斜纹夜蛾病毒对γ和e的响应

从存活率和自由基两个方面研究斜纹夜蛾病毒对γ和e的辐射响应。电离辐射在斜纹夜蛾病毒中产生长寿命的自由基,其浓度与辐射剂量成线性关系。存活率与辐射剂量的关系以及存活率与自由基浓度的关系都为“肩型”曲线。拟合存活率与剂量的关系曲线,得斜纹夜蛾病毒为二次击中探测器,研究剂量—自由基—存活率的关系可获得斜纹夜蛾病毒辐射损伤机制的信息以及用ESR方法代替生物方法测定斜纹夜蛾病毒感染力的可能性。

昆虫核型多角体病毒及斜纹夜蛾病毒杀虫剂的应用

昆虫病毒是以昆虫为寄主的病毒病原物。病毒是一类形态最小结构最简单的微生物,只含有一种类型的核酸,或者是DNA,或者是RNA,无细胞构造,只有在活的寄主细胞内才能复制增殖。昆虫病毒的真正发现,是在本世纪四十年代电子显微镜发现之后,但早在1149年中国出版的《农书》中,就记载有家蚕的“高节”、“脚肿”病,即由现在所称的核型多角体病毒(NPV)所引起的“脓病”或“黄疸病”。

苜蓿银纹夜蛾病毒杀虫剂对甘蓝甜菜夜蛾的田间防效

报道了苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ Autographa californica NPV ，AcNPV）悬浮剂田间防治甘蓝甜菜夜蛾的动态效果。结果表明，10亿PIB/mL AcNPV悬浮剂以制剂用量1500、2250 mL/hm^2施药后7 d达到药效高峰，防效分别为85．38％、88．74％；750 mL/hm^2施药后则需10 d才能达到药效高峰，防效为77．51％；制剂用量750、1500、2250 mL/hm^2施用后14 d，防效为69．54％～81．34％，整体防效较好，说明可推广使用。

甜菜夜蛾核型多角体病毒颗粒剂制备及其抗逆性能评价

甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeNPV)具有专一性和高效性,可以有效控制甜菜夜蛾种群,而且对环境和生态安全。为了提高甜菜夜蛾核型多角体病毒的稳定性,以海藻酸钠为包埋材料,通过优化载体用量和进料速率等条件,采用喷雾法制备了病毒颗粒剂,并对其相关性能进行了表征和评价。结果表明:海藻酸钠质量浓度为1%,进料速率为13mL/min时制备的病毒颗粒剂呈不规则形状,颗粒剂产率79.4%,病毒含量1.0×10^(6)PIB/g,D_(50)在130μm左右。经颗粒剂海藻酸钠包埋的甜菜夜蛾核型多角体病毒具有良好的热稳定性和抗紫外性能,同时不会影响其对甜菜夜蛾幼虫的致病力。

斜纹夜蛾成虫带核型多角体病毒的巢式PCR检测

旨在建立一种快速、可靠的斜纹夜蛾成虫带核型多角体病毒(Spodoptera litura Nucleopolyhedrovirus,SpltNPV)的分子检测方法,以克服目前常规PCR技术很难检测到斜纹夜蛾成虫带病毒的缺陷。以SpltNPV的蜕皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖转移酶(ecdysteroid UDP-glucosyltransferase,egt)基因为检测对象,基于该基因序列设计了巢式PCR引物,其中一对外侧引物egt-F/R和一对内侧引物egt1-F/R,并研究斜纹夜蛾成虫带毒的巢式PCR检测可靠性。结果表明:基于egt基因的巢式PCR方法可以特异性扩增SpltNPV的DNA,引物egt-F/R的扩增检测最低限为10-7μg/μL;且基于引物egt-F/R的两轮普通PCR无法检测出成虫带毒,而采用巢式PCR方法可有效扩增出目的egt片段,巢式PCR检测方法的灵敏度比两轮普通PCR检测方法提高2个数量级。因此,本研究成功建立了基于SpltNPV的egt基因的巢式PCR检测技术,该方法为斜纹夜蛾成虫带毒、传毒等流行病学研究提供了可靠的技术支撑。

苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒与Bt混合试剂对葡萄花翅小卷蛾的毒力分析

为测定野生型和重组型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,Ac MNPV)在葡萄花翅小卷蛾生物防治中的应用潜力,本文以野生型和重组型Ac MNPV及其与苏云金杆菌(Bt)的混合试剂为试验材料,分别测定病毒及其与Bt的混合试剂对葡萄花翅小卷蛾幼虫的室内生物活性。研究结果表明:感染WT(野生型Ac MNPV)、WT-31(Ac MNPV携带苹果蠹蛾颗粒体病毒Cydia pomonella granulovirus(CpGV)orf31)、WTgp64-31(Ac MNPV缺失gp64基因、携带Cp GV orf31)的幼虫逐日死亡率呈现逐渐上升趋势,但作用速率缓慢;WT与WT-31的校正死亡率分别为80.36%、71.43%,并显著高于WTgp64-31(58.93%),但前两者之间差异不显著性。以WT和WT-31为基础,在混合有1000 IU/mL Bt的情况下,进一步分析表明,WT-31的LC50和LC90分别为1.66×10^(3)PIB/mL、3.07×10^(5)PIB/mL;浓度为104PIB/mL、105PIB/mL的WT-31的LT50分别为5.67 d、4.24 d,LT90分别为11.62 d、9.33 d;Ac MNPV能够感染葡萄花翅小卷蛾,较低浓度的Bt能够显著促进重组Ac MNPV(WT-31)的杀虫效率。研究结果将为葡萄花翅小卷蛾的生物防治提供理论依据。

夜蛾颗粒体病毒宿主筛选及其增殖因子主次研究

夜蛾颗粒体病毒(GXW9-3 Mamestra oleracea granulosis virus)简称MOGV GXW9-3。该病毒2013年首次由高小文在江苏镇江发现,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCCNO:V201340,样品呈黑色粉末状,保存于4℃冰箱。MOGV GXW9-3是寄生在鳞翅目夜蛾科昆虫真皮、脂肪组织及血细胞中的一种最重要的杆状病原病毒,以蛋白质包涵体的形式存在,蛋白质包含着一个病毒颗粒,核酸为双链DNA。本文研究影响MOGV GXW9-3增殖宿主及增殖因子的主次,筛选该病毒增殖最佳宿主及其增殖因子主次。研究结果表明,影响MOGV GXW9-3产量的因子及互作因子主次顺序为:宿主细胞 > 饲毒虫日龄与收毒时间互作 > 饲毒虫日龄与收毒时间互作 > 收毒时间 > 温度。明确饲毒宿主,饲毒虫日龄因子对病毒产量有极显著影响,饲毒虫日龄和饲毒虫日龄与收毒时间存在互作且对产量有显著影响。确定MOGV GXW9-3增殖宿主为斜纹夜蛾细胞,最佳生产条件为26~28℃、分别按药剂浓度为:6 × 106 GV/mL、4 × 106 GV/mL、3 × 106 GV/mL、2.4 × 106 GV/mL、2 × 106 GV/mL的剂量饲毒斜纹夜蛾6龄幼虫,14~16 d后提取病毒,斜纹夜蛾6龄幼虫平均单虫个体重约1.046 g,冷冻干燥后每头虫体重量约为:0.085~0.108 g,平均单虫病毒产量约为0.069~0.28亿GV/g,幼虫孵化到收集幼虫提取病毒的生产周期为24 d,病毒增殖倍数为:31.25~43.75倍。

粉纹夜蛾颗粒体病毒增效基因3′端2.5kb片段在大肠杆菌中的表达

将粉纹夜蛾Trichoplusiani颗粒体病毒增效基因 3′端 2 5kb片段插入 pQE 31中构建了重组表达载体 pQE/enhancin ,转化大肠杆菌M 15( pREP4 )在IPTG诱导下成功表达出分子量约为96kD的融合蛋白并命名为P96。初步纯化的P96显示了明显的增效活性 ,可提高棉铃虫核型多角体病毒对棉铃虫 3龄幼虫感染死亡率 2 7 4 0 %～ 34 50 % ,缩短LT50 1

粉纹夜蛾颗粒体病毒重组增效蛋白的增效作用

采用时间 剂量 死亡率模型 ,分析了粉纹夜蛾 (Trichoplusiani)颗粒体病毒重组增效蛋白P96对棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)核型多角体病毒 (HaNPV)感染棉铃虫幼虫的增效作用。结果显示 :感染后 11d ,HaNPV +P96组的LC50 值为 3.4 7× 10 3 多角体 /mL ,比HaNPV组 ( 3.89× 10 4 多角体 /mL)降低了 91.0 8% ;在 1.6× 10 4 ～ 1.6× 10 6多角体 /mL浓度范围内 ,HaNPV +P96组的LT50 值较HaNPV组缩短 0 .3～ 1.8d。

粉纹夜蛾颗粒体病毒全长增效基因在大肠杆菌中的表达

利用PCR技术扩增了粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)颗粒体病毒增效基因全长片段,扩增产物用EcoRⅠ/HindⅢ双酶消化,经0.7%低熔点琼脂糖凝胶电泳纯化后插入pRSET-B中,得重组表达质粒pRSET/enhancin;但重组子生长异常,在IPTG诱导下未能明显表达目标蛋白.用PstⅠ/HindⅢ双酶消化pRSET/enhancin,电泳回收2.7kb片段后插入pQE-30中,得重组表达载体pQE/enhancin;在IPTG诱导下于35℃成功表达出分子量(Mr)约为108×103的融合蛋白并命名为P108.初步纯化的P108显示了极显著的增效活性,对棉铃虫核型多角体病毒感染棉铃虫3龄幼虫的7d致死率提高34.03%,LT50缩短1.4d;对苏云金杆菌杀棉铃虫3龄幼虫的72h致死率提高65.96%.

斜纹夜蛾核多角体病毒gp37及其邻近序列的克隆及分析

从斜纹夜蛾核多角体病毒 (Spodopteralituranucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)基因组中克隆了 gp37基因 .分子生物学软件分析表明 ,在 gp37基因内部存在糖基化位点 .含有晚期表达基因的启动子序列(ATAAG) ,推测为晚期表达的病毒膜糖蛋白基因 .通过GP37蛋白的同源性比较 ,绘制了以 gp37基因为基础的杆状病毒进化树 ,发现与以多角体蛋白基因 (polyhedrin)为基础所绘制的杆状病毒分子进化树有较大差异 .以polyhedrin基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树将家蚕核多角体病毒 (Bombyxmorinucleopolyhedrovirus,BmNPV)与杆状病毒代表种———苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (Autographacalifornicamultinucleocapsidnucleopolyhedrovirus,AcMNPV)分开 ,根据 gp37基因分析则将二者归到同一分枝 。

保幼激素类似物对斜纹夜蛾核多角体病毒增殖的影响

分别用5×106,1×107,5×107,1×108PIBs/mL4种浓度的斜纹夜蛾核多角体病毒(SpltNPV)感染斜纹夜蛾末龄幼虫(第6龄),并于同龄期以10μg/头的保幼激素类似物(JHA)methoprene分别对各感染组进行点滴处理,以研究JHA对SpltNPV增殖的影响。研究表明,与对照组相比各不同浓度处理组病毒总产量分别提高227.06%、128.71%、52.62%、33.15%,平均单头病毒含量分别提高49.15%、48.40%、36.40%和31.11%,病毒感染死亡率分别提高119.21%、52.72%、12.64%和1.12%。其中以1×107PIBs/mL感染再经JHA处理的病毒总产量和平均单头病毒含量最高,分别为1701.8×108PIBs和60.1×108PIBs。各处理组的病毒总产量和平均单头病毒含量均显著高于其对照组。在此基础上,进一步研究了JHA对染毒与未染毒宿主消化生理的影响。结果表明,JHA处理不仅延长了6龄幼虫的寿命,增加了其取食量,而且还显著提高了幼虫的食物转化率和病毒产量。

斜纹夜蛾核多角体病毒抑制苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒诱导的斜纹夜蛾细胞凋亡

野生型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (Autographacalifornicamulticapsidnucleopolyhedrovirus,AcMNPV)感染斜纹夜蛾 (Spodopteralitura)细胞系Sl zsu 1,可引起典型的细胞凋亡 ;但可以在草地夜蛾 (Spodopterafrugiperda)细胞Sf 9中复制并形成多角体 .比较了AcMNPV p35基因在病毒感染两种细胞的复制和转录情况 ,认为 p35在非受纳细胞中及时有效的表达能阻止细胞发生凋亡 ;共感染实验结果表明 ,斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)可以抑制AcMNPV诱导的细胞凋亡并可帮助病毒进行复制 ,推测SpltMNPV基因组中与 p35同源的 p4

斜纹夜蛾核多角体病毒与增效剂混配对斜纹夜蛾幼虫的防治效果

研究斜纹夜蛾核多角体病毒与增效剂混配对斜纹夜蛾幼虫的防治效果。结果表明 ,增效剂可以提高病毒剂的杀虫效果 ,每 1 0 0 ml病毒剂 (1× 1 0 7PIB/ml)加入增效剂 0 .0 4g的防治效果最好。利用稀释 1 0 0 0倍的病毒可湿性粉剂防治银纹夜蛾、小菜粉蝶、小菜蛾幼虫 ,防效分别为 46 .7%、6 0 .0 %、47.2 %。

甜菜夜蛾核多角体病毒泛素基因的克隆及原核表达

甜菜夜蛾核多角体病毒(Spotoptera exigua multi-nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)泛素基因ubiquitin被克隆和序列分析.该基因编码区全长243bp,编码80个氨基酸残基,预计蛋白质分子量为9.4kDa。将这一ubiquitin基凶克隆到原核表达载体pET-28a上.转化至BL21 (DE3)中,用IPTG进行诱导表达,对表达的条件进行了优化。用异源的泛素单克隆抗体检测目的蛋白,Western blot实验证明所表达的蛋白是泛素蛋白。同时,我们制备了特异性的抗体,为以后的研究工作做了基础。通过计算机软件Gendoc对不同来源的泛素进行分析,结果显示,病毒中的泛素与真核细胞中的泛素相比较,泛素的氨基酸序列有较大的变化,杆状病毒的泛素基因在分子进化上可能有比较独特的途径。

甜菜夜蛾核多角体病毒(SeMNPV)gp37基因的克隆及序列分析

通过鸟枪法克隆了甜菜夜蛾核多角体病毒 (SeMNPV)基因组DNAEcoRⅠ酶切的 2 2kb片段 .序列分析表明 ,该片段含有gp37基因 .SeMNPVgp37基因的开放阅读框为 80 1个核苷酸 ,编码 2 6 8个氨基酸 ,预测蛋白质相对分子质量为 30 40 0 .在gp37基因起始密码子上游有一典型的杆状病毒晚期基因启动子序列ATAAG .同其它昆虫杆状病毒和昆虫痘病毒GP37/Fusolin蛋白的比较结果表明 ,SeMNPVGP37与已知gp37/fusolin基因的氨基酸序列同源性较高 (5 0 %～ 6 8% ) ,在其蛋白序列内存在类似的保守区和可能的N_连接糖基化位点 .在SeMNPVgp37基因下游存在一个完整阅读框和部分egt基因序列 .

斜纹夜蛾核多角体病毒VP39-GST融合蛋白原核表达

用PCR的方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)vp39全长基因。将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1上,构建重组表达质粒pGEX-4T-vp39,转化Escherichia.coliBL21(DE3),在1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下超量表达了与理论预测值相符的一个约60kDa的VP39-GST融合蛋白。VP39-GST融合蛋白的成功表达为进一步研究VP39在病毒侵染过程中与宿主细胞成分或病毒粒子蛋白间的相互作用奠定了基础。

甘蓝夜蛾核多角体病毒活体增殖因子及最佳增殖条件的研究

甘蓝夜蛾核多角体病毒Mamestra brassicae nucleopolyhedrovirus(简称Mabr NPV)是甘蓝夜蛾最重要的昆虫病原微生物。本文采用正交法研究影响Mabr NPV在甘蓝夜蛾体内增殖的主要因子及因子的主次顺序,确定互作因子并筛选病毒增殖最佳条件。研究结果表明,影响Mabr NPV产量的因子及互作因子主次顺序为C(饲毒虫日龄)>C×D(饲毒虫日龄与收毒时间互作)>B×C(饲毒剂量与饲毒虫日龄互作)>B×D(饲毒剂量与收毒时间互作)>B(饲毒剂量)>D(收毒时间)>A(温度)。明确因子C对病毒产量有极显著影响,因子C和D存在互作且对产量有显著影响。确定Mabr NPV增殖生产的最佳条件为25℃下、以500 PIB/虫的剂量饲喂12日龄幼虫,9 d后提取病毒,平均单虫病毒产量为1.921×109 PIB,幼虫孵化到收集幼虫提取病毒的生产周期为21 d,病毒增殖3.842×106倍。

苏云金杆菌对甘蓝夜蛾核型多角体病毒增效作用的研究

文章报道了甘蓝夜蛾核型多角体病毒(MbNPV)和苏云金杆菌菌株2(0 Bt20)混用对甘蓝夜蛾2龄幼虫的毒力测定。研究结果表明,Bt20菌株对MbNPV具有增效作用,用浓度为5×106、1×107芽孢.mL-1的Bt20与MbNPV混用,能显著提高MbNPV的杀虫效果和杀虫速度,研究结果表明,Bt20与MbNPV复配生物制剂的开发提供了试验依据。