基于网络药理学探讨银杏叶提取物治疗脓毒症相关性脑病的作用机制

目的:本研究旨在探讨银杏叶提取物(GBE)治疗脓毒症相关性脑病(SAE)的作用机制。方法:利用TCMSP数据库,筛选出GBE的主要活性成分;从GeneCards、OMIM、Disgenet和Drugbank疾病数据库中寻找与SAE相关的靶点。获取银杏叶活性成分与SAE交集靶点,通过String数据库建立蛋白-蛋白互作(PPI)网络,利用Cytoscape 3.9.1软件筛选关键靶点。使用R语言Cluster Profiler软件包对关键靶点进行基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;最后进行分子对接。结果:获取药物与疾病交集靶点101个,确定TOP 5关键靶点为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、肿瘤抑癌基因p53(TP53)、V-Rel网状内皮增生病毒癌基因同源物A(RELA)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-6(IL-6)。主要富集通路包括磷酸肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、白细胞介素17(IL-17)、TNF、核因子κB(NF-κB)和Toll样受体(TLR)信号通路等。分子对接结果显示TNF-槲皮素、TNF-木犀草素、IL6-山奈酚均能稳定结合。结论:GBE可能通过AKT1、TP53、RELA、TNF、IL-6等靶点,调控PI3K/Akt、IL-17、NF-κB及TLR信号通路,发挥治疗SAE的作用。

显齿蛇葡萄叶提取物体外抗氧化效果研究

为研究显齿蛇葡萄叶提取物的体外抗氧化效果,以维C和茶多酚为对照,分别测定了3种抗氧化物对ABTS自由基、超氧阴离子、DPPH自由基、羟基等的清除率。结果表明,3种抗氧化物的清除率均随其质量浓度的增加而增大,抗氧化效果随其质量浓度的增加而增强。当质量浓度为150μg/mL时,3种抗氧化物对ABTS自由基清除率均为99%,三者抗氧化效果相同;显齿蛇葡萄叶提取物抗超氧阴离子氧化效果远超维C和茶多酚,最高清除率为86.31%;不同质量浓度的显齿蛇葡萄叶提取物对DPPH自由基的清除率均高于90%;低质量浓度时,显齿蛇葡萄叶提取物的抗羟基自由基氧化效果最好,当质量浓度超过250μg/mL时,其与茶多酚具有相同的抗氧化效果。研究结果可为显齿蛇葡萄叶提取物在食品抗氧化剂研究与开发方面提供参考。

基于自噬抑制剂3-MA介导的大叶蛇葡萄总黄酮提取物对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨抑制自噬时,大叶蛇葡萄总黄酮提取物(total flavonoid extract,TFE)对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法针对人宫颈癌细胞Hela、人肺癌细胞A549、人肝癌细胞SMMC-7721、人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常肝细胞L-02,采用MTT法优选敏感细胞株;通过TFE与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)联合运用,采用MTT法检测其对敏感细胞增殖的抑制作用;透射电子显微镜及Hoechst 33258单染法观察细胞的形态学变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白和通路蛋白(死亡受体途径、线粒体途径、内质网应激途径)的表达水平;免疫荧光法检测线粒体途径关键蛋白Cyt-c表达,并选择自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,RA)进行反向验证。结果TFE可浓度依赖性抑制人乳腺癌细胞增殖,MCF-7细胞为敏感细胞株,与TFE组相比,TFE+3-MA组在24、48、72 h对MCF-7细胞的抑制率均明显增加(P<0.01),细胞数量减少、间隙增大,凋亡小体增多,凋亡率升高(P<0.01),Bax/Bcl-2(P<0.01)、cleaved caspase-3(P<0.01)、Cyt-c(P<0.05)、FADD、cleaved caspase-12的表达量均升高,核内凋亡蛋白Cyt-c表达增加;TFE+RA组荧光减弱,逆转了TFE诱导的线粒体途径凋亡。结论TFE能明显抑制人乳腺癌细胞的增殖,抑制自噬时可能通过线粒体途径促进MCF-7细胞凋亡,激活自噬可逆转细胞凋亡。

圆叶葡萄和欧亚种葡萄叶片提取物对葡萄霜霉病的防治作用

为了明确不同抗性葡萄的叶片提取物对葡萄霜霉病的防治作用,以对葡萄霜霉病免疫的圆叶葡萄品种Noble及感病的欧亚种葡萄品种赤霞珠的幼叶和成龄叶乙醇提取物(叶片经干燥、粉碎后,以95%乙醇进行超声提取)为试材,设置不同浓度梯度,检测其对葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola,葡萄生单轴霉)孢子囊和游动孢子萌发的影响,同时测定其对霜霉病的室内防治作用。结果表明,两种抗性葡萄的叶提取物对葡萄霜霉病菌孢子囊和游动孢子的萌发均具有抑制作用。1 mg/mL叶片提取物处理下孢子囊萌发率即显著低于对照(无菌水和5%乙醇),而且叶片提取物浓度从10 mg/mL增加到50 mg/mL时孢子囊萌发率显著下降。在10 mg/mL叶片提取物处理下游动孢子萌发率即显著低于对照。两种抗性葡萄幼叶和成龄叶提取物浓度为10、25和50 mg/mL时,仅10 mg/mL“赤霞珠”成龄叶提取物对葡萄霜霉病的室内防治效果为95.0%,其余处理均为100.0%。“Noble”和“赤霞珠”叶提取物具有抑制霜霉病菌孢子囊和游动孢子萌发的作用,其室内防治效果显著。

大叶蛇葡萄乙醇提取物对2215细胞HBsAg、HBeAg表达抑制作用的实验研究

目的:研究大叶蛇葡萄乙醇提取物的抗乙肝病毒(HBV)作用。方法:将大叶蛇葡萄乙醇提取物作用于乙肝病毒DNA转染人肝癌细胞系2215细胞,以细胞病变(CPE)观察药物对2215细胞的毒性,用酶联免疫测定法(ELISA)检测药物对培养8天的2215细胞分泌的表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)表达的抑制作用。结果:大叶蛇葡萄乙醇提取物的半数毒性浓度(TC50)为250μg/ml,最大无毒浓度(TC0)为125μg/ml;乙醇提取物对培养8天的2215细胞HBsAg、HBeAg表达抑制作用的半数有效浓度(IC50)分别为43.1μg/ml、54.8μg/ml,治疗指数(TI)值分别为5.8、4.7。结论:大叶蛇葡萄乙醇提取物具一定的体外抗乙肝病毒的作用,为有效物质部位。

银杏叶提取物抗氧化机制的网络药理学研究

目的基于网络药理学研究银杏叶提取物抗氧化的机制。方法通过UPLC-Q-TOF MS分析银杏叶提取物中的化学成分,在PubChem数据库中查询其化学成分的Canonical SMILES号,利用Swiss Target Prediction数据库查找其化学成分的靶点,使用UniProt数据库对其进行批量标准化后,与CTD数据库、GeneCards数据库比对得到银杏叶提取物抗氧化作用的靶点,利用STRING数据库构建靶蛋白相互作用网络,进行GO生物功能与模块分析、KEGG通路富集分析,Cytoscape构建成分-靶点-通路网络图。结果从银杏叶提取物中筛选出31种化学成分,检索出28个靶蛋白,与抗氧化有关的靶点有26个。银杏叶提取物发挥抗氧化作用可能涉及AKT1、MAPK1、MAPK14靶点,以及MAPK信号通路、Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路等相关通路。结论本研究反映了银杏叶提取物多成分、多靶点、多通路的作用特点,可为后续相关作用新机制研究提供线索和启示。

基于网络药理学研究连翘叶提取物通过AMPK抗恩诺沙星诱导肝损伤的作用

【目的】运用网络药理学并通过体内试验研究连翘叶提取物(Forsythia suspense leaves extract,FSLE)治疗恩诺沙星(enrofloxacin,ENR)诱导的肝损伤(enrofloxacin induced liver injury,EILI)的作用机制。【方法】采用乙醇-酶法提取连翘叶有效成分,通过液相-质谱法(LC-MS)鉴定FSLE主要的化学成分。利用PubChem、Swiss ADME和Swiss Target Prediction数据库分析预测FSLE有效活性成分及作用靶点,通过GeneCards疾病数据库搜索EILI的作用靶点。运用STRING在线网站及Cytoscape 3.8.0软件构建FSLE治疗EILI的核心靶点,借助Metascape网站进行GO功能及KEGG通路富集分析,并用Cytoscape 3.8.0软件绘制“成分-靶点-信号通路”可视化网络。通过体内试验验证FSLE抗EILI的药理作用,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测不同处理组腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的表达,通过商业化试剂盒检测还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性。【结果】结合LC-MS与各数据库分析得出FSLE活性成分有20种,对应靶点338个;EILI疾病靶点913个;药物-疾病交集靶点124个,包含FSLE治疗EILI核心靶点12个,KEGG通路20条,其中AMPK通路与FSLE治疗EILI密切相关。动物试验结果显示,FSLE可显著降低EILI小鼠血清中谷丙转氨酶(alanine transferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate transferase,AST)活力(P<0.05)。FSLE可显著升高小鼠肝脏AMPK的基因和蛋白表达量水平(P<0.05)。与正常对照组相比,FSLE可显著降低小鼠肝脏组织中MDA和H_(2)O_(2)含量(P<0.05),显著升高GSH含量和SOD活力(P<0.05),抑制EILI诱导的肝脏氧化应激。【结论】FSLE可通过上调AMPK的表达抑制肝脏氧化应激发挥抗EILI的作用,对肝损伤药物的开发具有重要的意义。

基于网络药理学探究银杏叶提取物治疗脑血管痉挛的作用机制

基于网络药理学方法预测银杏叶提取物治疗脑血管痉挛的潜在靶点及信号通路,阐述其作用机制。利用TCMSP平台筛选银杏叶中生物利用度(OB)≥30%和类药性(DL)≥0.18的活性成分,GeneCards和Swiss Target Prediction数据库检索脑血管痉挛疾病相关蛋白靶点和活性成分的相关靶点,并用Venny平台获取活性成分与脑血管痉挛疾病之间的共有靶点,STRING数据库构建靶蛋白之间的相互作用网络图(PPI),进行GO生物功能模块分析、KEGG通路富集分析,并采用Cytoscape软件构建可视化的"活性成分-潜在靶点"网络图。从银杏叶中筛选出27个活性成分,脑血管疾病和活性成分共有82个靶点,银杏叶提取物治疗脑血管痉挛疾病涉及到EDNRA、APOB、EGFR、EGF、EDN1等多个靶点,以及HIF-1信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、类风湿性关节炎等相关通路。银杏叶提取物具有治疗脑血管痉挛疾病的功效可能是由多个活性成分作用于多个相关靶点,通过调节多个通路的共同结果。

银杏叶提取物对淡水石斑鱼血清生化指标和肝功能的影响

试验旨在探究不同水平银杏叶提取物(EGB)对淡水石斑鱼血清抗氧化功能、肝功能、血脂代谢及血清葡萄糖的影响。选取平均体重为(60.30±0.25)g的淡水石斑鱼240尾,随机分为4组,每组3个重复,每个重复20尾,G0组(对照组)、G1组、G2组和G3组分别在基础饲料中添加0、50、100、200 mg/kg的EGB。试验期28 d。结果显示,试验21 d时,与对照组相比,G2组试验鱼血清中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量提高(P<0.05);试验14~21 d时,与对照组相比,G2组试验鱼血清葡萄糖(GLU)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)和丙二醛(MDA)的含量及过氧化氢酶(CAT)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性降低(P<0.05)。研究表明,饲料中添加EGB可以调节淡水石斑鱼血脂代谢,增强淡水石斑鱼的抗氧化能力,可用于预防和治疗高脂血症,EGB添加量为100 mg/kg时投喂14~21 d效果较好。

银杏叶提取物在精神科应用的神经药理学基础与临床研究

银杏树是一种主要产于我国的古树。银杏叶具有很高的药用价值,我国古代就发现银杏叶提取物能增加人脑血液循环,使人精神清爽和延缓衰老。银杏叶提取物(Ginkgo biloba Extract,GbE)最初由一位德国药剂师于1965年介绍到医疗用途上。

基于网络药理学探究银杏叶提取物治疗突发性耳聋的机制

目的 基于网络药理学探究银杏叶提取物治疗突发性耳聋的机制.方法 通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)获取银杏叶提取物活性成分,从GeneCards数据库获得银杏叶提取物活性成分对应的靶点及突发性耳聋相关的靶点.经String数据库获取疾病靶点蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)数据.应用Cytoscape3.7.1软件构建成分-靶点-疾病网络,并利用插件ClueGO进行GO分析和KEGG通路分析.结果 获得银杏叶提取物中27种活性成分,223种活性成分靶点和744个疾病靶点,其中含24个银杏叶提取物治疗突发性耳聋的潜在靶点.GO分析主要涉及细胞稳态,自噬的负调控,脂肪酸氧化,激素分泌的负调节,调节单加氧酶、一氧化氮合酶与端粒酶活性和调节细胞凋亡等生物过程.KEGG信号通路主要涉及卡波西肉瘤相关的疱疹病毒感染、细胞凋亡、p53信号通路和VEGF信号通路等.结论 KCNH2、BDNF、NOS3、ADIPOQ、CASP3等靶点可能是银杏叶提取物治疗突发性耳聋的潜在靶点.

基于网络药理学与分子对接探究银杏叶提取物治疗动脉粥样硬化的作用机制

目的运用网络药理学及分子对接技术探究银杏叶提取物治疗动脉粥样硬化的作用机制。方法在TCMSP平台筛选出银杏叶的活性成分,在Swiss Target Prediction数据平台和GeneCards数据库收集活性成分对应的靶点,在GeneCards和DisGeNET数据库检索“动脉粥样硬化”的相关靶点,通过Venny平台获得两者间的共同靶点。将共同靶点导入STRING数据库,利用Cytoscape 3.8.0构建蛋白互作网络和核心靶点网络,并获取拓扑参数。利用DAVID进行GO和KEGG通路富集分析,并对结果运用微生信和OmicShare平台进行图像可视化处理。采用Cytoscape 3.8.0软件进行“活性成分-靶点-疾病”网络模型构建与分析,最后使用AutoDock、Pymol软件进行重要成分和核心靶点的分子对接并预测其结合能力。结果从银杏叶中筛选出27个活性成分,动脉粥样硬化和活性成分的共同靶点有163个,其中核心靶点有7个,主要有关通路有PPAR信号通路、TNF信号通路以及Proteoglycans in cancer信号通路等。分子对接结果显示,所有核心靶点与活性成分的分子对接结合自由能均较小,即具有较好的亲和力,其中槲皮素-HRAS的亲和力最大,山柰酚-VEGFA次之。结论银杏叶提取物可能从抗氧化应激、抑制炎症激活、调节血管内皮细胞的凋亡和功能障碍等多方面发挥对动脉粥样硬化的治疗作用,为银杏叶提取物的开发和应用提供新的思路和理论依据。

基于网络药理学的银杏叶提取物防治老年性聋的作用机制研究

目的 基于网络药理学研究银杏叶提取物防治老年性聋的的潜在作用机制,并通过动物实验进行初步验证。方法 运用中药系统药理学分析平台(TCMSP)筛选银杏叶的有效成分,GeneCards数据库获得老年性聋相关靶点基因,微生信对基因本体论(GO)、基因组百科全书(KEGG)进行功能富集,Cytoscape3.8.2构建疾病-靶点-通路网络图。采用D-半乳糖诱导SD大鼠制备老年性聋的动物模型,腹腔注射低、中、高剂量(10、20、30 mg·kg^(-1))的银杏叶提取物,运用免疫荧光染色耳蜗基底膜铺片观察毛细胞形态变化;透射电子显微镜观察螺旋神经节细胞及线粒体超微结构变化;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清谷胱甘肽S转移酶(GST)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)含量;免疫印迹法检测Bcl-2、Bax蛋白表达及Bcl-2/Bax比值变化。结果 GO富集主要涉及细胞衰老、过氧化物酶成分、氧化还原酶的活性等;KEGG富集相关性较高的通路包括细胞凋亡通路和氧化应激相关的谷胱甘肽代谢通路,与凋亡相关的靶点基因包括:Bcl-2、Bax、AKT1、TNF等;与谷胱甘肽代谢相关靶点基因涉及到:GSTP1、GSTM1等。动物实验证实银杏叶提取物可减轻毛细胞丢失,降低螺旋神经节细胞及线粒体损伤,提高GST、T-SOD含量,降低MDA含量,上调Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值,下调Bax表达。结论 银杏叶提取物可能通过Bcl-2/Bax通路减轻耳蜗螺旋神经节细胞和毛细胞的氧化应激和细胞凋亡来延缓老年性聋的进程。

大叶蛇葡萄不同提取物总黄酮含量测定

目的比较不同提取方法所得大叶蛇葡萄提取物的总黄酮含量。方法分别用乙醇加热回流法和渗漉法提取大叶蛇葡萄总黄酮,以蛇葡萄素为对照品,采用紫外分光光度法,在311 nm波长处测定。结果平均加样回收率为99.36%,RSD为1.59%,回流法所得提取物总黄酮的含量为640.74 mg.g-1;渗漉法所得提取物总黄酮含量为672.38mg.g-1。结论该测定方法操作简单,准确可靠,可作为大叶蛇葡萄提取物总黄酮的含量测定方法。渗漉法所得提取物中总黄酮含量略高于回流法。

显齿蛇葡萄叶提取物对苯并芘染毒小鼠血清和肝脏抗氧化酶的影响

目的:探讨显齿蛇葡萄叶提取物对苯并芘染毒小鼠血清和肝脏抗氧化酶的影响。方法:用显齿蛇葡萄叶提取物给小鼠灌服2周后,一次性灌胃苯并芘染毒,取血和肝脏测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:显齿蛇葡萄叶提取物能明显提高小鼠血清和肝脏中SOD、GSH-PX、CAT的活性,降低γ-GT活性及MDA含量。结论:显齿蛇葡萄叶提取物具有抗氧化作用,可能是其抗致癌物作用机制之一。

大叶蛇葡萄石油醚提取物抗乙肝病毒体外实验研究

目的研究大叶蛇葡萄石油醚提取物体外抗乙肝病毒(HBV)的作用。方法将大叶蛇葡萄石油醚提取物作用于乙肝病毒DNA转染人肝癌细胞系2215细胞,以细胞病变(CPE)观察药物对2215细胞的毒性,用酶联免疫测定法(ELISA)检测药物对培养8 d的2215细胞分泌的表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)表达的抑制作用。结果石油醚提取物的半数毒性浓度(TC50)为99.1μg/ml,最大无毒浓度(TC0)为62.5μg/ml;石油醚提取物对培养8 d的2215细胞的HBsAg、HBeAg表达抑制作用的半数有效浓度(IC50)分别为4.2μg/ml2,6.3μg/ml,治疗指数(TI)值分别为23.6,3.8。结论大叶蛇葡萄石油醚提取物具一定的体外抗乙肝病毒的作用,为有效部位。

显齿蛇葡萄幼嫩茎叶提取物抑菌作用的研究

用三种不同提取方法浸提显齿蛇葡萄幼嫩茎叶中有效成分，对其进行真菌和细菌的抑制作用及其最低抑菌浓度研究。结果表明：显齿蛇葡萄幼嫩茎叶提取物对金黄葡萄球菌、枯草杆菌均有很强的抑制作用，对黑曲霉、黄曲霉、青霉及交链霉均有不同程度的抑制效果。对黑曲霉、黄曲霉最低抑菌浓度分别是０．７％、１．１％，对金黄葡萄球菌、枯草杆菌最低抑菌浓度均小于０．０７％。

银杏叶提取物对中枢神经系统药理作用的研究进展

目的:研究银杏叶提取物(EGb)对中枢神经系统的药理作用的进展。方法:检索大量国内外文献资料并进行分析、整理和归纳。结果:综述了EGb对脑缺血损伤、神经可塑性和神经退行性疾病等中枢神经系统疾病的药理作用。结论:EGb对中枢神经系统的药理作用主要为:对脑缺血损伤的保护、神经可塑性的提高、对神经退行性疾病的改善等,但对学习记忆的提高作用及其机制有待进一步研究。

银杏叶提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及其降血糖作用机制

目的:通过体外药效学实验研究银杏叶提取物(GBE)对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,探讨其降血糖的作用机制,为开发利用银杏叶资源提供实验依据。方法:提取大鼠小肠中的α-葡萄糖苷酶液,利用葡萄糖试剂盒测定酶活力;体外抑制实验分为正常对照组、阳性对照组及GBE高、中、低剂量组(10.0、5.0、2.5 g.L-1),对反应体系中的葡萄糖浓度进行测定,计算药物对蔗糖酶的抑制率;离体器官实验分为正常对照组、阴性对照组、阳性对照组和GBE高、中、低剂量组(10.0、5.0、2.5 g.L-1),对反应体系中的淀粉光密度值进行测定,计算药物对淀粉酶的抑制率;半数抑制率(IC50)实验将GBE分为7个剂量组,分别计算药物对α-糖苷酶的抑制率及IC50;抑制曲线实验分为正常对照组、阳性对照组及GBE组,计算反应速率,以底物浓度的倒数作为横坐标,以反应速率的倒数作为纵坐标,绘制抑制曲线。结果:大鼠小肠酶活力值为67.2活力单位。与正常对照组比较,GBE高、中、低剂量组蔗糖酶抑制率明显增加(P<0.001,P<0.001,P<0.01);与正常对照组比较,GBE高剂量组大鼠小肠中淀粉酶抑制率明显增加(P<0.01);GBE对蔗糖酶的IC50值为0.758 6 g.L-1,对淀粉酶的IC50值为0.910 1 g.L-1;GBE组趋势线与正常对照组斜率相近,且截距大于正常对照组趋势线。结论:GBE对α-糖苷酶具有良好的抑制作用,其作用机制为反竞争性抑制。