转基因花卉的DNA提取与多重PCR分析

分别以CTAB法、DNA提取试剂盒提取菊花、矮牵牛、非洲菊 3种花卉的基因组DNA ,凝胶电泳结果表明试剂盒提取的效果较好 .设计合成了 3对引物 ,分别扩增花椰菜花叶病毒 (Cauliflowermosaicvirus,CaMV) 35S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因 (nos)终止子、大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶II(nptⅡ )基因 .普通PCR检测结果表明 ,3种花卉 6个样品中仅矮牵牛的 1个样品含有这 3种转基因成分 ,酶切鉴定结果验证了PCR产物为非假阳性 .尝试以多重PCR同时检测转基因矮牵牛与对照阳性质粒中的 2个或 3个转基因成分 。

大豆及腐竹中转基因成分的多重PCR分析

采用CTAB法提取大豆干样、新鲜毛豆及腐竹中的总DNA,内源LECTIN基因扩增结果均为阳性,表明提取到的DNA中不存在抑制PCR的物质.应用花椰菜花叶病毒(Cauliflowermosaicvirus,CaMV)35S启动子和根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因(NOS)终止子的二重PCR分析,筛选到7个含转基因成分的样品.半嵌套式PCR检测结果表明阳性样品中的外源目的基因为来自根癌农杆菌CP4菌株的EPSPS基因.最后成功进行了扩增内源LECTIN基因、CaMV35S启动子和NOS终止子的三重PCR分析,以及内源LECTIN基因和EPSPS基因的二重PCR分析,得到预期结果.多重PCR方法具有快速、简便、准确等特点,在植物产品的转基因成分检测上具有重要的应用价值.

参照多重PCR片段分析法进行实时荧光PCR法对ABCB1三等位基因测定结果读取方法的确定

目的为解决实时荧光PCR法对三等位基因测定结果无法正常读取的问题,通过参照多重PCR片段分析法,确定实时荧光PCR法读取方法,实现临床对ABCB1三等位基因准确、简便且价格低廉的检测。方法收集西安市精神卫生中心2020年3月-2021年3月DNA样本2794例,抽取5%作为实验样本,分别进行实时荧光PCR法和多重PCR片段分析法测定。根据PCR曲线Ct值的比较以及多重PCR片段分析法碱基峰位强度的比较,对比分析两种方法的判读结果,对其中报告结果不相同的样本进行数据核查并确定PCR读取方法。结果共抽取139例样本,其中存在120例等位基因及19例三等位基因,实时荧光PCR法和多重PCR片段分析法对等位基因的检测结果完全一致。根据多重PCR片段分析结果,对19例三等位基因制定了实时荧光PCR法的读取方法:扩增曲线图中,当∣∣Ct._(G)-Ct._(T)∣-∣Ct._(G)-Ct._(A)∣∣<3,分别读取两组碱基Ct值小的碱基,将其组合形成判读结果;当∣∣Ct._(G)-Ct._(T)∣-∣Ct._(G)-Ct._(A)∣∣≥3,读取两组碱基Ct值最小的碱基,其纯合型即为判读结果。根据读取方法,修正实时荧光PCR法的测定结果为:1例G/G,1例A/A,4例T/G,5例T/A,8例T/T,与多重PCR片段分析法结果一致。结论通过多重PCR片段分析法制定实时荧光PCR法对ABCB1三等位基因的读取方法,两者判读结果一致性良好。

多重PCR方法对大豆转基因食品的定性检测

为了同时检测转基因食品中所含的多个目标基因序列,本文采用多重PCR分析技术对转基因大豆食品进行了检测。为了排除扩增结果的假阴性,大豆外源凝集素基因和肌动蛋白基因被作为内部对照以评价所有PCR反应的效率。当转基因大豆含量仅为0.15%时,仍然可以对转基因食品进行可靠的鉴定,从而表明该方法的高度敏感性。该文所述的多重PCR系统是一种简单、准确并且敏感的检测方法,只需要进行一个反应就可以检测多个目标基因序列,因而可以用来对转基因原材料及加工成品进行高精度、高灵敏的检测。

成人流感样病例13种病原体检测情况及多重PCR毛细电泳片段分析法检测的临床应用

目的探究成人流感样病例中13种病原体分布情况及多重聚合酶链反应(PCR)毛细电泳片段分析法在病原体检测中的应用价值。方法收集2019年12月至2020年2月北方地区189份流感样病例咽拭子标本,采用多重RT-PCR与毛细电泳片段分析法联用技术得到病原体的检测结果。检测病原体包括甲型流感病毒(InfA)、人腺病毒(HADV)、博卡病毒(Boca)、人鼻病毒(HRV)、甲型流感病毒H1N1(2009)(InfA-H1N1)、季节性流感病毒(InfA-H3N2)、副流感病毒(HPIV)、人偏肺病毒(HMPV)、乙型流感病毒(InfB)、肺炎支原体(MP)、肺炎衣原体(CP)、冠状病毒(HCOV)、人呼吸道合胞病毒(RSV)13种病原体。结果189份流感样病例咽拭子标本中有180份(95.24%)检测出病原体,9份(4.76%)未检测出病原体。180份病原体阳性标本单一病原体150份(83.33%),多种病原体30份(16.67%);145份(80.56%)检测出流感病原体,35份(19.44%)检测出非流感病原体。3种最常见的单一病原体是InfA-H3N2(94份,49.74%),MP(26份,13.76%),InfA(16份,8.47%);3种最常见的多种病原体是InfA-H3N2合并MP感染(15份,7.93%),InfA合并MP感染(7份,3.70%),MP合并HRV感染(3份,1.59%)。结论2019年12月至2020年2月冬季我国北方地区的成人流感病毒主要以InfA-H3N2为主;非流感病毒也可引起流感样病例,以MP感染较多见;部分流感样病例可见混合感染。多重PCR毛细电泳片段分析法有助于全面了解成人流感样病例中病原体分布情况。

多重定量荧光PCR快速检测染色体非整倍体疾病

目的探讨多重定量荧光PCR快速检测染色体非整倍体标本疾病的价值。方法利用21,18,13号及X染色体上15个STR(短串联重复序列)位点进行多重PCR扩增,在24h内快速检测染色体非整倍体标本。通过建立两个多重PCR体系,对921例临床标本(包括外周血、绒毛膜及羊水标本)进行检测。结果 921例标本中915例结果与染色体核型结果相符,其中2例45,X外周血标本,2例21-三体综合征标本、1例46,XX标本未检出,1例羊水标本分析失败,与传统染色体核型分析方法相比,其灵敏度及特异度分别为97.64%、99.85%。结论多重定量荧光PCR技术可用于快速诊断非整倍体疾病。

肝胆管腺纤维瘤:6例形态学、肿瘤遗传学和预后分析

胆管腺纤维瘤是一种罕见的原发性肝肿瘤，至今仅有14例报道。作者对6例胆管腺纤维瘤患者的临床病史和形态学进行复习，并采用多重PCR分析肿瘤DNA的点突变和阵列比较基因组杂交技术行拷贝数异常检测。本组女性4例，男性2例，年龄46—83岁，肿瘤直径7—16cm。肿瘤形态学特点相似，

抑癌基因p16突变与鼻咽癌的相关研究

目的研究鼻咽癌p16基因的状态。方法采用多重PCR分析法,单链构像多态性分析法(SS-CP)对48例鼻咽癌标本与相应的癌旁组织中p16基因突变情况进行了检测。结果48例鼻咽癌标本中16例p16基因第2外显子缺失,相应的癌旁组织未检出。结论p16基因在鼻咽癌中存在高频率缺失,其改变与鼻咽癌发生发展有密切关系。

商丘市、济源市腹泻患者、家禽、家畜粪便中E.coli O157:H7的鉴定

目的 :对商丘市、济源市从腹泻患者和家禽、家畜粪便中首次分离的E .coliO1 57:H7进行生物学特性等方面的研究。方法 :采集疫区患者、外环境、家畜和家禽粪便标本 1 895份 ,采用mEC肉汤增菌、胶体金免疫卡快速测定法、免疫磁珠集菌法、CHROMAGAR O1 57:H7显色培养基分离及多重PCR分析毒力基因等方法进行病原菌的分离和检测。结果 :共分离出 1 37株E .coliO1 57:H7菌株 ,在CHROMAGAR O1 57:H7显色培养基生长形态、颜色 ,生化反应出现多样化 ,rfbO1 57、stx2、hlyA、eaeA基因检测均阳性的有 58株 ,stx2阳性 1株 ,eaeA阳性 4株 ,72株无毒力基因。结论 :为本省实验室诊断E .coliO1 57:H7提供了理论依据 ;不同种类的家禽、家畜分离的产毒菌株比例差别显著 ,以波尔山羊最为突出 ;为今后在制定对该菌的诊断标准。