草鱼补体C3基因的克隆及在感染大中华鳋草鱼个体的表达分析

利用抑制差减杂交技术 ,构建了草鱼与大中华鳋感染相关的差减文库 ,测序得到一些免疫相关基因 ,其中包含与鲤补体C3高度同源的片段 .根据此片段设计引物 ,采用RACE(rapidamplificationofcDNAends)技术 ,克隆了草鱼补体C3的cDNA ,其全长5 171bp ,编码 16 77个氨基酸 .与已报道的补体C3一样 ,草鱼补体C3同样具有在功能上比较重要的残基以及保守的硫酯区 .草鱼补体C3与高等脊椎动物鸡、小鼠以及人的C3在氨基酸序列上有着相近的相同率 (37.9%～39.1% ) ,与其他鱼类的比较显示与鲤的相同率最高 ,与鲤的 3个基因型C3 H1,C3 H2 ,C3 S的相同率分别为 80 .5 % ,75 .4 % ,79.2 % .系统发育树也显示了草鱼补体C3与鲤补体C3,尤其是鲤C3 S基因型形成一簇 .Southern杂交显示草鱼补体C3存在多个拷贝 ;虚拟Northern杂交和RT PCR进一步证实所克隆到的补体C3在感染大中华鳋的草鱼中表达量增加 ,表明草鱼补体C3是一个与大中华鳋感染相关的基因 .