大叶茜草素对肝癌细胞铁死亡的影响及作用机制研究

目的 基于铁死亡通路探究大叶茜草素抑制肝细胞癌的作用机制。方法 体外培养肝癌HepG2细胞,根据IC50分为对照组、大叶茜草素低剂量组(10μmol/L)、大叶茜草素中剂量组(20μmol/L)和大叶茜草素高剂量组(40μmol/L),CCK-8法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞毒性,克隆形成实验观察细胞克隆能力,检测细胞谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、超氧化物、脂质过氧化物含量及线粒体膜电位(MMP),Western blot检测细胞铁死亡抑制蛋白1(FSP1)、GTP环化水解酶1(GCH1)、二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)4蛋白表达,RT-qPCR检测FSP1、DHODH、GCH1、GPX4 mRNA表达。在过表达和沉默GPX4条件下观察大叶茜草素对HepG2细胞活力和GSH、MDA含量的影响。结果 中、高剂量大叶茜草素可减少HepG2细胞克隆形成数目,降低细胞GSH含量和SOD活性,升高MDA、超氧化物、脂质过氧化物和ROS含量,降低MMP(P<0.001)。大叶茜草素干预对HepG2细胞FSP1、GCH1、DHODH蛋白和mRNA表达无显著影响,可降低GPX4蛋白和m RNA表达(P<0.001),过表达和沉默实验验证GPX4是大叶茜草素调控铁死亡的核心靶点。结论 大叶茜草素主要通过调节GPX4介导的铁死亡发挥抗肝细胞癌作用。

茜草中大叶茜草素、羟基茜草素含量测定方法优化的实验研究

目的 优化茜草中大叶茜草素、羟基茜草素的HPLC含量测定方法。方法采用LUBEXEcosilC18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇-乙腈-0．05％磷酸水（25：50：25），流速1．0mL·min-1检测波长为250nm。结果大叶茜草素和羟基茜草素分别在19．34—161．20μg·mL-1（r=0．9999）和12．16～101．30μg·mL-1（r=0．9999）范围内呈良好线性，平均回收率分别为97．27％（RSD=1．91％）和100．00％（RSD=1．87％）。结论该方法操作简单，重复性好，可作为茜草中大叶茜草素和羟基茜草素的含量测定方法，为合理制定茜草的含测方法提供参考。

参茜固经颗粒中大叶茜草素含量测定

目的建立测定参茜固经颗粒(党参、茜草、地黄、女贞子等)中大叶茜草素含量的高效液相色谱方法。方法采用安捷伦ExtendC18(250mm×4.6mm,5μm)柱,以甲醇水四氢呋喃(310∶90∶3)为流动相,流速1.0mL·min-1;在249nm波长处检测。结果大叶茜草素在0.056～0.29μg范围内呈线性关系,r=0.9999;平均加样回收率为99.36,RSD=1.60(n=5)。结论该方法简便准确,重现性好,可用于测定参茜固经颗粒中的大叶茜草素含量。

氢核磁共振法测定中药茜草中大叶茜草素和羟基茜草素的含量

综合运用一维和二维核磁共振波谱技术,对茜草提取物中大叶茜草素、羟基茜草素的信号进行指认归属,并建立氢核磁共振法同时测定茜草中大叶茜草素、羟基茜草素含量的方法。在综合考虑茜草提取物的信号分离度及溶解性的基础上,最终选定氘代二甲基亚砜为测试溶剂,以大叶茜草素的烯烃信号(δ_H5.77,H-2')和羟基茜草素的H-3信号(δ_H6.67)为定量峰,以顺丁烯二酸为定量内标。该方法具有较好的稳定性、重复性、精密度和准确性,且测定结果与HPLC-UV方法所得数据基本一致。所建立的氢核磁定量方法操作简单,测试时间短,且定量过程中不需要对照品,可用于中药茜草的质量控制及评价。

不同采收期茜草中大叶茜草素含量的动态研究

目的：为确定茜草最佳采收期提供依据。方法：采用HPLC法测定茜草药材不同采收期大叶茜草素的含量。色谱条件：YWG—C18液相色谱柱（10txm，4．6mm×250mm）；甲醇-水-四氢呋喃（160：20：2．7）为流动相，流速1．0mL／min；检测波长为246nm。结果：不同采收期茜草药材中大叶茜草素以夏季为高，即6～8月份。结论：建议茜草药材在夏季采收。

高效液相色谱法测定巴特日七味丸中大叶茜草素含量

建立反相高效液相色谱法测定蒙药巴特日七味丸中大叶茜草素含量的方法。采用SpherisobC18柱,以甲醇-乙腈-水(6∶3∶1)为流动相;流速为1 0ml·min- 1;检测波长2 5 0nm。线性范围0 32 4～1 6 2 μg ,r =0 9994 ;平均回收率为10 0 4 5 % ,RSD =1 0 4 % (n =5 )。方法简便、快速、准确。

HPLC法测定茜草及不同炮制品中大叶茜草素

目的测定茜草及炮制品中大叶茜草素。方法 Purospher STAR RP-18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇-水-四氢呋喃(90∶9.3∶0.7);体积流量1.0 mL/min;检测波长250 nm;柱温25℃。结果茜草生品中大叶茜草素的质量分数为0.52%,炒茜草为1.07%,茜草炭为0.66%。结论不同的炮制方法对大叶茜草素的量产生不同的影响。

HPLC测定消肿止痛膏中大叶茜草素的含量

目的建立测定消肿止痛膏中大叶茜草素含量的方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Kromasil C18（200mm×4．6mm，5μm）；流动相为甲醇-水-四氢呋喃（310：90：3）；流速1ml·min^-1；柱温35℃；检测波长250nm。结果线性范围0．041～0．830μg（r=0．9999），平均回收率为97．9％（RSD=1．33％，n=5）。结论所建方法操作简便，测定结果准确，重复性好。可用于消肿止痛膏的质量控制。

巴特日七味丸中大叶茜草素与硫化汞的测定

目的建立蒙成药巴特日七味丸中大叶茜草素与硫化汞的定量测定方法。方法大叶茜草素测定为高效液相色谱法,硫化汞的测定采用硫氰酸铵滴定法。结果大叶茜草素在0.233～2.33μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.997 8),回收试验结果的均值为99.6%,RSD为1.22%(n=9);巴特日七味丸中含银朱以硫化汞计,测得质量分数在27.18～45.23 mg/g之间。结论方法的准确性及重复性好,可作为巴特日七味丸的质量控制方法。

大叶茜草素抑制大鼠CFSC-2G细胞活化和胶原合成

目的:观察大叶茜草素(mollugin)对大鼠肝星状细胞系CFSC-2G活化和胶原合成的影响并探讨其分子机制。方法:小剂量(10μmol/L)过氧化氢(H_2O_2)诱导CFSC-2G细胞30 min后,再加入不同浓度(0、20、40、60和120μmol/L)的mollugin处理。MTT法检测细胞活力,real-time PCR和Western blot法分别检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、核因子κB(NF-κB)p65、Bcl-2、Bcl-x L、Bax以及肝星状细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的mRNA和蛋白表达,并用Western blot法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的磷酸化水平。结果:低剂量H_2O_2可以诱导CFSC-2G细胞活化,mollugin明显促进p38 MAPK磷酸化,上调Nrf2和HO-1的mRNA和蛋白表达,下调NF-κB p65、Bcl-2和Bcl-x L的mRNA和蛋白表达,抑制H_2O_2诱导活化的CFSC-2G细胞活力和胶原合成(P<0.05)。结论:Mollugin可能通过上调Nrf2和HO-1并下调NF-κB p65和Bcl-2表达,抑制CFSC-2G细胞活化和胶原合成。

RP-HPLC法测定乌兰三味汤散中大叶茜草素的含量

采用RP -HPLC法测定蒙成药乌兰三味汤散中大叶茜草素的含量。选用HypersilC1 8柱 ,流动相 :甲醇 -水 -四氢呋喃 (340∶60∶4) ;流速 :1 0ml·min-1 ,检测波长 :2 50nm。大叶茜草素在 0 1 60 8～0 80 4 0 μg·ml-1 范围内线性关系良好 (r=0 9997) ,平均回收率为 :98 7% ,RSD =1 4% ,本方法简便、快速、准确 ,可作为本品质量控制方法。

超声提取大叶茜草素的工艺研究

目的研究超声提取茜草中大叶茜草素的工艺。方法进行单因素超声提取实验,考察超声功率、占空比、提取时间、乙醇体积分数、料液比等因素对大叶茜草素提取率的影响。结果实验范围内,最适宜的工艺提取条件为:提取时间30min,超声功率600～800W,料液比(g·mL-1)1∶5,乙醇体积分数70%,占空比(s/s)5∶1,在此条件下大叶茜草素的平均提取率为1.07%。结论采用超声提取工艺,提取时间短,方法简单可行,有较高的工业应用价值。

紫外光谱法选择大叶茜草素印迹聚合物制备功能单体

为了制备对大叶茜草素具有仿生识别能力的分子印迹聚合物,建立了紫外光谱法选择大叶茜草素分子印迹聚合物制备功能单体及比例的方法.利用紫外光谱法,测定了大叶茜草素与甲基丙烯酸、丙烯酰胺和4-乙烯基吡啶3种常见功能单体在乙腈中的相互作用,发现大叶茜草素与甲基丙烯酸混合溶液紫外吸收的吸光度值发生了一定的增强,说明两者能够在乙腈中形成一定的氢键作用.通过测定大叶茜草素与不同比例的甲基丙烯酸混合溶液的紫外吸收光谱的变化,发现当大叶茜草素与甲基丙烯酸物质的量之比为1∶4时,混合溶液紫外吸收与大叶茜草素溶液的差值最大,表明该比例条件下两者之间形成的氢键最强、最稳定.因此,采用甲基丙烯酸为功能单体,功能单体与模板分子比例为4∶1时制备的分子印迹聚合物将对大叶茜草素具有最佳的识别能力.

陕西省9个地市产茜草药材中大叶茜草素含量比较研究

目的对陕西省9个地市产的茜草药材进行质量评价。方法采用高效液相色谱法测定茜草不同部位中大叶茜草素含量。结果不同产地茜草药材中大叶茜草素含量差异较大,且同一药材不同部位中大叶茜草素的含量高低也不一致。结论茜草药材中大叶茜草素的含量高低与产区的生态环境和入药部位的组织结构有关。

HPLC法测定茜草饮片中大叶茜草素和羟基茜草素的含量

目的建立高效液相色谱法测定茜草饮片中大叶茜草素和羟基茜草素的含量。方法采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-0.2%磷酸(25:52:23),流速:1.0mL.min-1,检测波长:250 nm,柱温:30℃。结果大叶茜草素和羟基茜草素分别在(10～500)μg.mL-1和(5～200)μg.mL-1范围内线性良好;平均回收率分别为103.12%(RSD=2.27%)和98.72%(RSD=1.31%)。结论本方法准确、重现性好,可作为茜草饮片中大叶茜草素和羟基茜草素的含量测定方法。

陕产茜草大叶茜草素的最佳提取工艺研究

目的优选陕产茜草中大叶茜草素的最佳提取工艺。方法比较浸渍法、超声提取法、加热回流法3种提取方式,并采用L9(34)正交试验,以大叶茜草素含量为指标,对影响茜草的乙醇加热回流提取工艺的因素水平进行了研究。结果茜草的最佳提取工艺为用80%乙醇10倍量加热回流提取3次,每次1.5小时。结论乙醇加热回流提取工艺用于陕产茜草大叶茜草素的提取稳定可行。

不同厂家茜草配方颗粒中大叶茜草素含量的比较

目的考察不同厂家茜草配方颗粒中大叶茜草素的含量。方法采用超声提取方法处理茜草配方颗粒样品,用高效液相色谱法进行含量测定。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-0.2%磷酸(25∶52∶23),流速:1.0 mL/min,检测波长为250 nm,柱温:30℃。结果大叶茜草素在1～50μg/mL范围内线性良好(r=0.9999);平均回收率分别为99.70%(RSD=1.80%)。结论不同厂家茜草配方颗粒中大叶茜草素的含量差异显著。

D_(101)大孔树脂分离茜草中大叶茜草素的研究

目的探讨D101树脂对大叶茜草素的分离方法。方法通过采用HPLC测定大叶茜草素含量,考察D101树脂对茜草提取液中大叶茜草素的吸附及解吸条件。结果可采用茜草的70%乙醇提取液直接上样进行吸附,并用95%乙醇洗脱,干燥后固形物中大叶茜草素的纯度达73.5%。结论 D101树脂适合用于分离大叶茜草素。分离工艺简便,可用于工业化生产。