大分割电离辐射对鼻咽癌细胞共培养后的树突状细胞成熟状态的影响

目的研究大分割电离辐射对鼻咽癌(NPC)细胞与树突状细胞(DCs)共培养后DCs免疫表型和迁移能力的影响。方法核磁共振检测放化疗后NPC患者(NPC组)鼻咽部肿瘤变化,流式细胞术检测NPC组及健康志愿者(健康对照组)外周血DCs数量分群[髓系DCs(CD11c+myeloid DCs,MDCs)和浆系DCs(CD123+plasmacytoid DCs,PDCs)]情况;将DCs细胞分为未成熟树突状细胞组(imDCs组)、成熟DCs组(mDCs组)、imDCs+4 Gy组以及imDCs+18 Gy组,后两组是将imDCs与大分割电离辐射(4 Gy、18 Gy)照射后的NPC细胞共培养所得;流式细胞术、Transwell小室实验以及蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测各组DCs免疫表型[人白细胞抗原DR(HLA-DR)、白细胞分化抗原(CD80)、CD83、CD86、CC基序趋化因子受体7(CCR7)]、细胞迁移能力以及细胞中环磷酸鸟苷-磷酸腺苷合成酶(cGAS)和干扰素基因刺激因子(STING)蛋白的表达。结果与放疗前相比,放疗后NPC组患者鼻咽黏膜稍增厚,肿瘤明显退缩,外周血中MDCs的数量明显减少(P<0.001);与imDCs组比较,imDCs+4 Gy组以及imDCs+18 Gy组中imDCs的免疫表型分子HLA-DR、CD80、CD83、CD86及CCR7的表达显著上调(P<0.001),且GAS和STING蛋白的表达增加(P<0.05);Transwell实验结果显示,DCs迁移能力随着电离辐射剂量的增加而增强(P<0.05)。结论经大分割电离辐射照射的NPC细胞可诱导imDCs向mDCs分化,这可能产生特异性的抗肿瘤免疫应答。

大分割电离辐射对放射抗性鼻咽癌细胞免疫原性死亡的影响

目的研究大分割电离辐射对放射抗性鼻咽癌(NPC)细胞系C666-1R细胞活力、细胞周期及免疫原性细胞死亡(ICD)的影响。方法采用0、2、4、6、8、10、12及14 Gy剂量电离辐射照射NPC细胞株C666-1和C666-1R后、常规培养48 h,采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR法检测钙网蛋白(CRT)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)及热休克蛋白70(HSP70)mRNA的表达水平,ELISA和Western blot法检测细胞CRT、HMGB1及HSP70蛋白表达水平,采用试剂盒检测细胞内腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量。结果经放射处理后不同照射剂量的C666-1R细胞活力均高于C666-1(P<0.05);与未放射细胞相比,经2~14 Gy电离辐射照射的2种NPC细胞株活力均明显下降(P<0.05),8 Gy照射的细胞活性最低(P<0.05),细胞周期阻滞于G_(2)期,CRT、HMGB1及HSP70 mRNA或蛋白表达水平、细胞内的ATP含量均上调(P<0.05)。结论大分割电离辐射能够诱导放射抗性NPC细胞发生ICD。