细胞癌组织进行检测,琼脂糖电泳结果显示各基因产物条带清晰、无引物二聚体产生、无非特异性扩增产物,并对各基因产物片段分别切胶测序得到证实;②对22例肝癌组织检测结果表明在肝癌组织中ERK1、JNK1、p38mRNA阳性率分别为95.83%、100%、100%,且在表达丰度上有明显的变化。结论:所建立的MAPKMulti RT-PCR检测方法具有特异性强、效率高、简单易行、可靠的特点,对MAPK信号转导通路在疾病中的作用研究具有较强的应用价值。

逆转录多重PCR检测人感染高致病禽流感H5N1亚型

目的建立并优化检测人感染高致病禽流感H5N1亚型的逆转录多重PCR(RT-MPCR)方法。方法将提取H5N1型高致病禽流感病毒RNA,逆转录为cDNA,测序后针对H5裂解位点及N1的保守区序列设计特异性引物,应用RT-MPCR对H5N1型基因进行检测,并验证所建立方法的敏感性,通过检测NDV、IBV和IBDV的RNA病毒验证其特异性。结果测序结果表明该株H5N1型与安徽株同源,经RT-MPCR扩增出302bp和567bp的两条片段,实验最低检出限为0.500pg的RNA病毒,并且特异性高。结论该法可用于人感染高致病性禽流感病毒H5N1亚型的检测。

PCR方法检测食品中沙门氏菌研究进展

对目前出现的一些具有代表性的食品中沙门氏菌的PCR检测方法做一综述,由此可以得出,目前开发出的检测食品中沙门氏菌的PCR方法正逐渐以多种PCR方法相结合、多重PCR技术以及食品样品预处理方法等为主,以开发出更快速、灵敏、简便、实时、低廉的食源性沙门氏菌PCR检测方法。

FISH联合multiplex RT-PCR检测MLL基因重排的价值探讨

目的:采用荧光原位杂交(FISH)与逆转录多重巢式聚合酶链反应(multiplex RT-PCR)技术检测急性白血病中MLL基因重排的情况,分析两者联合应用的诊断价值。方法:对2008年1月～2011年5月在我院诊断为急性白血病的201例患者采用MLL双色断裂分离重排探针进行FISH检测,同时用multiplex RT-PCR技术检测11种较常见的MLL融合基因,观察MLL基因异常的检出率。所有患者均进行常规染色体核型分析(CCA),观察11q23重排率作为对照。结果:共有19例患者出现11q23/MLL基因重排,在急性髓细胞白血病(AML)中的检出13例(10.2%),急性淋巴细胞白血病(ALL)的检出6例(8.2%)。FISH联合multiplex RT-PCR对MLL基因重排的检出率为9.45%,CCA对11q23异常的检出率为5.47%。5例正常核型的患者和3例未涉及11号染色体异常的患者中FISH检出了1例MLL倒位和3例扩增信号,multiplex RT-PCR检出了7例dup MLL(11q23)重排。结论:FISH联合multiplex RT-PCR能提高MLL基因重排检出率。

稀有白血病融合基因MLL／AFX检测方法的建立

目的建立稀有白血病融合基因MLL／AFX的检测方法。方法运用逆转录．多重PCR扩增目的条带，脱氧核糖核酸测序分析，并对l例急性部分分化型原始粒细胞白血病（M2）患者进行了方法学验证。结果该患者MLL／AFX融合基因阳性。结论逆转录．多重PcR结合测序的方法能够准确地鉴定罕见白血病融合基因MLL／AFX。该方法是一种灵敏、快速的白血病融合基因检测方法。