嗜碱芽孢杆菌cotA基因克隆表达及部分性质研究

为了获得具有高性能的多铜离子氧化酶,从极端微生物嗜碱芽孢杆菌(Bacillus clausii KSM-K16)中克隆表达了其芽孢外衣蛋白CotA。根据B.clausii KSM-K16的CotA序列及大肠杆菌密码子的偏爱性,设计和合成出该基因全长序列,构建pET28a-cot A重组表达载体,将其转化到Escherichia coli BL21(DE3)并诱导表达出重组蛋白,纯化并研究了CotA部分生化特性。重组CotA约62 kD,表现出蓝绿色并在波长609 nm有铜离子特征吸收峰,能氧化ABTS、SGZ和胆红素等底物;以SGZ为底物,最适pH和温度分别为7.5和90℃;在80℃孵育2 h,能保持70%活性;在pH4-11范围分别孵育1 h,能保持90%活性。结果显示,嗜碱芽孢杆菌CotA是一种具有漆酶和胆红素氧化酶活性的典型多铜离子氧化酶,表现出热和酸碱稳定性。