基于自噬抑制剂3-MA介导的大叶蛇葡萄总黄酮提取物对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨抑制自噬时,大叶蛇葡萄总黄酮提取物(total flavonoid extract,TFE)对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法针对人宫颈癌细胞Hela、人肺癌细胞A549、人肝癌细胞SMMC-7721、人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常肝细胞L-02,采用MTT法优选敏感细胞株;通过TFE与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)联合运用,采用MTT法检测其对敏感细胞增殖的抑制作用;透射电子显微镜及Hoechst 33258单染法观察细胞的形态学变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白和通路蛋白(死亡受体途径、线粒体途径、内质网应激途径)的表达水平;免疫荧光法检测线粒体途径关键蛋白Cyt-c表达,并选择自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,RA)进行反向验证。结果TFE可浓度依赖性抑制人乳腺癌细胞增殖,MCF-7细胞为敏感细胞株,与TFE组相比,TFE+3-MA组在24、48、72 h对MCF-7细胞的抑制率均明显增加(P<0.01),细胞数量减少、间隙增大,凋亡小体增多,凋亡率升高(P<0.01),Bax/Bcl-2(P<0.01)、cleaved caspase-3(P<0.01)、Cyt-c(P<0.05)、FADD、cleaved caspase-12的表达量均升高,核内凋亡蛋白Cyt-c表达增加;TFE+RA组荧光减弱,逆转了TFE诱导的线粒体途径凋亡。结论TFE能明显抑制人乳腺癌细胞的增殖,抑制自噬时可能通过线粒体途径促进MCF-7细胞凋亡,激活自噬可逆转细胞凋亡。

2型糖尿病家兔模型的建立及大叶蛇葡萄总黄酮降血糖作用研究

目的:建立2型糖尿病家兔模型,研究大叶蛇葡萄总黄酮对糖尿病家兔的降糖作用及机理。方法:通过给家兔饲以高脂高糖饲料并耳缘静脉注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ),建立2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)兔模型,给药5周后检测家兔空腹血糖浓度,血清中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)水平,观察肾脏组织病理变化。结果:制备出稳定的T2DM家兔模型。证实大叶蛇葡萄总黄酮可明显降低糖尿病家兔血糖,减轻其肾组织损害,显著抑制iNOS的活性,稳定血清NO的含量。结论:大叶蛇葡萄总黄酮对T2DM有一定的治疗作用。