耐多黏菌素肺炎克雷伯菌的耐药机制分析

目的诱导多黏菌素耐药的肺炎克雷伯菌,探究其对多黏菌素的耐药机制。方法药物浓度倍增法诱导多黏菌素耐药株,微量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)和最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC);PCR扩增并测序确定突变部分;终点显色法检测内毒素含量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测相关基因表达量的变化。比浊法和活菌计数法分别测定生长曲线;结晶紫半定量法分析生物被膜形成能力。结果诱导得到4株耐药株,菌株MIC和MBC均大幅提升且有一株mgrB上游基因突变,内毒素含量升高,mgrB表达量下降,PhoPQ和pmrHFIJKLM相关基因表达均上升。突变株生长状况与野生株基本一致,生物被膜形成能力增强,waaA基因表达上升。结论肺炎克雷伯菌mgrB上游基因突变是多黏菌素耐药原因之一,并可引起内毒素含量升高和生物被膜形成能力增强。